VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION

Transcriptie

1 FAVV BESTUUR LABORATORIA / AFSCA ADMINISTRATION DES LABORATOIRE VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / Date du dernière adaption Microscopische identificatie en bepaling van het gehalte (sclerotiën van Claviceps purpurea Tul.) in granen I-MET-FLVVT-111 Microsocpie niet gemalen granen december 2012

2 FAVV BESTUUR LABORATORIA / AFSCA ADMINISTRATION DES LABORATOIRE Overzicht van de prestatiekenmerken: - Bepaalbaarheidsgrens (LOQ): 80 mg/kg - Aantoonbaarheidsgrens (LOD): 40 mg/kg - Herhaalbaarheid, intralaboratoriumreproduceerbaarheid en terugvinding: niveau herhaalbaarheid reproduceerbaarheid terugvinding LOQ 4,0% 4,0% 99,4% 500 mg/kg 6,9% 9,8% 94,0% 1000 mg/kg 4,9% 5,7% 97,2% 1500 mg/kg 4,6% 5,4% 98,0% - Meetonzekerheid meetonzeker heid Laag niveau 30% Midden 20% Hoog 15% - Robuustheid, selectiviteit, specificiteit: De prestatiekenmerken worden gehaald in aanwezigheid van storende bestanddelen De validatie voldoet aan de procedure LAB 00 P180 De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn: Vooropgestelde recovery halen van % Inhoud: validatierapporten van 2008 en 2011

3 FAVV BESTUUR LABORATORIA / AFSCA ADMINISTRATION DES LABORATOIRE VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par Microscopische identificatie en bepaling van het gehalte (sclerotiën van Claviceps purpurea Tul.) in granen I-MET-FLVVT-111 Microscopie niet gemalen granen Totaal Naam Nom: Jeroen Vancutsem Handtekeningen - Signatures: Functie - Fonction: Sectiehoofd Get. Microscopie/mycotoxines Datum - Date: 01/02/ /11/2011 Jeroen Vancutsem Marc Verschueren Start - Début: november januari 2008 / augustus 2011 Einde - Fin: Naam Nom: Mandy Lekens Handtekeningen - Signatures: Functie - Fonction: Laboratoriummanager Datum - Date: 24/11/2011 Get. Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P

4 Validatiedossier Microscopische identificatie en schatting van het gehalte (sclerotiën van Claviceps purpurea Tul.) in granen - microscopie 1 Blanco monster Er werden 5 X 6 monsters rogge van 200 g bereid. De rogge werd vooraf nagekeken op aanwezigheid van. Het werd geselecteerd uit natuurlijk gecontamineerde monsters. Er werd gewerkt met korrels die maximaal even groot zijn als normale roggekorrels. 2 De aantoonbaarheidsgrens (LOD) De aantoonbaarheidsgrens werd bepaald door standaardadditie van 1 partikel zodat een concentratie van ongeveer 40 mg/kg bekomen werd. Afgewogen hoeveelheid: Afgewogen Spike Conc. (mg/kg) # deeltjes 1 200,5479 0, , ,458 0,008 39, ,8382 0, , ,0275 0, , ,1776 0, , ,548 0,008 39,7 1 Gemiddelde concentratie 39,2 mg/kg LAB 00 P 180 F 002 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

5 Voorbeeld monster Nr 5: Resultaat: Analist 1 (J. Vancutsem) analysedatum: 3/12/07 Analist 2 (M. Verschueren) analysedatum: 23/11/07 Afgewogen Spike Conc. (mg/kg) # deeltjes Afgewogen Spike Conc. (mg/kg) # deeltjes 1 200,28 0,008 39, ,2 0, , ,75 0,008 40, ,34 0, , ,77 0, , ,66 0, , ,76 0, , ,76 0, ,0 (1) 5 199,94 0, , ,79 0, , ,11 0, , ,08 0, ,3 1 Gemiddelde (mg/kg) 39,6 Gemiddelde (mg/kg) 47,7 gemiddelde recovery 101% gemiddelde recovery 122% STDEV (mg/kg) 1,51 STDEV (mg/kg) 11,9 RSD (%) 3,8 RSD (%) 25,0% herhaalbaarheid = 2,8 x STDEV 4,2 herhaalbaarheid = 2,8 x STDEV 33,3 outliers (Grubbs G hoogste waarde 1,36 outliers (Grubbs G hoogste waarde 1,71 test), G kritisch : 1,89 G laagste waarde 1,29 test), G kritisch : 1,89 G laagste waarde 0,81 Besluit: Op basis van deze resultaten wordt aangetoond dat de aantoonbaarheidsgrens (LOD) 40 mg/kg bedraagt. In elk van de monsters werd 1 partikel teruggevonden. Bij 2 LAB 00 P 180 F 002 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

6 analyses werden 2 deeltjes teruggevonden. Een mogelijke verklaring is de aanwezigheid van kleine op lijkende partikels zoals de aanwezigheid van raapzaad. 3 De bepaalbaarheidsgrens (LOQ) De bepaalbaarheidsgrens werd bepaald door standaardadditie van 2 partikels zodat een concentratie van ongeveer 80 mg/kg bekomen werd. Afgewogen hoeveelheid: Afgewogen Spike Conc. (mg/kg) # deeltjes 1 200,0649 0, , ,9859 0, , ,5667 0, , ,0959 0, , ,2657 0, , ,1254 0, ,0 2 Gemiddelde concentratie 78,7 mg/kg Resultaat: Reeks Reeks 1 3/12/07 J. Vancutsem Afgewogen Uitgezocht Conc. (mg/kg) Rec. (%)# deeltjes 1 199,52 0,015 75,2 100, ,24 0,016 80,3 101, ,23 0, ,9 91, ,84 0,016 80,1 100, ,79 0, ,1 99, ,76 0, ,6 102, ,51 0, ,7 100, ,25 0, ,2* 2 Reeks ,12 0, ,5* 1 23/11/07 M. Verschueren 4 199,75 0, ,6 101, ,73 0, ,1 99, ,78 0, ,1 98, ,27 0, ,2 100,94 2 Reeks ,82 0, ,9 100,50 2 J. Vancutsem 3 198,91 0, ,4 90, /01/ ,49 0, ,1 99, ,54 0, ,1 102, ,30 0, ,7 102, ,13 0, ,2 100, ,64 0, ,9 100,50 2 Reeks 4 M. Verschueren 15-22/01/ ,78 0, ,5 90, ,36 0, ,7 100, ,35 0, ,1 99, ,19 0, ,2 102,86 2 *: voldoet niet aan vooropgestelde eisen voor recovery: weggelaten uit berekening LAB 00 P 180 F 002 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

7 gemiddelde* 74,06 gemiddelde recovery** 99,4% herhaalbaarheid RSD (%) 4,0 2,8 x s r 8,13*** reproduceerbaarheid RSD (%) 4,0 2,8 x S R 8,13*** outliers (Grubbs test) G hoogste waarde OK G kritisch : 2,65 G laagste waarde OK *: niet gecorrigeerd tov spike **:na correctie van de individuele spikes ***: gebaseerd op de gemiddelde waarde Besluit: Op basis van deze resultaten wordt aangetoond dat de bepaalbaarheidsgrens (LOQ) 80 mg/kg bedraagt. Voor 23 van de 24 analyses werden 2 deeltjes teruggevonden. Er wordt een recovery van % vooropgesteld. 4 De herhaalbaarheid en intralaboratoriumreproduceerbaarheid en terugvinding: De herhaalbaarheid en reproduceerbaarheid werden bepaald conform template LAB 00 P 180 F 004 ( _LAB-00-P-180-F-004-valkidatie-berekeningen-formules_v01_NL-FR) De herhaalbaarheid en intralaboratoriumreproduceerbaarheid werd bepaald a. door standaardadditie van 80 mg/kg op rogge (zie 3. bepaalbaarheidsgrens) Besluit: De terugvinding voldoet aan de vooropgestelde eisen b. door standaardadditie van 500 mg/kg op rogge (1/2 norm) Afgewogen hoeveelheid: Voorbeeld nr 5: Afgewogen Spike Conc. (mg/kg) # deeltjes 1 200,3296 0, , ,1298 0, , ,1637 0, , ,4625 0, , ,4496 0, , ,3011 0, ,7 11 Gemiddelde concentratie 504,5 mg/kg LAB 00 P 180 F 002 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

8 Reeks Reeks 1 3/12/07 J. Vancutsem Reeks 2 1/12/07 M. Verschueren Reeks 3 J. Vancutsem 3-13/12/07 Reeks 4 M. Verschueren 23/11-04/12/2008 Afgewogen Uitgezocht Conc. (mg/kg) 1 199,84 0, , ,88 0, , ,88 0, , ,24 0, , ,22 0, , ,04 0, , ,67 0, , ,66 0, , ,64 0, , ,18 0, , ,14 0, , ,98 0, , ,38 0, , ,45 0, , ,38 0, , ,75 0, , ,79 0,1 500, ,77 0, , ,91 0, , ,88 0,09 450, ,25 0, , ,26 0,1 499, ,1 0, ,8 Rec. (%) # deeltjes 94, , , , , , ,79 78,74 83,34 95,85 87,18 80,44 101, , , , , , , , , , ,25 8 gemiddelde* 474,13 gemiddelde recovery* 94,0 herhaalbaarheid RSD (%) 6,94 2,8 x s r 92.12*** reproduceerbaarheid RSD (%) 9,80 2,8 x S R 130,15*** outliers (Grubbs test) G hoogste waarde OK G kritisch : 2,65 G laagste waarde OK *: niet gecorrigeerd tov spike **:na correctie van de individuele spikes ***: gebaseerd op de gemiddelde waarde Besluit: De terugvinding voldoet aan de vooropgestelde eisen LAB 00 P 180 F 002 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

9 c. door standaardadditie van 1000 mg/kg op rogge (norm) Afgewogen hoeveelheid: afgewogen spike Conc. (mg/kg) # deeltjes 1 200,6222 0, , ,0697 0, , ,2523 0, , ,6598 0, , ,3106 0, , ,1815 0, ,6 13 Gemiddelde concentratie 1003,3 mg/kg Reeks Reeks 1 7/12/07 J. Vancutsem Reeks 2 30/11/07 M. Verschueren Reeks 3 J. Vancutsem 7-17/12/07 Reeks 4 M. Verschueren 23/11-4/12/07 Afgewogen Uitgezocht Conc. (mg/kg) 1 200,12 0, , ,31 0, , ,56 0, , ,97 0, , ,74 0,2 1001, ,52 0, , ,36 0, , ,72 0, , ,96 0, , ,34 0, , ,08 0, , ,6 0, , ,17 0, , ,47 0, , ,6 0, , ,5 0, , ,98 0, , ,59 0, , ,86 0, , ,06 0, , ,41 0, , ,16 0, , ,57 0, ,0 Rec. (%) # deeltjes 100, , , , , , ,30 80,40 94,61 100,81 95,43 93,42 100, , , , , ,52 101, , , , ,38 LAB 00 P 180 F 002 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

10 gemiddelde* 975,37 gemiddelde recovery** 97,2 herhaalbaarheid RSD (%) 4,92 2,8 x s r 134,33*** reproduceerbaarheid RSD (%) 5,74 2,8 x S R 156,83*** outliers (Grubbs test) G hoogste waarde OK G kritisch : 2,65 G laagste waarde NOK,recovery OK *: niet gecorrigeerd tov spike **:na correctie van de individuele spikes ***: gebaseerd op de gemiddelde waarde Besluit: De terugvinding voldoet aan de vooropgestelde eisen d. door standaardadditie van 1500 mg/kg op rogge (1,5 X norm) Afgewogen hoeveelheid: Afgewogen Spike Conc. (mg/kg) # deeltjes 1 200,3203 0, , ,861 0, , ,6213 0, , ,6513 0, , ,3498 0, , ,7908 0, ,1 20 Gemiddelde concentratie 1500,5 mg/kg Voorbeeld Nr 5: LAB 00 P 180 F 002 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

11 Reeks Reeks 1 7/12/07 J. Vancutsem Reeks 2 30/11/07 M. Verschueren Reeks 3 J. Vancutsem 7-17/12/07 Afgewogen Uitgezocht Conc. (mg/kg) 1 199,41 0, , ,92 0, , ,7 0, , ,83 0, , ,49 0, , ,85 0, , ,97 0, , ,19 0, , ,97 0, , ,35 0, , ,07 0, , ,6 0, ,4* ,65 0, , ,4 0, , ,6 0, , ,29 0, ,4 Rec. (%) # deeltjes 101, , , , , , ,87 95,20 96,14 97,52 101,84 97,10 98,07 101,83 101,74 100, ,25 0, , ,3 0, ,2 101, ,15 0, ,4 95, ,9 0, ,2 92,30 Reeks ,45 0, ,7 97,14 M ,14 0, ,5 96,06 Verschueren 23/11-4/12/ ,93 0, ,4 78,73 *: voldoet niet aan vooropgestelde eisen voor recovery: weggelaten uit berekening gemiddelde* 1447,45 gemiddelde recovery** 98,0 herhaalbaarheid RSD (%) 4,59 2,8 x s r 189,08*** reproduceerbaarheid RSD (%) 5,35 2,8 x S R 220,39*** outliers (Grubbs test) G kritisch : 2,65 *: niet gecorrigeerd tov spike G hoogste waarde G laagste waarde **:na correctie van de individuele spikes ***: gebaseerd op de gemiddelde waarde Besluit: De terugvinding voldoet aan de vooropgestelde eisen OK NOK,recovery NOK, weggelaten uit berekening LAB 00 P 180 F 002 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

12 5 Meetonzekerheid: Voor het bepalen van de meetonzekerheid werd de volgende strategie gevolgd: Eerst wordt nagegaan of de bias significant is (in dat geval is de bias > 2s RW ). conc. bias (%) 2s RW (%) b > 2s RW? LOQ -0,63 8,0 500 mg/kg -5,99 19, mg/kg -2,81 11, ppb -2,01 10,70 We kiezen de volgende formule: 2 2 uc ubias u(rw) met u bias RMS bias u ( spiking) u(cref, spike) (meetonzekerheid op basis van recovery) en u(r W ) = s R Met RMS 2 bias (%) LOQ 13, mg/kg 108, mg/kg 35, ppb 28,82 u(spiking): de onzekerheid op de spiking zelf. Hierbij wordt de onzekerheid op het gewicht van het afgewogen monster in rekening gebracht. De limiet van de balans is 0,1 mg. De onzekerheid heeft een rechthoekige verdeling. u(spiking) = 0,1 / 2 * 3 mg = 0,029 mg = 0,000014% (op 200g) u(spiking) 2 = u(cref, spike) Dit is de onzekerheid op de referentiewaarde. Hier wordt de onzekerheid genomen op het gewicht van het. 0,1 / 2 * 3 mg = 0,029 mg. Uitgedrukt in % geeft dit volgende relatieve waarden: Conc. u(cref, spike) 2 (%) 80 mg/kg 0, mg/kg 0, mg/kg 0, mg/kg 0,0001 LAB 00 P 180 F 002 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

13 Samengevat LOQ 500 mg/kg 1000 mg/kg 1500 mg/kg RMS 2 bias (%) 13,07 108,39 35,96 28,82 u(spiking) u(cref spike) 2 0, som (u 2 bias ) 13,11 108,39 35,96 28,82 u 2 Rw = s 2 R (rel) LOQ 16,00 0,5 mg/kg 96,04 1 mg/kg 32,95 1,5 mg/kg 28,62 u c LOQ 5,40 0,5 mg/kg 14,30 1 mg/kg 8,30 1,5 mg/kg 7,58 U = 2u c LOQ 10,79% 0,5 mg/kg 28,60% 1 mg/kg 16,60% 1,5 mg/kg 15,16% Samengevat Relatieve meetonzekerheid: LOQ 10,79 0,5 mg/kg 28,60 1 mg/kg 16,60 1,5 mg/kg 15,16 LAB 00 P 180 F 002 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

14 Besluit meetonzekerheid: meetonzekerheid gebied LOQ-1/2 norm 30% gebied ½ norm 3/2 norm 20% gebied > 3/2 norm 15% 6 ringonderzoeken jaar organisatie Resultaat (%) Referentiewaarde (%) Gemiddelde resultaat uit ringtest STDEV 2004 IAG 0,975 0,99 0,86 0,35 0,254 0,25 0,25 0,20 0,05 0,05 0,055 0,088 0,226 0,25 0,27 0, IAG 0,165 0,15 0,12 0,061 0,263 0,25 0,21 0,086 0,0482 0,03 0,051 0,035 LAB 00 P 180 F 002 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

15 7 Robuustheid, selectiviteit en specificiteit: Analyse van in aanwezigheid van storende bestanddelen: negerzaad, koolzaad, zwarte rijst Door een derde (Rudy Van Meerbeek, afdeling mycotoxines) werden 6 monsters rogge (250g) blind bereid. De enige gegeven aanwijzingen waren: storende bestanddelen en 0-0,5g en minstens 1 blanco. Volgende monsters werden bereid en nadien geanalyseerd door 2 bevoegde analisten: Jeroen Vancutsem en Marc Verschueren Analist monsternr Marc Verschueren Jeroen Vancutsem ,0400g (160 mg/kg, 5 partikels), koolzaad 0,2160g, Negerzaad 162 mg/kg (6 deeltjes) 156 mg/kg (5 deeltjes) 0,1520g, Zwarte rijst 0,2836g ,1530g (612 mg/kg, 7 partikels),, Negerzaad 0,2948g 615 mg/kg (6deeltjes) 640 mg/kg (7 deeltjes) koolzaad 0,068g, Negerzaad 0,058g Afwezig Afwezig ,1316g (526 mg/kg, 3 partikels), koolzaad 0,2883g, Negerzaad 530 mg/kg (3 deeltjes) 530 mg/kg (3 deeltjes) 0,040g Zwarte rijst 0,1322g Afwezig Afwezig ,1731g (692 mg/kg, 7 partikels), Negerzaad 0,3848g, Zwarte rijst 0,2566g 691 mg/kg (6deeltjes) 720 mg/kg (7 deeltjes) Deze resultaten voldoen aan de verwachte terugvinding van % en de reproduceerbaarheid uit het validatiedossier. LAB 00 P 180 F 002 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

16 8 Beschrijving referentiemateriaal Het referentiemateriaal werd geselecteerd uit besmette roggemonsters en wordt bewaard in de referentiecollectie als P165. Tevens zijn er als vergelijkingsmateriaal besmette tarwekorrels met Tilletia indica beschikbaar. REFERENTIEMETHODE: IAG-methode: Nachweis und Schätzung von Mutterkornbestandteilen in Futtermitteln (Sklerotien von Claviceps purpurea Tul.) LAB 00 P 180 F 002 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16