VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION

Transcriptie

1 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / Date du dernière adaption Detectie van Cronobacter sakazakii LAB 24 I-MET-057 ISO/TS Melk en melkproducten (zuigelingenvoeding) (categorie 1) 18/03/2013

2 Overzicht van de prestatiekenmerken : detectielimiet < 1 cfu / 10 g De validatie voldoet aan de procedure LAB 00 P180 De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn: Deelnemen aan een ringtest met het bekomen van goede resultaten. Behalen van een detectielimiet van 10 cfu /10 g Inhoud: Versie Herziening Reden Wijzigingen door / datum 1 EH/ Herwerken validatieprocedure volgens de nieuwe template en procedure P180 Template aanpassen met extra gegevens en foto s 2 EH/ Toevoegen extra testen op vraag van auditor Belac Toevoegen extra testen

3 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Detectie van Cronobacter sakazakii (I-MET 057) ISO/TS Aanrijken isolatie - bevestiging Melk en melkproducten (categorie 1) (zuigelingenvoeding) Verificatie Elly Harnie Sectieverantwoordelijke biologische analyses Naam Nom: Elly Harnie Handtekeningen - Signatures: get. Functie - Fonction: Sectieverantwoordelijke biologische analyses Datum - Date: 18/03/2013 Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par Analisten microbiologie Stefanie Vanbiesbrouck, Liesbeth Stas, Kristof De Greif, Chantal Focquet, Mieke De Mits, Anja Van Beversluys, Sandra De Cocker, Hilde Van Remoortel, Conny De Schepper Start - Début: 22/08/2011 Einde - Fin: 18/03/2013 Dit rapport is een herwerking van het originele rapport, naar aanleiding van de nieuwe template en toevoeging van extra gegevens naar aanleiding van een Belac audit. Naam Nom: Ronny Martens Handtekeningen - Signatures: get. Functie - Fonction: QAM Datum - Date: Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

4 Samenvatting validatiegegevens Résumé des données de validation VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION... 1 SAMENVATTING VALIDATIEGEGEVENS RÉSUMÉ DES DONNÉES DE VALIDATION INLEIDING OMSCHRIJVING PROEVEN OPKWEEK VAN CRONOBACTER SAKAZAKII BESMETTEN STALEN MELKPOEDER Test 1: besmet melkpoeder... 4 De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel Test 2: besmet melkpoeder... 5 De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel Test 3: besmet melkpoeder... 6 De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel Test 4: besmet melkpoeder... 7 De resultaten van de opkweek zijn aanwezig in onderstaande tabel De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel Test 5: besmet melkpoeder... 8 De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel Test 6: besmet melkpoeder... 9 De resultaten van de opkweek zijn aanwezig in onderstaande tabel Test 7: besmet melkpoeder De resultaten van de opkweek zijn aanwezig in onderstaande tabel RINGTESTEN EXTRA TESTEN DETECTIELIMIET DETECTIELIMIET PROEF DETECTIELIMIET PROEF BESLUIT SAMENVATTENDE TABEL EN CONCLUSIE Een samenvatting wordt gegeven in onderstaande tabel FOTO S VAN DE METHODE LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

5 1. Validatieparameters / matrices Matrices : Melkpoeder (categorie 1) (zuigelingenvoeding) Volgende parameters werden bepaald : - Detectielimiet Criteria: De detectielimiet die moet behaald worden is 10 cfu / 10 g maar het FLVVM streeft naar 1 cfu / 10 g. 2. Overzicht testen 1 Inleiding De opstart van de methode was oorspronkelijk voorzien voor 01/11/2011, maar werd verzet naar 01/01/2012 (als gevolg van het wijzigen van de dispatching routes zou het FLVVM ook stalen voor Cronobacter ontvangen). Het oorspronkelijke validatiedossier werd in 2012 herwerkt conform de procedure P180; in 2013 werden extra testen toegevoegd naar aanleiding van een audit. 2 Omschrijving proeven Tijdens de validatie werden twee bodems vergeleken: ESIA en Rapid sakazakii. In eerste instantie werd een opkweek van Cronobacter uitgetest, om te gebruiken als besmettingsoplossing om stalen te besmetten. Vervolgens werden stalen besmet en geanalyseerd. 2.1 Opkweek van Cronobacter sakazakii Werkwijze: - Opkweken 2 cultiloops in BHI (24 h 37 C, cfr. andere methoden) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

6 - Aanmaken van verdunningsreeks in trypton zoutoplossing en uitplaten verdunning 10-4 tem 10-9 op ESIA en Rapid sakazakii (0.1 ml) Deze test werd door Liesbeth Stas uitgevoerd op 22/08/2011. De resultaten worden samengevat in onderstaande tabel. Tabel Resultaten opkweek in cfu / plaat Opkweek 1 Opkweek 2 Verdunning ESIA Rapid sakazakii ESIA Rapid sakazakii 10-4 > 300 > 300 > 300 > > > 300 > Conclusie: De resultaten op beide platen komen overeen; ook komen de herhalingen overeen. Om de detectielimiet te behalen moet verdund worden tot De proef wordt herhaald en de opkweek wordt gebruikt om stalen te besmetten. 2.2 Besmetten stalen melkpoeder Test 1: besmet melkpoeder Werkwijze: - Opkweken cultiloop in BHI (24 h 37 C, cfr andere methoden) - Uitplaten verdunningen 10-5 tot en met 10-7 op beide platen (0.1 ml) - Afwegen van 10 g melkpoeder en toevoegen van 1 ml van verdunning 10-6 en van 10-7 ; analyse van het blanco staal Deze test werd door Liesbeth Stas uitgevoerd op 26/08/2011. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

7 De resultaten van de opkweek zijn aanwezig in onderstaande tabel. Tabel Resultaten opkweek in cfu / plaat Opkweek Verdunning ESIA Rapid sakazakii 10-5 > 300 > De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel. ESIA Rapid Staal Staal Opmerking: op de Rapid platen was er veel meer groei dan op ESIA. De kolonies werden bevestigd als Cronobacter en bleken oxidase negatief te zijn. Conclusie: De concentratie van Cronobacter in de stalen bedroeg cfu (staal ) en cfu (staal ). Omdat dit te hoog is werd in een volgende proef lager besmet Test 2: besmet melkpoeder Werkwijze: - Opkweken cultiloop in BHI (24 h 37 C, cfr andere methoden) - Uitplaten verdunningen 10-6 tem 10-8 op ESIA - Afwegen van 10 g melkpoeder en toevoegen van 1 ml van verdunning 10-6 en van 10-7 ; analyse van het blanco staal Deze test werd door Stefanie Vanbiesbrouck uitgevoerd op 05/09/2011. De resultaten van de opkweek zijn aanwezig in onderstaande tabel. Tabel Resultaten opkweek in cfu / ml Opkweek Verdunning ESIA LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

8 De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel. Type melkpoeder ESIA Rapid Bambix Staal Friso Staal Verdunning 10-8 werd verder bevestigd. Conclusie: De detectielimiet van de methode is kleiner dan 3 cfu. Deze test werd door alle andere analisten ook herhaald Test 3: besmet melkpoeder Werkwijze: - Opkweken cultiloop in BHI (24 h 37 C) - Uitplaten verdunningen 10-7 en 10-8 op ESIA / Rapid Sakazakii - Afwegen van 10 g melkpoeder en toevoegen van 1 ml van verdunning 10-7 en van 10-8 ; analyse van het blanco staal Deze test werd door Sandra De Cocker uitgevoerd op 13/09/2011. De resultaten van de opkweek zijn aanwezig in onderstaande tabel. Tabel Resultaten opkweek in cfu / ml Opkweek Verdunning ESIA Rapid LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

9 De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel. Type melkpoeder ESIA Rapid 1 Staal Staal Alle positieve stalen werden bevestigd. Conclusie: De detectielimiet van de methode is kleiner dan 2-8 cfu / 10 g. Dezelfde resultaten op beide bodems werden bekomen Test 4: besmet melkpoeder Werkwijze: zie Deze test werd door Chantal Focquet en Anja Van Beversluys uitgevoerd op 20/09/2011. De resultaten van de opkweek zijn aanwezig in onderstaande tabel. Tabel Resultaten opkweek in cfu / ml (chantal) Opkweek Verdunning ESIA Rapid Tabel Resultaten opkweek in cfu / ml (anja) Opkweek Verdunning ESIA Rapid < 1 5 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

10 De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel. Type melkpoeder Analist ESIA Rapid BEBA 2 Staal AVB Bambix groeimelk Staal BEBA 2 Staal CF Bambix groeimelk Staal Blanco - - Conclusie: De detectielimiet van de methode is kleiner dan 1 cfu / 10 g Test 5: besmet melkpoeder Werkwijze: zie Deze test werd door Liesbeth Stas en Kristof De Greif uitgevoerd op 4/10/2011. De resultaten van de opkweek zijn aanwezig in onderstaande tabel. Tabel Resultaten opkweek in cfu / ml Opkweek Verdunning ESIA Rapid LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

11 De resultaten van de besmette monsters zijn aanwezig in onderstaande tabel. Type melkpoeder ESIA Rapid Melkpoeder 1 Staal Melkpoeder 2 Staal Conclusie: De detectielimiet van de methode is kleiner dan 1 cfu / 10 g Test 6: besmet melkpoeder Werkwijze: zie Deze test werd door Conny De schepper en Mieke De Mits uitgevoerd op 18/10/2011. De resultaten van de opkweek zijn aanwezig in onderstaande tabel. Tabel Resultaten opkweek in cfu / ml (Conny) Opkweek Verdunning ESIA Rapid Tabel Resultaten opkweek in cfu / ml (Mieke) Opkweek Verdunning ESIA Rapid LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

12 Type melkpoeder Analist ESIA Rapid Bambix Staal CDS + + NAN Staal Staal Nutrilon Staal MDM + + Friso Staal Conclusie: De detectielimiet van de methode is kleiner dan 2 cfu / 10 g (1 staal werd niet als positief teruggevonden) Test 7: besmet melkpoeder Werkwijze: zie Deze test werd door Hilde Van Remoortel uitgevoerd op 07/12/2011. ESIA werd niet meer uitgevoerd. De resultaten van de opkweek zijn aanwezig in onderstaande tabel. Tabel Resultaten opkweek in cfu / ml Verdunning Opkweek Rapid Staal blanco - Staal blanco - LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

13 Conclusie: De detectielimiet van de methode is kleiner dan 1 cfu / 10 g. 2.3 Ringtesten Op 22/11/2011 werd deelgenomen aan een ringtest; dit resultaat was afwezig en werd zo ook bevestigd door de organisator. Op 08/05/2012 werd deelgenomen aan een ringtest; dit resultaat was aanwezig en werd zo ook bevestigd door de organisator. 3 Extra testen detectielimiet Op vraag van de auditor werden extra testen uitgevoerd voor de bepaling van de detectielimiet. In een eerste test werd een opkweek aangemaakt en geteld (24 h bij 37 C in Brucella broth) (03/01/2013 uitgevoerd door Liesbeth). Aan de hand hiervan werd de besmettingsoplossing berekend. 3.1 Detectielimiet proef 1 Aanmaken van besmettingsoplossingen : Reactivatie van een cultiloop in BHI Aanmaken van een verdunningsreeks 10-1 tot en met 10-8 : Oplossing 1: 10-6 Oplossing 2: 10-7 Oplossing 3: 10-8 Uitplaten van elke verdunning (1 ml) op ESIA en PCA en incuberen Besmetten van stalen: 10 g melkpoeder + 90 ml BPW + 1 ml besmettingsoplossing (eerst oplossen, dan besmetten) 10 g melkpoeder + 90 ml BPW = blanco De test werd door Anja uitgevoerd op 31/01/2013. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

14 Datum Staal Analist Cfu/ml ESIA / PCA ESIA 31/01/2013 Staal AVB 407 / Staal / 79 + Staal / 14 + In een volgende proef werd lager besmet. 3.2 Detectielimiet proef 2 De eerste proef werd herhaald met meerdere herhalingen en op een lager niveau. Aanmaken van besmettingsoplossingen : Reactivatie van een cultiloop in BHI Aanmaken van een verdunningsreeks 10-1 tot en met 10-8 : Oplossing 1: 10-7 Oplossing 2: 10-8 Oplossing 3: oplossing 2 ½ verdund Oplossing 4: oplossing 2 1/5 verdund Uitplaten van elke verdunning (1 ml) op ESIA en PCA en incuberen Besmetten van stalen: 10 g melkpoeder + 90 ml BPW + 1 ml besmettingsoplossing (eerst oplossen, dan besmetten) 4 oplossingen Oplossing 3 en 4: 4 herhalingen 10 g melkpoeder + 90 ml BPW = blanco De test werd door Stefanie uitgevoerd op 12/02/2013. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

15 Datum Staal Analist Cfu/ml ESIA / PCA ESIA 12/02/2013 Staal + opl 1 SV 54 / 85 + Staal + opl 2 7 / 33 + Staal + opl 3 3 / 13 + Staal + opl 3 + Staal + opl 3 + Staal + opl 3 + Staal + opl 4 1 / 1 + Staal + opl 4 + Staal + opl 4 + Staal + opl 4 + Er is een verschil tussen de opkweek geteld op PCA en ESIA. 3.3 Besluit Er werd een detectielimiet kleiner dan 1 cfu/10 g behaald (zowel op PCA als op ESIA bepaald). 4 Samenvattende tabel en conclusie Een samenvatting wordt gegeven in onderstaande tabel. Datum 26/08/ /09/ /09/2011 Staal Detectielimiet cfu ESIA Rapid (ESIA- Rapid) Staal Staal Staal (enkel ESIA) Staal (enkel ESIA) Staal (enkel ESIA) Staal (enkel ESIA) Staal Staal Staal LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

16 20/09/ /09/ /10/ /10/ /10/ /12/2011 Staal Staal Staal Staal Staal Staal Staal < 1-5 Staal Staal < 1-5 Staal Staal Staal Staal Staal Staal Staal Staal Staal Staal Staal Staal Staal Blanco - nvt Staal Blanco - nvt Extra testen in 2013 staan vermeld in onderstaande tabel. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

17 Datum Staal Analist Cfu/ml ESIA / PCA ESIA 31/01/2013 Staal AVB 407 / Staal / 79 + Staal / /02/2013 Staal + opl 1 SV 54 / 85 + Staal + opl 2 7 / 33 + Staal + opl 3 3 / 13 + Staal + opl 3 + Staal + opl 3 + Staal + opl 3 + Staal + opl 4 1 / 1 + Staal + opl 4 + Staal + opl 4 + Staal + opl 4 + Er werd een detectielimiet kleiner dan 1 cfu/10 g behaald (zowel op PCA als op ESIA bepaald). De methode was goed voor implementatie vanaf 02/01/2012. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16

18 5 Foto s van de methode Enten van mlst broth Cronobacter op Rapid sakazakii agar LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /16