VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION

Transcriptie

1 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / Date du dernière adaption Detectie van Enterobacteriaceae LAB 24 I-MET-058 ISO Melk en melkproducten (zuigelingenvoeding) (categorie 1) 18/03/2013

2 Overzicht van de prestatiekenmerken : detectielimiet < 3 cfu/10g De validatie voldoet aan de procedure LAB 00 P180 De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn: Deelnemen aan een ringtest met het bekomen van goede resultaten. Behalen van een detectielimiet van 20 cfu /10 g Inhoud: Versie Herziening Reden Wijzigingen door / datum 1 EH/ Herwerken validatieprocedure volgens de nieuwe template en procedure P180 Template aanpassen met extra gegevens en foto s

3 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Detectie van Enterobacteriaceae (I-MET 058) ISO Aanrijking - isolatie - bevestiging Melk en melkproducten (categorie 1) (zuigelingenvoeding) Verificatie Elly Harnie Sectieverantwoordelijke biologische analyses Naam Nom: Elly Harnie Handtekeningen - Signatures: get. Functie - Fonction: Sectieverantwoordelijke biologische analyses Datum - Date: 18/03/2013 Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par Analisten microbiologie Stefanie Vanbiesbrouck, Liesbeth Stas, Kristof De Greif, Chantal Focquet, Mieke De Mits, Anja Van Beversluys, Sandra De Cocker, Hilde Van Remoortel, Conny De Schepper Start - Début: 22/08/2011 Einde - Fin: 18/03/2013 Dit rapport is een herwerking van het originele rapport, naar aanleiding van de nieuwe template en toevoeging van extra gegevens naar aanleiding van een Belac audit. Naam Nom: Ronny Martens Handtekeningen - Signatures: get. Functie - Fonction: QAM Datum - Date: Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

4 Samenvatting validatiegegevens Résumé des données de validation VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION... 1 SAMENVATTING VALIDATIEGEGEVENS RÉSUMÉ DES DONNÉES DE VALIDATION INLEIDING PROEVEN REEKS 1: BESMETTEN VAN MELKPOEDER... 3 De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. Nutrilon werd gebruikt om te besmetten REEKS 2: BESMETTEN VAN MELKPOEDER... 4 De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. Nutrilon werd gebruikt om te besmetten REEKS 3: RINGTEST Ringtest Ringtest REEKS 4: BESMETTEN VAN MELKPOEDER... 5 De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. Nutrilon werd gebruikt om te besmetten REEKS 5: BESMETTEN VAN MELKPOEDER... 6 De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel REEKS 6: BESMETTEN VAN MELKPOEDER... 6 De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel REEKS 7: BESMETTEN VAN MELKPOEDER REEKS 8: BESMETTEN VAN MELKPOEDER... 8 De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel. Er werden 6 cfu/ml teruggevonden in de besmettingsoplossing EXTRA PROEVEN DETECTIELIMIET SAMENVATTENDE TABEL EN CONCLUSIE FOTO S VAN DE METHODE LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

5 1. Validatieparameters / matrices Matrices : Melkpoeder (categorie 1) (zuigelingenvoeding) Volgende parameters werden bepaald : - Detectielimiet Criteria: De detectielimiet die moet behaald worden is 20 cfu/10g maar het FLVVM streeft naar 1 cfu/10 g. 2. Overzicht testen 1 Inleiding Dit dossier is de herwerking van het oorspronkelijke validatiedossier, opgesteld in Het dossier werd herwerkt conform de procedure P180 en aangevuld met extra gegevens. Dit is een beperktere validatie omdat de telling van Enterobacteriaceae op eenzelfde bodem wordt uitgevoerd (VRBG). 2 Proeven Er werden verschillende stalen besmet met E. coli om de detectielimiet te bepalen. 2.1 Reeks 1: besmetten van melkpoeder - Verdunnen van het referentiemonster van E. coli (VWA) tot 10 cfu = besmettingsoplossing - Verdunning uitplaten op VRBG (1 ml / 3 platen) - 10 g melkpoeder + 90 ml BPW + 1 ml besmettingsoplossing De reeks werd uitgevoerd door Chantal Focquet op 03/10/2011 en 04/10/2011. In een eerste stap werd het verdund referentiemonster uitgeplaat (10-3 verdund): LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

6 - Gietplaat: 2 cfu - Strijkplaat: 0.1 ml en 1 ml met als resultaat 0 en 0/1/0 cfu = 1 cfu/ml In een volgende stap werd het referentiemonster tot 10-2 verdund; dit werd gebruikt als referentieoplossing De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. Nutrilon werd gebruikt om te besmetten. Resultaat Nutrilon + E. coli + Blanco Nutrilon - Conclusie: Het besmet monster werd als positief teruggevonden. 2.2 Reeks 2: besmetten van melkpoeder - Verdunnen van het referentiemonster van E. coli (VWA) tot 10 cfu = besmettingsoplossing - Verdunning uitplaten op VRBG (1 ml / 3 platen) - 10 g melkpoeder + 90 ml BPW + 1 ml besmettingsoplossing De reeks werd uitgevoerd door Sandra De Cocker en Kristof De Greif op 18/10/2011. In een eerste stap werd het verdund referentiemonster uitgeplaat (10-3 detectielimiet). verdund): 42 cfu/ml werden geteld (boven De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. Nutrilon werd gebruikt om te besmetten. Resultaat KDG Resultaat SDC Nutrilon + E. coli + + Blanco Nutrilon - - Conclusie: De besmette monsters werden als besmet teruggevonden; de stalen werden te hoog besmet zodat in een volgende reeks hoger werd verdund. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

7 2.3 Reeks 3: ringtest Ringtest 2011 Een ringtest voor de telling van Enterobacteriaceae van Senate voor vlees werd door Liesbeth ook geanalyseerd volgens het schema van de detectie (25/10/2011). Het resultaat van het staal voor de detectie was Aanwezig. Dit staal werd op TEMPO en met ISO ook geteld (5200 cfu E. coli / g werden teruggevonden) Ringtest 2012 In 2012 werd deelgenomen aan een ringtest van QM (mei 2012). Het staal werd correct als positief geïdentificeerd. 2.4 Reeks 4: besmetten van melkpoeder - Verdunnen van het referentiemonster van E. coli (VWA) tot 10 cfu (Verdunning uitplaten op VRBG (1 ml / 3 platen) = besmettingsoplossing - 10 g melkpoeder + 90 ml BPW + 1 ml besmettingsoplossing De reeks werd uitgevoerd door Stefanie Van Biesbrouck en Anja Van Beversluys (7/11/2011). In een eerste stap werd het verdund referentiemonster uitgeplaat (10-3 detectielimiet). verdund): 19 cfu/ml werden geteld (boven De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. Nutrilon werd gebruikt om te besmetten. Nutrilon + E. coli Blanco Nutrilon Resultaat SV Resultaat AVB LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

8 Conclusie: De besmette monsters werden als positief teruggevonden; de stalen werden nog wat te hoog besmet. In een volgende reeks wordt verder verdund. 2.5 Reeks 5: besmetten van melkpoeder - Verdunnen van het referentiemonster van E. coli (VWA) tot 10 cfu (Verdunning uitplaten op VRBG (1 ml / 3 platen) (er werd iets verder verdund dan in vorige proef) = besmettingsoplossing - 10 g melkpoeder + 90 ml BPW + 1 ml besmettingsoplossing 3 verschillende melkpoeders besmetten en ook Salmonella toevoegen aan een vierde staal met 2 BCR (= 10 cfu). De reeks werd uitgevoerd door Liesbeth Stas (22/11/2011). Er werden 6 cfu/ml geteld in de besmettingsoplossing. De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel Resultaat LS MP 1 + E. coli + Blanco MP 1 - MP 2 + E. coli + Blanco MP 1 - MP 3 + E. coli + Blanco MP 1 - MP 3 + Salmonella + Blanco MP 1 - Conclusie: De besmette monsters werden als positief teruggevonden. Het besmettingsniveau is < 6 cfu/10 g. 2.6 Reeks 6: besmetten van melkpoeder - Verdunnen van het referentiemonster van E. coli (VWA) tot 10 cfu (Verdunning uitplaten op VRBG (1 ml / 3 platen) = besmettingsoplossing - 10 g melkpoeder + 90 ml BPW + 1 ml besmettingsoplossing LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

9 1 melkpoeder werd besmet op bovenstaande manier (tweemaal) ; ook werd aan 1 melkpoeder Salmonella toegevoegd (2 BCR = 10 cfu). De reeks werd uitgevoerd door Mieke De Mits (30/11/2011). Er werden 70 cfu/ml geteld in de besmettingsoplossing. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel Resultaat MDM MP 1 + E. coli + Blanco MP 1 - MP 1 + E. coli + MP 2 + Salmonella + Blanco MP 2 - Conclusie: De besmette monsters werden positief teruggevonden; de besmetting van E. coli was hoog (namelijk 70 cfu/ml). Een oorzaak kon niet achterhaald worden. 2.7 Reeks 7: besmetten van melkpoeder - Verdunnen van het referentiemonster van E. coli (VWA) tot 10 cfu (Verdunning uitplaten op VRBG (1 ml / 3 platen) = besmettingsoplossing - 10 g melkpoeder + 90 ml BPW + 1 ml besmettingsoplossing 2 melkpoeders werden besmet op bovenstaande manier De reeks werd uitgevoerd door Hilde Van Remoortel (07/12/2011).De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel. Er werden 15 cfu/ml geteld in de besmettingsoplossing. Resultaat HVR MP 1 + E. coli + Blanco MP 1 - MP 2 + E. coli + Blanco MP 2 - LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

10 Conclusie: De besmette monsters werden als positief teruggevonden. 2.8 Reeks 8: besmetten van melkpoeder - Verdunnen van het referentiemonster van E. coli (VWA) tot 10 cfu (Verdunning uitplaten op VRBG (1 ml / 3 platen) (er werd iets verder verdund dan in vorige proef; idem reeks 6 en 7) = besmettingsoplossing g melkpoeder + 90 ml BPW + 1 ml besmettingsoplossing 2 melkpoeders werden besmet op bovenstaande manier De reeks werd uitgevoerd door Conny De Schepper (14/12/2011). De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel. Er werden 6 cfu/ml teruggevonden in de besmettingsoplossing. Resultaat CDS MP 1 + E. coli + Blanco MP 1 - MP 2 + E. coli + Blanco MP 2 - Conclusie: De besmette monsters werden als positief teruggevonden. De detectielimiet van de method is < 6 cfu/10g. 3 Extra proeven detectielimiet Op vraag van de auditor in oktober 2012 werd een extra test uitgevoerd voor het bepalen van de detectielimiet. - Aanmaken van besmettingsoplossingen uitgaande van het referentiemonster van VWA: 3p-1206 (concentratie: 5800 cfu) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

11 Oplossing 1: 1/100 Oplossing 2: oplossing 1 ½ verdund Oplossing 3: oplossing 2 ½ verdund Oplossing 4: oplossing 3 ½ verdund - Uitplaten van elke verdunning in duplo op VRBG en PCA en incuberen Besmetten van stalen: - 10 g melkpoeder + 90 ml BPW + 1 ml besmettingsoplossing: o 4 oplossingen o Oplossing 3, 4: 4 herhalingen De test werd door Stefanie uitgevoerd op 11/12/2012. De resultaten worden in onderstaande tabel samengevat. Datum Staal VRBG Besmettingsniveau cfu VRBG / PCA 11/12/2012 MP + opl / 24 MP + opl / 10 MP + opl / 4 MP + opl 3 + MP + opl 3 + MP + opl 3 + MP + opl / 1 MP + opl 4 - MP + opl 4 + MP + opl 4 - Op het niveau van 1 cfu/10g werden 2 op 4 stalen als positief beoordeeld. De detectielimiet van de methode is kleiner dan 3-4 cfu/10g. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

12 4 Samenvattende tabel en conclusie Een samenvatting wordt gegeven in onderstaande tabel Datum 03/10/ /10/2011 7/11/ /11/ /11/ /12/ /12/ /12/2012 Staal Besmettingsniveau VRBG cfu/10g MP + E. coli + > 1-2 MP + E. coli + 42 MP + E. coli + 42 MP + E. coli + 19 MP + E. coli + 19 MP 1 + E. coli + 6 MP 2 + E. coli + 6 MP 3 + E. coli + 6 MP 3 + Salmonella + 10 MP 1 + E. coli + 70 MP 1 + E. coli + 70 MP 2 + Salmonella + 10 MP 1 + E. coli + 15 MP 2 + E. coli + 15 MP 1 + E. coli + 6 MP 2 + E. coli + 6 MP + opl / 24 MP + opl / 10 MP + opl / 4 MP + opl 3 + MP + opl 3 + MP + opl 3 + LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

13 MP = melkpoeder MP + opl / 1 MP + opl 4 - MP + opl 4 + MP + opl 4 - Bovenstaande tabel toont aan dat de detectielimiet van de methode < 3 cfu/10 g is. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

14 5 Foto s van de methode Hier worden enkele foto s weergegeven van de methode. Enten buisjes EE broth LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

15 VRBG met Enterobacteriaceae LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13