EINDRAPPORT LEVENSMIDDELENMICROBIOLOGIE JUNI 2015

Transcriptie

1 EINDRAPPORT PROFICIENCY TEST VOOR LEVENSMIDDELENMICROBIOLOGIE JUNI 2015 PT 2 TELLING IN SURIMI Dit rapport wordt door het WIV uitsluitend verdeeld aan de deelnemers van dit ringonderzoek. Het WIV is niet verantwoordelijk voor het gebruik van dit document door de houders ervan. De ontvangers van dit rapport zijn zelf verantwoordelijk voor het gebruik ervan. Dienst:Voedselpathogenen Auteur van het rapport : Marie Polet Wetenschappelijke verantwoordelijke: Marie Polet Technische verantwoordelijke: Astrid Huwaert Wetenschappelijke goedkeuring: Nadine Botteldoorn J. Wytsmanstraat Brussel België

2 Deze inter-laboratorium studie is gericht op de telling van 5 verschillende kiemen in een voedingsmatrix die natuurlijk besmet is met een mesofiele flora. Dit jaar werd er gekozen voor surimi in stukjes. Deze studie werd georganiseerd door het Nationaal Referentielaboratorium voor levensmiddelenmicrobiologie in samenwerking met het FAVV en was bedoeld voor de erkende laboratoria van het FAVV. 1. Verloop van de studie maandag 15 juni 2015 Voorbereiding en inoculeren van de stalen dinsdag 16 juni 2015 Vervoer van de pakketten naar de 2 dispatchingcentra van het FAVV (Melle et Gembloux) door een chauffeur van het WIV en het ophalen van de stalen door de deelnemende laboratoria. woensdag 17 juni 2015 De laboratoria starten de analysen woensdag 1 juli 2015 Limietdatum voor het rapporteren van de resultaten naar het WIV vrijdag 17 juli 2014 Intermediair rapport verstuurd naar de deelnemende laboratoria door het WIV maandag 28 september 2015 Eindrapport verstuurd naar de laboratoria door het WIV Ieder pakket bevatte: - 6 stalen (1, 2, 3, 4, 5, 6) met ongeveer 30 g vermalen surimi - Een datalogger voor temperatuursregistratie (voor de helft van de laboratoria) - Een koelelement - De instructies

3 Deelnemende laboratoria : ILVO VOEDING Melle SGS Antwerpen AGROLAB Battice LOVAP Geel ECCA Merelbeke IEM Liège QUALITY PARTNER Herstal EURACETA Villers-le-Bouillet FLVVM Melle LEQ Bastogne SERVACO FOOD Wetteren CONTROL SHA Mouscron LFSAGx Gembloux LAVETAN Turnhout WIV Brussel BIOTOX Jabbeke LARECO Marche-en-Famenne EUROFINS Brugge BRULABO Brussel CARAH Ath HVS Mons 21 laboratoria hebben deelgenomen

4 2. Samenstelling van de stalen De surimi werd aangekocht in de supermarkt (twee verschillende loten) en bevroren bewaard gedurende een week.. De dag van het klaarmaken van de stalen werd de surimi ontdooid gedurende 3h bij kamertemperatuur en daarna beënt met de verschillende kiemen. De artificiële besmetting gebeurde direct met de volgende stammen : stammen Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Bacillus cereus Listeria monocytogenes Escherichia coli Listeria ivanovii referentie TIAC 2598 TIAC 958 TIAC 2647 TIAC 2445 TIAC 2481 TIAC 716 Deze stammen zijn afkomstig uit de collectie van het WIV. Artificiële besmetting van de 6 stalen: Elk monster werd besmet aan een concentratie van x log cfu/g/kiem (zie tabel 1), om zowel een lage en een middelmatige contaminatie van het staal te bekomen. Het aantal kiemen in het inoculum werd bepaald door een drievoudige uitplating op TSA medium. Sommige monsters werden niet besmet voor bepaalde parameters en dienden als blanco. Tabel 1: Overzicht van de besmetting van stalen 1-6 met de 5 geselecteerde kiemen (aantal in log cfu/g) S. aureus L. monocytogenes P. aeruginosa B. cereus E. coli L. ivanovii / 4.48 / 5.45 / 2 / / 3 / / / / / 5.58 / / 3.48 / / 5.58 / / Na besmetting werden de stalen gedurende een nacht in de koelkast bewaard vooraleer ze werden doorgezonden naar de twee dispatchingcentra.

5 3. Analyse procedure Voor de 6 stalen dienden de 5 parameters geanalyseerd te worden. De procedure was dezelfde voor ieder staal namelijk :. neem een deelmonster van 10 g om de moederoplossing (1/10) te maken. voor het vervolg worden de stalen verdund zoals tijdens een routine analyse binnen het laboratorium. Telling : Pseudomonas spp, L. monocytogenes, coagulase positieve Staphylococcus (CPS), B. cereus, E. coli Alle laboratoria hebben de telling van CPS, L. monocytogenes en E. coli uitgevoerd. 1 laboratorium heeft de telling van B. cereus niet uitgevoerd. 10 laboratoria hebben de telling van Pseudomonas spp. niet uitgevoerd. 4. Geassocieerde testen Homogeniteitstest en stabiliteitstest Nadat de stalen werden bereid op maandag 15 juni, werd de homogeniteit bepaald dezelfde dag op 5 herhalingen van de verschillende stalen voor elke parameter. Alle stalen waren homogeen voor alle parameters. Stabiliteits- en homogeniteitstesten werden uitgevoerd op woensdag 17 juni op 5 stalen in drievoud. De waarden waren stabiel behalve voor Pseudomonas spp waarbij de kiem niet stabiel was maar wel homogeen bleef, behalve voor staal n 2 dat daarom niet in rekening genomen werd voor de beoordeling van de laboratoria. De data zijn beschikbaar in het Excel blad «homogénéité-stabilité-easurimi2015». Verificatie van de natuurlijke besmetting van de stalen Eén staal per lot werd geanalyseerd (telling) voor alle parameters evenals de totale flora. Al de resultaten waren kleiner dan de detectielimiet voor de parameters van de proficiency test en de besmetting was kleiner dan the detectielimiet of laag voor de

6 totale flora. Ook voor de homogeniteitstesten werden twee analysen uitgevoerd voor niet geïnoculeerde parameters in elk staal. 5. Performantie van de laboratoria : z-scores De statistische analyses werden uitgevoerd door de dienst «kwaliteit van de medische laboratoria» van het WIV. De z-score per parameter werd berekend op basis van het robuuste gemiddelde en de robuuste standaard deviatie van alle resultaten van de deelnemende laboratoria. Overzichtstabel van de z-scores van de laboratoria CPS = Coagulase positieve Staphylococcus N labo E. coli 1 E. coli 2 E. coli 5 CPS 1 CPS 4 CPS 5 CPS 6 L. monocytogenes 2 L. monocytogenes 3 L. monocytogenes Z-score tussen 2 et 3 of tussen -2 en -3 Z-score > 3 of < - 3 analyse niet uitgevoerd

7 N labo Pseudomonas 1 Pseudomonas 3 Pseudomonas 5 B. cereus 2 B. cereus 3 B. cereus 4 B. cereus Z-score tussen 2 en 3 of tussen -2 en -3 Z-score > 3 of < - 3 analyse niet uitgevoerd

8 Grafische voorstelling van de z-scores van de verschillende laboratoria E. coli -sample 1 E. coli -sample 2 E. coli -sample 5 CPS - sample 1 CPS - sample 4 CPS - sample 5 CPS - sample 6 L. monocytogenes - sample 2 L. monocytogenes - sample 3 L. monocytogenes - sample 6 Pseudomonas spp - sample 1 Pseudomonas spp - sample 3 Pseudomonas spp - sample 5 B. cereus - sample 2 B. cereus - sample 3 B. cereus - sample 4 B. cereus - sample 6 Z-score [ ] limieten z-scores (+2 ; -2) { }limieten z-scores (+3 ; -3)

9 Vals-positieve en vals-negatieve resultaten Het laboratorium 22 rapporteerde een vals positief resultaat voor CPS - staal 3. Het laboratorium 4 rapporteerde een vals positief resultaat voor L. monocytogenes - staal 4. Het laboratorium 6 rapporteerde een vals positief resultaat voor L. monocytogenes - staal 5. Het laboratorium 28 rapporteerde een vals positief resultaat voor L. monocytogenes stalen 4 en 5 en B. cereus staal Robuust gemiddelde (X) en robuuste standaardafwijking (SD) Kiem (staal) robuust X robuuste SD L. monocytogenes (2) L. monocytogenes (3) L. monocytogenes (6) CPS (1) CPS (4) CPS (5) CPS (6) Pseudomonas (1) Pseudomonas (3) Pseudomonas (5) E. coli (1) E. coli (2) E. coli (5) B. cereus (2) B. cereus (3) B. cereus (4) B. cereus (6)

10 Hierbij een illustratieve vergelijkingstabel voor de robuuste standaardafwijking (robuuste SD) van de ringonderzoek van juni 2015 met die van RAEMA 38 en Requasud en de ringonderzoeken van juni 2013 en 2014 georganiseerd door het WIV. Gemiddelde robuuste SD WIV juni 2013 Gemiddelde robuuste SD WIV juni 2014 Gemiddelde robuuste SD WIV juni 2015 Gemiddelde robuuste SD RAEMA 38 Gemiddelde robuuste SD Requasud CPS L. monocytogenes Pseudomonas spp E. coli 0,17 0,15 0,27 0,4 0,22 0,13 0,28 0,16 0,13 0,18 0,37 0,19 0,15 / / 0,28 0,25 / / 0,25 B. cereus 0,5 / 0,25 0,25 0,25

11 7. Bijkomende informatie Bacillus cereus

12 Pseudomonas spp.

13 Staphylococcus aureus

14 Listeria monocytogenes

15 Escherichia coli 8. Discussie en besluit De matrix surimi is een matrix met een lage natuurlijke besmetting. De proficiency test is goed verlopen. Veel laboratoria hebben de oorzaak van een non-conform resultaat gevonden. Hierna volgen de voornaamste oorzaken: - Vergissing tijdens het ingeven van de resultaten in de webapplicatie - Een fout tijdens de berekening van de resultaten - Gebruik van vervallen reagentia - Geen correcte uitvoering van de procedure door de laborant - Laborant in opleiding en de procedure niet correct uitgevoerd - Geen specifieke oorzaak gevonden

16 Alle stalen, 95% van de resultaten waren aanvaardbaar voor de telling van L. monocytogenes 98,4 % van de resultaten waren aanvaardbaar voor de telling van E. coli 98 % van de resultaten waren aanvaardbaar voor de telling van Pseudomonas spp. 97,6 % van de resultaten waren aanvaardbaar voor de telling van Coagulase positieve Staphylococcus 97,5 % van de resultaten waren aanvaardbaar voor de telling van B. cereus Een tussentijdsrapport met de individuele resultaten per laboratorium werd op 14 juli 2015 elektronisch verzonden. Het eindrapport werd elektronisch verzonden op 28 september Een papieren versie is beschikbaar op aanvraag. De ringtest «telling» georganiseerd in juni voor een specifieke voedingsmatrix zal opnieuw worden