VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION

Transcriptie

1 SECTIE - SECTION: Biologische analyses VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse DETECTIE VAN SALMONELLA SPP. MET PCR (I-MET 039) Bevestiging volgens ISO norm 6579 : 2002 Microbiology of food and animal feeding stuffs Horizontal method for the detection of Salmonella spp. Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / Date du dernière adaption PCR Categorie 1, 2, 3 en 4 (zie ISO 19036) 21/12/2012

2 SECTIE - SECTION: Biologische analyses Overzicht van de prestatiekenmerken : detectielimiet 5 cfu / 25 g of 25 ml De validatie voldoet aan de procedure LAB 00 P180 De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn voor de betreffende matrices/parameters: Deelnemen aan een ringtest met het bekomen van goede resultaten. Behalen van een detectielimiet van 10 cfu /swabs of /25 g Historiek validatiedossier: Versie Herziening Reden Wijzigingen door / datum 1 EH/ Samenvoegen dossier 2008, 2009 volgens de nieuwe template en procedure P180 Dossier aanvullen met extra gegevens en foto s

3 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse DETECTIE VAN SALMONELLA SPP. MET PCR (I-MET 039) Bevestiging volgens ISO norm 6579 : 2002 Microbiology of food and animal feeding stuffs Horizontal method for the detection of Salmonella spp. Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par PCR Isolatie - bevestiging Categorie 1, 2,3 en 4 (zie ISO 19036) Verificatie Elly Harnie Sectieverantwoordelijke biologische analyses Naam Nom: Elly Harnie Handtekeningen - Signatures: get. Functie - Fonction: Sectieverantwoordelijke biologische analyses Datum - Date: Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par Analisten microbiologie: K. De Greif, L. Stas, S. Vanbiesbrouck, A. Van Beversluys, C. De Schepper, M. De Mits, C. Focquet, H. Van Remoortel, S. De Cocker Start - Début: Einde - Fin: De validatie van de PCR methode werd uitgevoerd in 2008, Dit document bevat een samenvatting van de validatietesten als gevolg van de nieuwe rapport-template en procedure. Naam Nom: Ronny Martens Handtekeningen - Signatures: get. Functie - Fonction: QAM Datum - Date: Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

4 Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION... 1 VALIDATIEPARAMETERS / MATRICES / CRITERIA... 4 VALIDATIEDOSSIER PCR METHODE INLEIDING OPLEIDING EXTERN VALIDATIEPROEVEN VALIDATIEPROEF 1: PROEFMONSTERS IN HET LABO GEMBLOUX Werkwijze Resultaten Besluit VALIDATIEPROEF 2: BPW + BCR( S) EN PROEFMONSTERS Werkwijze Resultaten VALIDATIEPROEF 3: MELK + 1 BCR EN PROEFMONSTERS Werkwijze Resultaten Besluit VALIDATIEPROEF 4: CATEGORIE 1,3,4 + 1 BCR EN PROEFMONSTERS Werkwijze Resultaten Besluit VALIDATIEPROEF 5: RAEMAB (RINGTEST) Werkwijze Resultaten Besluit VALIDATIEPROEF 6: CATEGORIE 2,4 + 2 BCR S EN PROEFMONSTERS Werkwijze Resultaten Besluit VALIDATIEPROEF 7: CATEGORIE 2,3,4 + 2 BCR S EN PROEFMONSTERS Werkwijze Resultaten Besluit LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

5 3.8 SAMENVATTING BESMETTE MONSTERS PROEVEN 2, 3, 4, 6 EN VALIDATIEPROEF 8: DETECTIELIMIET IN GEHAKT Werkwijze Resultaten Besluit VALIDATIEPROEF 9: PROEFMONSTERS Werkwijze Resultaten Besluit VALIDATIEPROEF 10: DETECTIELIMIET VAN S. TYPHIMURIUM EN S. ENTERITIDIS IN VLEES EN GEHAKT Bepalen niveau opkweek referentiestam Besmetten gehakt/vlees met S. Typhimurium en S. Enteritidis VALIDATIEPROEF 11: RESULTATEN SDC Resultaten reeks 1 SDC Resultaten reeks 2 SDC Resultaten reeks 3 SDC ALGEMEEN BESLUIT FOTO S VAN DE METHODE LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

6 Validatieparameters / matrices / criteria Matrices : - categorie 1: vloeistoffen en poeders (bijvoorbeeld melk ) - categorie 2: gemengde vaste stoffen (bijvoorbeeld gemalen vlees) - categorie 3: kleine (of zeer kleine) vaste stoffen (bijvoorbeeld geraspte wortelen) - categorie 4: overige vaste stoffen (bijvoorbeeld vlees, kaas) Volgende parameters werden bepaald : - Detectielimiet Criteria: - Detectielimiet 10 cfu/25 g of 25 ml Gebruikte referenties : referentiemonster V.W.A., BCR (CRM) Ringtest noodzakelijk Validatiedossier PCR methode 1 Inleiding Dit dossier is het verwerkte validatiedossier van de bepaling van Salmonella spp. met PCR. De oorspronkelijke validatie werd uitgevoerd in 2008, Voorheen werd de klassieke methode uitgevoerd. Naar analogie met het labo Gembloux werd ook in ons labo gekozen voor het easy protocol van Biorad om te valideren. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

7 2 Opleiding extern Een overzichtstabel van gevolgde externe opleidingen is aanwezig in onderstaande tabel. Organisator Datum Plaats Aard Personen Opleiding Biorad 2007 Biorad theorie + praktijk K. Orye (KO) Ulg + FAVV 28/04/08 FAVV Brussel theorie K. De Greif (KDG) Opleiding labo Gembloux L. Stas (LS) E. Harnie (EH) 06/08/08 Labo Gembloux praktijk K. De Greif E. Harnie Opleiding Biorad 26/08/08 Labo Melle theorie + demonstratie praktijk Opleiding Biorad 04/11/08 Labo Melle theorie + demonstratie praktijk K. De Greif S. Vanbiesbrouck (SV) L. Stas K. Orye E. Harnie S. De Cocker (SDC) M. De Mits (MDM) C. De Schepper (CDS) A. Van Beversluys (AVB) Intern werden de mensen opgeleid tijdens de validatietesten (zie verder). Zowel KDG als SV hebben ervaringen met (real-time) PCR uit vorige werkervaring en/of stage. 3 Validatieproeven De validatie bestond uit de analyse van proefmonsters, besmette monsters, referentiestammen en ringstalen. De detectielimiet werd bepaald door aangekochte monsters te besmetten en te analyseren op detectielimiet (< 10 cfu/25g of ml). Volgende categorieën werden besmet en geanalyseerd: - categorie 1: vloeistoffen en poeders (bijvoorbeeld melk ) - categorie 2: gemengde vaste stoffen (bijvoorbeeld gemalen vlees) - categorie 3: kleine (of zeer kleine) vaste stoffen (bijvoorbeeld geraspte wortelen) - categorie 4: overige vaste stoffen (bijvoorbeeld vlees, kaas) Ook werden stalen parallel volgens de ISO norm geanalyseerd. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

8 Er werd deelgenomen aan een ringanalyse Raemab in oktober Validatieproef 1: proefmonsters in het labo Gembloux Werkwijze In het labo van Gembloux werden een aantal stalen door KDG en EH onder begeleiding (06/08/08) geanalyseerd Resultaten De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De PCR plaat werd afgedekt met caps. Tabel 1 Resultaten validatieproef 1 Monsternummer Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO worst (S. Paratyphi B) worst (S. Paratyphi B) worst (S. Paratyphi B) worst (S. Paratyphi B) separatorvlees separatorvlees roomijs babyvoeding radijzen kip blanco steriel water - - niet uitgevoerd referentie referentiemonster* Aantal stalen 10 * S. Enteritidis Besluit De resultaten met PCR en volgens de ISO methode kwamen overeen. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

9 3.2 Validatieproef 2: BPW + BCR( s) en proefmonsters Werkwijze In een tweede proef werden door KDG, SV en KO een aantal stalen geanalyseerd. Ook werden 1 en 2 BCR s (respectievelijk 5 en 10 cfu s Salmonella Typhimurium) toegevoegd aan gebufferd peptonwater. De PCR plaat werd afgesloten met caps Resultaten De PCR werd uitgevoerd op 24/09/08. Een overzicht is aanwezig in onderstaande tabel. Tabel 2 Resultaten validatieproef 2 Monsternummer Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO BPW+ 1 BCR referentie - + niet uitgevoerd BPW + 2 BCR referentie - + niet uitgevoerd ham worst schaaldieren chocomousse swabs swabs swabs swabs swabs weekdieren blanco steriel water - - niet uitgevoerd referentie Aantal stalen Besluit De resultaten op PCR en volgens de ISO methode kwamen overeen. Zowel 1 als 2 BCR s werden teruggevonden. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

10 3.3 Validatieproef 3: melk + 1 BCR en proefmonsters Werkwijze In een tweede reeks werden door SV, LS en EH een aantal stalen geanalyseerd. Ook werd melk besmet met 1 BCR en met 2 BCR s. Deze besmette stalen werden zowel door SV, LS als EH geanalyseerd Resultaten De PCR werd uitgevoerd op 01/10/08. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De PCR plaat werd afgedekt met folie. Tabel 3 Resultaten validatieproef 3 Monsternummer Analist Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat SV ham worst weekdieren schaaldieren schaaldiersalade schaaldiersalade swabs swabs swabs swabs swabs blanco steriel water - - niet uitgevoerd Melk + 1 BCR melk 1 + niet uitgevoerd Melk + 2 BCR melk 1 + niet uitgevoerd Referentiestam* LS eiproduct poeder eiproduct poeder eiproduct poeder worst worst ham NHC dierl. eiwitten (S. Llandof) NHC dierl. eiwitten (S. Anatum) NHC dierl. eiwitten (S. Montevideo) NHC dierl. eiwitten (S. Llandof) ISO LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

11 NHC dierl. eiwitten (S. Montevideo) Melk + 1 BCR melk 1 + niet uitgevoerd Melk + 2 BCR melk 1 + niet uitgevoerd Referentiestam* melk Melk + 1 BCR EH melk 1 + niet uitgevoerd Melk + 2 BCR melk 1 + niet uitgevoerd Referentiestam* ham schaaldiersalade Aantal stalen in duplo * S. Typhimurium Het PCR signaal van het monster stijgt pas na 45 cycli in FAM. Dit gaat over een zwak positief staal dat volgens de ISO methode niet werd bevestigd. Dit werd besproken met Biorad op 04/11/08: stalen die pas na 45 cycli positief zijn, zijn twijfelgevallen. Het PCR signaal van het monster is duidelijk positief terwijl het volgens de ISO methode niet werd teruggevonden. Bij de GGO groep in het labo is opgevallen dat het afdichten van een PCR plaat met folie problemen van uitdamping kan geven op vooral de H -lijn. In deze reeks bevonden zich een negatief staal ( ), de negatieve PCR controle (NC) en een positief monster ( ) op deze lijn. Deze 3 PCR reacties gaven geen problemen (juiste curves, juiste resultaten). Verschillende stammen van Salmonella werden in deze reeks met PCR teruggevonden Besluit De resultaten op PCR en volgens de ISO methode kwamen niet overeen voor 2 monsters. Er wordt verwacht dat de PCR methode gevoeliger is dan de ISO methode. Zowel 1 als 2 BCR s in melk werden teruggevonden zodat de detectielimiet < 10 cfu/25 ml. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

12 3.4 Validatieproef 4: categorie 1,3,4 + 1 BCR en proefmonsters Werkwijze In een volgende reeks werden door SV en KDG telkens 2 producten per categorie besmet met 1 BCR (= 5 cfu) en geanalyseerd (uitzondering: categorie 1: zie validatieproef 3) Resultaten PCR werd door SV en KDG uitgevoerd op 08/10/08. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De PCR plaat werd afgedicht met folie. Tabel 4 Resultaten validatieproef 4 Monsternummer Analist Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat 1a KDG groentemix + BCR 3 + niet uitgevoerd 1b groentemix + BCR 3 + niet uitgevoerd 2a kaas + BCR 4 - niet uitgevoerd 2b kaas + BCR 4 + niet uitgevoerd 3a gehakt + BCR 2 - niet uitgevoerd 3b gehakt + BCR 2 - niet uitgevoerd 4a vlees + BCR 4 - niet uitgevoerd 4b vlees + BCR 4 - niet uitgevoerd 3a blanco gehakt blanco 2 - niet uitgevoerd 3b blanco gehakt blanco 2 - niet uitgevoerd 4a blanco vlees blanco 4 - niet uitgevoerd 4b blanco vlees blanco 4 - niet uitgevoerd kaas vacht (S. Senftenberg) vacht vacht (S. Virchow) vacht a SV groentemix + BCR 3 + niet uitgevoerd 1b groentemix + BCR 3 + niet uitgevoerd 2a kaas + BCR 4 - niet uitgevoerd 2b kaas + BCR 4 + niet uitgevoerd 3a gehakt + BCR 2 + niet uitgevoerd 3b gehakt + BCR 2 - niet uitgevoerd 4a vlees + BCR 4 - niet uitgevoerd ISO LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

13 4b vlees + BCR 4 - niet uitgevoerd 1a blanco groentemix blanco 3 - niet uitgevoerd 1b blanco groentemix blanco 3 - niet uitgevoerd 2a blanco kaas blanco 4 - niet uitgevoerd 2b blanco kaas blanco 4 - niet uitgevoerd vacht vloeibaar eiproduct volledige vogels kant en klaar product Referentiestam* Blanco steriel water - - niet uitgevoerd Aantal stalen 9 * S. Typhimurium Het monster werd volgens de ISO norm als positief teruggevonden, maar niet met de PCR methode. Het gaat over een monster vel, genomen van kippenkarkassen. Er kon geen verklaring gevonden worden (het staal bevond zich niet op de H -lijn, normale HEX-curve, ). Verschillende stammen van Salmonella werden in deze reeks met PCR teruggevonden. De versneden groenten werden zowel door SV als KDG als positief teruggevonden met toevoeging van 1 BCR. Vlees werd door niemand teruggevonden. Voor het gehakt en de kaas werden sommige besmette monsters teruggevonden. Dit kan erop wijzen dat de detectielimiet voor de methode hoger is dan 5 cfu. In deze test werden geen stalen op de H -lijn meegenomen Besluit De resultaten met PCR en volgens de ISO methode kwamen niet allemaal overeen: 1 staal werd niet met PCR teruggevonden. Niet alle besmette monsters werden teruggevonden zodat deze producten in een volgende proef (zie 3.6) opnieuw werden besmet maar nu met 2 BCR s. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

14 3.5 Validatieproef 5: Raemab (ringtest) Werkwijze De 5 melkpoeder stalen van Raemab werden door SV geanalyseerd met PCR en volgens de ISO methode Resultaten De test werd uitgevoerd op 16/10/08. De resultaten zijn aanwezig in de onderstaande tabel. De PCR plaat werd afgedicht met folie. Tabel 5 Resultaten Raemab Monsternummer Analist Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO SV melkpoeder Referentiestam blanco steriel water - - niet uitgevoerd Er werden geen stalen geanalyseerd op de H -lijn Besluit De resultaten met PCR en volgens de ISO norm kwamen overeen. Volgens de organisator was Salmonella Anatum aanwezig in monster Dit komt overeen met onze resultaten. 3.6 Validatieproef 6: categorie 2,4 + 2 BCR s en proefmonsters Werkwijze Er werden opnieuw monsters aangekocht om te besmetten en te analyseren. Deze keer werden 2 BCR s (= 10 cfu) toegevoegd. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

15 3.6.2 Resultaten PCR werd door SV uitgevoerd op 29/10/08. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. Een aantal stalen werden op lijn A of B geanalyseerd en ook op H om eventuele verschillen na te gaan. De PCR plaat werd afgedekt met folie. Tabel 6 Resultaten validatieproef 6 Monsternr. Analist Aard Categorie Resultaat PCR A/B Resultaat PCR H Resultaat ISO SV vleesbereidingen 2, vleesbereidingen 2, 4 - niet uitgevoerd vleesproducten vleesbereidingen 2, Vlees 1 varken lage rib niet uitgevoerd vlees 1 blanco - niet uitgevoerd niet uitgevoerd vlees 2 rumsteak rund vlees 2 blanco - niet uitgevoerd niet uitgevoerd gehakt 1 rund-varken gehakt 1 blanco - niet uitgevoerd niet uitgevoerd gehakt 2 varken-kalf gehakt 2 blanco - niet uitgevoerd niet uitgevoerd kaas camembert carref niet uitgevoerd kaas blanco - niet uitgevoerd niet uitgevoerd referentiestam blanco steriel water niet uitgevoerd Aantal stalen 4 Opnieuw werden sommige besmette stalen niet teruggevonden, ookal werden 10 cfu s toegevoegd (de detectielimiet van de PCR methode is volgens de fabrikant < 10 cfu). Een aantal zaken werden gecontroleerd: - vervaldatum BCR s: er werden BCR s gebruikt die houdbaar waren tot 01/01/2009; een mogelijke oorzaak bestaat erin dat deze BCR s door deze lange bewaartermijn toch van mindere kwaliteit waren - in 1.6 % van de BCR s zijn geen Salmonella spp. aanwezig; dit kan echter niet verklaren waarom er in deze proef zoveel besmette monsters niet werden teruggevonden - alle controles = OK - de monsters geanalyseerd op A/B of op H geven dezelfde resultaten. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

16 Bij het nakijken van de PCR curven echter is op H1 (monster vlees 1) wel een verschil aanwezig (zie bijlage 6b) met hetzelfde monster geanalyseerd op A5: op H1 daalt de curve op het einde van de PCR reactie en het signaal ligt lager. Toch is de eindconclusie dezelfde: beide waren positief. Dit dalen van de curve wijst op het uitdampen van de well tijdens de PCR reactie. - het is niet analist gebonden want alle analisten bekomen gelijkaardige resultaten Vlees 2, gehakt 1 en gehakt 2 werden door SV ook verder volgens de ISO methode geanalyseerd. Gehakt 1 werd niet teruggevonden maar de twee andere stalen wel Besluit Met toevoeging van 2 BCR s werden niet alle besmette monsters teruggevonden. Vlees en gehakt geven problemen. Deze proef wijst erop dat de detectielimiet van de methode > 10 cfu, wat volgens de fabrikant niet mogelijk is. Het uitdampen van de wells was in deze proef geen probleem, maar zou het wel kunnen zijn in andere runs. Daarom werd in een volgende proef enkel caps gebruikt. Ook werden nieuwe, recente BCR s besteld om te besmetten. 3.7 Validatieproef 7: categorie 2,3,4 + 2 BCR s en proefmonsters Werkwijze Zie Resultaten PCR werd door KDG en LS uitgevoerd op 30/10/08. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De PCR plaat werd afgedicht met caps. In de reeks van KDG werden nieuwe BCR s meegenomen (met een houdbaarheidstermijn tot oktober 2009). In de reeks van LS werden zowel oudere als nieuw toegekomen BCR s meegenomen. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

17 Tabel 7 Resultaten validatieproef 7 Monsternr. Analist Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO Kaas KDG camembert niet uitgevoerd Kaas blanco - Gehakt rund-varken (cfr. SV in proef 6) 2 - Vlees 1 hespensneden 4 - Vlees 1 blanco - Vlees 2 varken lage rib 4 + Vlees 2 blanco - blanco steriel water - - referentiestam kaas swabs swabs swabs swabs volledige vogels volledige vogels patisserie patisserie patisserie ber. rauwe eieren filet américain koude schotel filet américain Groenten 1 LS salade en rauwkost 3 + niet uitgevoerd Groenten 1 blanco - Groenten 2 geraspte wortelen 3 + Groenten 2 blanco - Kaas 1 camemebert Kaas 1 blanco - Kaas 2 camembert GB 4 + Kaas 2 blanco - Vlees 1 rumsteak rund 4 - Vlees 1 blanco - Vlees 2 hespensneden 4 + Vlees 2 blanco - Gehakt 1 rund-varken 2 - LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

18 Gehakt 1 blanco - Gehakt 2 varken-kalf 2 - Gehakt 2 blanco - Referentiestam Aantal stalen 14 Opnieuw werden een aantal besmette monsters niet teruggevonden met dit easy protocol. Het gebruik van caps en nieuwe BCR s heeft het probleem niet verholpen. Alle positieve curves vertoonden een goed exponentieel verloop Besluit Met toevoeging van 2 BCR s werden niet alle besmette monsters teruggevonden. Vlees en gehakt geven problemen. 3.8 Samenvatting besmette monsters proeven 2, 3, 4, 6 en 7 In onderstaande tabel wordt een samenvatting gegeven van de besmette monsters. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

19 Tabel 8 Samenvatting besmette monsters Aard Monster Analist Proef Aantal BCR s Resultaat PCR GPW GPW KDG/SV Melk UHT melk 1 SV UHT melk UHT melk 1 LS 1 + UHT melk UHT melk 1 EH 1 + UHT melk Groenten salademix 1 KDG salademix salademix 1 SV 1 + salademix salade en rauwkost LS geraspte wortelen 2 + Gehakt rundgehakt 1 KDG varken-rund rundgehakt 1 SV 1 + varken-rund rund-varken 3 SV varken-kalf varken-rund 3 KDG rund-varken 5 LS 2 - varken-kalf Vlees vees 1 KDG vees vees 1 SV 1 - vees varken lage rib SV rumsteak rund 2 - hespensneden KDG varken lage rib 2 + rumsteak rund LS 2 - hespensneden 2 + Kaas camembert 1 KDG camembert LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

20 camembert 1 SV 1 - camembert camembert GB SV camembert KDG camembert LS 2 + camembert GB 2 + Vlees en gehakt geven duidelijk problemen bij het bepalen van de detectielimiet. Dit werd besproken met het labo te Gembloux. In Gembloux hebben ze geen problemen ondervonden met het besmetten van deze matrices. Ze hebben wel geen BCR s gebruikt bij het besmetten omdat ze daar geen goede ervaring mee hadden in het verleden. Deze resultaten werden ook besproken met Biorad op 04/11/08. Volgens hen kan het zijn dat gehakt en vlees teveel interfererende flora hebben om de PCR reactie goed te laten doorgaan. Ze stellen voor om het standaard protocol uit te proberen voor deze stalen omdat op die manier meer staal wordt genomen (alle voorgaande proeven werden uitgevoerd met het easy protocol). Er werd opgemerkt dat waarschijnlijk vanaf 2009 het easy protocol zal aangepast worden: i.p.v. 50 µl zal 100 µl BPW worden genomen. Dit kan een oplossing zijn voor ons probleem (meer staalafname zodat de stoorflora minder belangrijk wordt) en zal in een volgende proef worden uitgetest. Op 04/11/08 werd tijdens de training van Biorad een staal vlees en gehakt meegenomen in de reeks. Beide besmet met 1 BCR en met 2 BCR s. Zowel het easy als het standaard protocol werden uitgevoerd. Het besmette vlees werd teruggevonden volgens beide protocols, zowel 1 BCR als 2 BCR s. Het gehakt besmet met 1 BCR werd niet teruggevonden volgens het easy protocol, maar wel volgens het standaard protocol. Gehakt geënt met 2 BCR s werd volgens beide protocols teruggevonden. Dit resultaat kan erop wijzen dat het standaard protocol beter is voor deze stalen. Er werden ook melkstalen geanalyseerd, maar deze bleken negatief te zijn a.g.v. een pipetteerfout van de opleider. Tijdens de opleiding van Biorad werd door onze analisten nagegaan of er verschillen waren in hun en onze werkwijze. Het enige verschil in werken dat kon achterhaald worden was de monstername: wanneer in het BPW een te dikke vetlaag aanwezig is, werd door onze analisten in voorgaande proeven een deel van het staal overgegoten in een Stomacherzak met filter vooraleer het staal werd bemonsterd voor PCR. Biorad stelde voor om met een grotere pipet eerst een deelmonster, voldoende onder de vetlaag genomen, in een BO-potje te pipetteren om daaruit dan 50 µl monster te nemen voor PCR. Dit zal in een volgende proef worden uitgetest. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

21 In deze reeks werd folie gebruikt. Op de positie H 12 werd een extra positieve controle meegenomen. Het bleek dat hier inderdaad verdamping optrad (zoals ook gezien bij de GGO s). Dit is in de grafieken te zien als een stijgende lijn (i.p.v. een exponentieel verloop). Op 05/11/08 werd het toestel door de fabrikant gecontroleerd maar er werd geen technisch defect vastgesteld. Biorad raadt het gebruik van caps aan in plaats van het gebruik van folie omdat het toestel de folie niet goed aandrukt zodat verdamping mogelijk kan zijn. Een andere opmerking van Biorad was in verband met de positieve controle: het wordt afgeraden om stelselmatig in een reeks dergelijke hoge besmetting mee te nemen om contaminatie te voorkomen. Daarom werd voorgesteld om de positieve controle zeker 1000 x te verdunnen zodat het signaal i.p.v. na 15 cycli pas na 25 cycli zou stijgen. In een volgende proef zal het referentiemonster worden meegenomen. 3.9 Validatieproef 8: detectielimiet in gehakt Omdat in bovenstaande proeven problemen optraden met het bepalen van de detectielimiet in vlees en vooral in gehakt, werd in deze proef de detectielimiet bepaald in gehakt volgens een nieuw protocol Werkwijze Twee soorten gehakt werden aangekocht om te besmetten met verschillende verdunningen van het referentiemonster van V.W.A. (lotnummer 6p-0712; 700 cfu/ml). De gebruikte verdunningen om te enten werden ook uitgeplaat op Brilliance Salmonella om het aantal cfu te bepalen (1 ml / 3 platen Brilliance Salmonella). Omdat het easy protocol van Biorad zal wijzigen (in plaats van 50 µl GPW, wordt 100 µl genomen en zo ook 100 µl reagens A) werd dit in deze test ook uitgeprobeerd. In deze proef werd ook voor vuile stalen, op aanraden van Biorad, eerst een deelmonster in een BO potje overgebracht om vervolgens 50 µl (of 100 µl) te nemen om mee verder te werken. Dit zou het contamineren van de pipet voorkomen en de kans op verstoring van de PCR reactie wegnemen. Omdat in de voorgaande proeven een te hoge besmetting van de positieve controle aanwezig was, werd in deze test slechts 1 ml van het referentiemonster meegenomen (= 700 cfu/ml) Resultaten De proef werd door KDG uitgevoerd op 12/11/08. PCR werd uitgevoerd op 13/11/08. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

22 De resultaten van de gebruikte verdunningen van het referentiemonster zijn aanwezig in onderstaande tabel. Tabel 9 Overzicht verdunningsoplossingen Verdunningsoplossing Verdunning cfu/ml Verwacht aantal * Geteld aantal B 1/8 referentiemonster C 1/2 B 44 9 D 1/2 C 22 6 E 1/2 D 11 4 F 1/2 E 6 4 * berekend aan de hand van de referentiewaarde De resultaten van de PCR zijn aanwezig in onderstaande tabel. Tabel 10 Overzicht resultaten validatieproef 8: detectielimiet gehakt Monsternr. Protocol Type gehakt Verdunning Resultaat PCR µl Varken-rund B + 2 C + 3 D + 4 E + 5 F - 6 geen - 7 Varken-kalf B + 8 C + 9 D + 10 E + 11 F + 12 geen µl Varken-rund B + 14 C + 15 D + 16 E + 17 F - 18 geen - 19 Varken-kalf B + 20 C + 21 D + 22 E + LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

23 23 F + 24 geen - Referentie referentiemonster ml Blanco water Besluit De detectielimiet van < 10 cfu/25 g werd met dit nieuwe besmettingsprotocol behaald. Misschien zijn de Salmonella s aanwezig in BCR s teveel gestresseerd om een goed PCR resultaat te geven. Alle volgende proeven zullen met dit nieuwe protocol worden uitgevoerd. Er werd geen verschil gevonden tussen het 50 µl en het 100 µl protocol. In dit geval werd Salmonella Enteritidis toegevoegd. In een van de volgende proeven zal uitgetest worden of Salmonella Typhimurium ook kan teruggevonden worden op een dergelijk laag niveau (validatieproef 10). 1 ml van het referentiemonster werd meegenomen als positieve controle, dit bleek nog te hoog te zijn omdat het PCR signaal al na 18 cycli begon te stijgen. In een volgende proef werd dit niveau van besmetting nog verlaagd Validatieproef 9: proefmonsters Werkwijze In deze proef werden door LS enkel proefstalen bemonsterd. Vuile stalen werden eerst bemonsterd in een BO potje vooraleer 50 µl te nemen voor het uitvoeren van de PCR Resultaten De PCR werd door LS uitgevoerd op 15/11/08. De resultaten zijn samengevat in onderstaande tabel. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

24 Tabel 11 Resultaten validatieproef 9 Monsternr. Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO Filet americain Filet americain Filet americain Filet americain Filet americain Gehakt Gehakt Gehakt Gehakt Gehakt Filet americain Filet americain Filet americain Filet americain Filet americain Roomijs Vacht Vacht Vacht Vacht Vacht kleppige weekdieren Versneden Vlees Versneden Vlees Versneden Vlees Vleesproducten Mayonaise Filet americain Filet americain Versneden vlees Filet americain Koude zakouski Versneden vlees Volledige vogels Referentie monster Blanco Steriel water Aantal stalen 34 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

25 Besluit De resultaten kwamen overeen. Er werd geen inhibitie teruggevonden bij mayonaise (= matrix waarbij inhibitie kan optreden volgens Biorad) Validatieproef 10: detectielimiet van S. Typhimurium en S. Enteritidis in vlees en gehakt In deze proef werd naast Salmonella Enteritidis ook met Typhimurium besmet Bepalen niveau opkweek referentiestam Op 24/11/08 heeft LS de referentiestam (Salmonella Typhimurium) opgekweekt en geteld om na te gaan wat de concentratie was na 3 u incubatie bij 37 C (BHI). Er werden twee opkweken aangemaakt. Na incubatie werd een verdunningsreeks aangemaakt om uit te platen (0.1 ml / Brilliance Salmonella). Het resultaat is aanwezig in onderstaande tabel. Tabel 12 Validatieproef 10a Verdunning Platen opkweek 1 Platen opkweek overgroeid overgroeid 10-1 overgroeid overgroeid 10-2 overgroeid overgroeid 10-3 overgroeid overgroeid concentratie 4.7 x 10 6 cfu/ml 6.2 x 10 6 cfu/ml Er werd in beide opkweken een vergelijkbaar aantal cfu s teruggevonden. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

26 Besmetten gehakt/vlees met S. Typhimurium en S. Enteritidis Werkwijze De werkwijze voor de besmetting met S. Typhimurium was als volgt: - opkweken referentiestam gedurende 3 u bij 37 C (BHI) - aanmaken verdunningsreeks tot uitplaten verdunning 10-6 en 10-7 (0.1 ml / Brilliance Salmonella) - gehakt (kalf-varken) en vlees (kotelet) besmetten met 1 ml van verdunning 10-6 en 1 ml van verdunning ook blanco monsters bepalen Voor de besmetting met S. Enteritidis werd vertrokken van het verdund referentiemonster zoals beschreven in validatieproef 8. Als positieve controle werd 1 kolonie van de referentiestam meegenomen. Vooraleer PCR uit te voeren werd het geïncubeerde BPW 1000 x verdund. Het 50 µl protocol werd gevolgd Resultaten De proef werd door LS uitgevoerd op 16/12/08 en PCR op 17/12/08. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De opkweek van de referentiestam bevatte 1.2 x 10 8 cfu/ml zodat het besmettingsniveau kon berekend worden (zie tabel). LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

27 Tabel 13 Resultaten validatieproef 10b Omschrijving Besmettingsniveau Resultaat PCR S. Typhimurium Gehakt + verdunning cfu + Gehakt + verdunning cfu + Vlees + verdunning cfu + Vlees + verdunning cfu + S. Enteritidis Gehakt + SE 17 cfu + Vlees + SE + Blanco s Gehakt geen - Vlees - Water - Referentie Stam onverdund ongekend + Stam 1000 x verdund ongekend Besluit Zowel Salmonella Enteritidis als Salmonella Typhimurium werden op een laag besmettingsniveau teruggevonden in gehakt en vlees. De positieve controle (referentiestam), 1000x verdund gaf ook een positief signaal met PCR. Het signaal van de onverdunde referentiestam ging na 16 cycli omhoog terwijl het signaal van de verdunde referentiestam pas na 28 cycli de hoogte in ging. Dit lijkt een goede manier om in volgende runs toe te passen. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

28 3.12 Validatieproef 11: resultaten SDC In de eerste reeks werd besmet met 1 BCR, in alle andere reeksen werd besmet volgens het nieuw protocol. In de tweede reeks werden ook twee alternatieven uitgeprobeerd om mee te nemen als positieve controle: µl van het referentiemonster (i.p.v. 1 ml) - referentiestam 1000 x verdunnen (i.p.v. een volledige kolonie mee te nemen) Resultaten reeks 1 SDC De eerste reeks werd uitgevoerd onder supervisie van KDG op 14/11/08. Een samenvatting van de uitgevoerde testen door SDC is aanwezig in onderstaande tabel. Tabel 14 Resultaten validatieproef 11: reeks 1 Datum PCR Monsternr. Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO 14/11/08 1 Melk niet uitgevoerd Aantal stalen 9 2 Blanco melk 1-3 Melk Blanco melk 2-5 Geraspte wortelen Blanco wortelen - 7 Rauwkost Blanco rauwkost Vleessla Kipsla Charc. worst Vleesber. pluimvee (S. Typhimurium) Vleesber. pluimvee (S. Typhimurium) Vleesber. pluimvee (S. Typhimurium) Vleesber. pluimvee (S. Typhimurium) Vleesber. pluimvee (S. Typhimurium) Kaas Referentie 1 ml referentiemonster Blanco Steriel water - - niet uitgevoerd Melk geënt met 1 BCR werd niet teruggevonden. Dit werd herhaald in een volgende proef maar met het nieuwe protocol zoals beschreven in validatieproef 8. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

29 Resultaten reeks 2 SDC De proef werd op 10/12/08 uitgevoerd onder supervisie van SV. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De besmettingsoplossing bevatte 1 cfu/ml (1 kolonie op Brilliance Salmonella). In deze proef werd ook een test uitgevoerd i.v.m. de positieve controle: er werden twee protocols uitgetest (zie tabel). Tabel 15 Resultaten validatieproef 11: reeks 2 Datum PCR Monsternr. Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO 10/12/08 Kaas 1 Besmette kaas 4 + niet uitgevoerd Kaas 1b Blanco kaas - Kaas 2 Besmette kaas 4 + Kaas 2b Blanco kaas - Melk Besmette melk 1 + Melkb Blanco melk Kipsla Weekdieren Kipsla PoscontA 100 µl van het - + niet uitgevoerd referentiemonster PoscontB 1 kolonie van de - + referentiestam 1000 x verdund Referentiestam Blanco water - - Aantal stalen 3 De besmette monsters werden correct teruggevonden. Zowel PoscontA als PoscontB hadden te hoge DNA waarden (al na 20 cycli positief). Op 17/12/08 werd door LS een ander protocol uitgetest (zie validatieproef 10). LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

30 Resultaten reeks 3 SDC De proef werd zelfstandig uitgevoerd op 19/12/08. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De besmettingsoplossing bevatte 4 cfu/ml (4 kolonies op Brilliance Salmonella). Tabel 16 Resultaten opleiding SDC reeks 3 Datum PCR Monsternr. Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO 17/12/08 gehakt a Besmet gehakt (varken-kalf) 2 + niet uitgevoerd Aantal stalen 9 blanco Blanco gehakt * - gehakt b Besmet gehakt (varken-rund) 2 + blanco Blanco gehakt - Vlees a Besmet vlees (kotelet) 4 + Blanco Blanco vlees * - Vlees b Besmet vlees (biefstuk) 4 + blanco Blanco vlees pudding pudding volledige vogels versneden vlees braadkippen versneden vlees bereidingen met rauwe eieren vloeibare eiproducten koude zakoeski Blanco water - - niet uitgevoerd referentie referentiemonster * blanco werd door LS geanalyseerd in proef 10 (SDC en LS hebben dezelfde stalen gebruikt om te besmetten en te analyseren) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

31 4 Algemeen besluit De detectielimiet van de PCR methode voor de vier verschillende categorieën is < 10 cfu / 25 g of ml. Een samenvattende tabel van alle besmette monsters wordt hieronder gegeven. Tabel 17 Overzicht besmette monsters Datum Monsternummer Aard Categorie Resultaat PCR 01/10/08* Melk + 1 BCR melk 1 + Melk + 2 BCR melk 1 + Melk + 1 BCR melk 1 + Melk + 2 BCR melk 1 + Melk + 1 BCR melk 1 + Melk + 2 BCR melk /10/2008* 1a groentemix + BCR 3 + 1b groentemix + BCR 3 + 2a kaas + BCR 4-2b kaas + BCR 4 + 3a gehakt + BCR 2-3b gehakt + BCR 2-4a vlees + BCR 4-4b vlees + BCR 4-3a blanco gehakt blanco 2-3b blanco gehakt blanco 2-4a blanco vlees blanco 4-4b blanco vlees blanco 4-1a groentemix + BCR 3 + 1b groentemix + BCR 3 + 2a kaas + BCR 4-2b kaas + BCR 4 + 3a gehakt + BCR 2 + 3b gehakt + BCR 2-4a vlees + BCR 4-4b vlees + BCR 4-1a blanco groentemix blanco 3-1b blanco groentemix blanco 3-2a blanco kaas blanco 4-2b blanco kaas blanco 4 - LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

32 29/10/2008* Vlees 1 varken lage rib 4 + vlees 1 blanco - vlees 2 rumsteak rund 4 - vlees 2 blanco - gehakt 1 rund-varken 2 - gehakt 1 blanco - gehakt 2 varken-kalf 2 - gehakt 2 blanco - kaas camembert carref. 4 + kaas blanco - 30/10/2008* Kaas camembert Kaas blanco - Gehakt rund-varken 2 - (cfr. SV in proef 6) Vlees 1 hespensneden 4 - Vlees 1 blanco - Vlees 2 varken lage rib 4 + Vlees 2 blanco - Groenten 1 salade en rauwkost 3 + Groenten 1 blanco - Groenten 2 geraspte wortelen 3 + Groenten 2 blanco - Kaas 1 camemebert Kaas 1 blanco - Kaas 2 camembert GB 4 + Kaas 2 blanco - Vlees 1 rumsteak rund 4 - Vlees 1 blanco - Vlees 2 hespensneden 4 + Vlees 2 blanco - Gehakt 1 rund-varken 2 - Gehakt 1 blanco - Gehakt 2 varken-kalf 2 - Gehakt 2 blanco - 12/11/2008 Gehakt + 23 cfu Varken-rund B + Gehakt + 9 cfu 100 µl protocol C + Gehakt + 6 cfu D + Gehakt + 4 cfu E + Gehakt + 4 cfu F - LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

33 Blanco geen - Gehakt + 23 cfu Varken-kalf B + Gehakt + 9 cfu 100 µl protocol C + Gehakt + 6 cfu D + Gehakt + 4 cfu E + Gehakt + 4 cfu F + blanco geen - Gehakt + 23 cfu Varken-rund B + Gehakt + 9 cfu 50 µl protocol C + Gehakt + 6 cfu D + Gehakt + 4 cfu E + Gehakt + 4 cfu F - blanco geen - Gehakt + 23 cfu Varken-kalf B + Gehakt + 9 cfu 50 µl protocol C + Gehakt + 6 cfu D + Gehakt + 4 cfu E + Gehakt + 4 cfu F + blanco geen - 14/11/08 Melk 1 Besmette melk 1 - Blanco melk 1 Blanco - Melk 2 Besmette melk 1 + Blanco melk 2 Blanco - Geraspte wortelen Besmette Geraspte 3 + wortelen Blanco wortelen Blanco - Rauwkost Besmette Rauwkost 3 + Blanco rauwkost Blanco rauwkost - 24/11/2008 Gehakt cfu Besmet monster 2 + Gehakt + 13 cfu Besmet monster + Vlees cfu Besmet monster 4 + Vlees + 13 cfu Besmet monster + Gehakt + 17 cfu Besmet monster 2 + Vlees +17 cfu Besmet monster 4 + Gehakt Blanco - Vlees blanco - 10/12/08 Kaas 1 Besmette kaas 4 + Kaas 1b Blanco kaas - LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

34 Kaas 2 Besmette kaas 4 + Kaas 2b Blanco kaas - Melk Besmette melk 1 + Melkb Blanco melk - 17/12/08 gehakt a Besmet gehakt (varkenkalf) 2 + blanco Blanco gehakt * - gehakt b Besmet gehakt (varkenrund) 2 + blanco Blanco gehakt - Vlees a Besmet vlees (kotelet) 4 + Blanco Blanco vlees * - Vlees b Besmet vlees (biefstuk) 4 + blanco Blanco vlees - *BCR protocol (werkte niet altijd) Verdere aanvulling van de besmette monsters is aanwezig in onderstaande tabel. Tabel 18 Overzicht vervolg besmette monsters Datum/analist Besmettingsniveau Monster Type Resultaat 08/01/09 AVB 12/01/09 AVB 15/01/09 AVB 6 cfu ME 1 Melk ME 1 blanco ME 2 ME 2 blanco GR 1 GR 1 blanco GR 2 GR 2 blanco Categorie 1 Versneden groenten Categorie 3 (/ 25 g of ml) Aanwezig Aanwezig Aanwezig Aanwezig 1 cfu KA 1 Kaas Aanwezig KA 1 blanco KA 2 KA 2 blanco Aanwezig 4 cfu VL 1 Vlees Aanwezig VL 1 blanco VL 2 VL 2 blanco Aanwezig GE 1 Gehakt Aanwezig LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

35 14/01/09 CDS 19/01/09 CDS 29/01/09 CDS 30/01/09 CDS 15/01/09 MDM 19/01/09 MDM GE 1 blanco GE 2 Aanwezig GE 2 blanco 3 cfu ME 1 Melk Aanwezig ME 1 blanco ME 2 Aanwezig ME 2 blanco GR 1 Versneden groenten Aanwezig GR 1 blanco GR 2 Aanwezig GR 2 blanco 8 cfu KA 1 Kaas Aanwezig KA 1 blanco KA 2 Aanwezig KA 2 blanco VL 1 Vlees Aanwezig VL 1 blanco VL 2 Aanwezig VL 2 blanco 3 cfu GE 3 Gehakt Aanwezig GE 3 blanco GE 4 (laag niveau) GE 4 blanco 14 cfu GE 5 Gehakt Aanwezig GE 5 blanco 3 cfu ME 1 Melk Aanwezig ME 1 blanco ME 2 Aanwezig ME 2 blanco GR 1 Versneden groenten Aanwezig GR 1 blanco GR 2 Aanwezig GR 2 blanco 13 cfu KA 1 Kaas Aanwezig KA 1 blanco KA 2 Aanwezig LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

36 29/01/09 MDM 30/01/09 MDM KA 2 blanco VL 1 Vlees / gehakt Aanwezig VL 1 blanco VL 2 Aanwezig VL 2 blanco GE 2 Aanwezig GE 2 blanco 5 cfu GE 3 Gehakt (laag niveau) GE 3 blanco GE 4 Aanwezig GE 4 blanco 10 cfu GE 5 Gehakt Aanwezig GE 5 blanco Een samenvatting van alle proefmonsters die parallel volgens de ISO norm en met de PCR methode werden uitgevoerd is aanwezig in onderstaande tabel. De resultaten kwamen grotendeels overeen.. Tabel 19 Overzicht monsters parallel PCR en ISO Monsternummer Aard Categorie Resultaat PCR Resultaat ISO worst (S. Paratyphi B) worst (S. Paratyphi B) worst (S. Paratyphi B) worst (S. Paratyphi B) separatorvlees separatorvlees roomijs babyvoeding radijzen kip ham worst Schaaldieren chocomousse swabs swabs swabs LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

37 swabs swabs weekdieren ham worst weekdieren schaaldieren schaaldiersalade schaaldiersalade swabs swabs swabs swabs swabs eiproduct poeder eiproduct poeder eiproduct poeder worst worst ham NHC dierl. eiwitten (S. Llandof) NHC dierl. eiwitten (S. Anatum) NHC dierl. eiwitten (S. Montevideo) NHC dierl. eiwitten (S. Llandof) NHC dierl. eiwitten (S. Montevideo) ham schaaldiersalade kaas vacht (S. Senftenberg) vacht vacht (S. Virchow) vacht vacht vloeibaar eiproduct volledige vogels kant en klaar product vleesbereidingen 2, vleesbereidingen 2, 4 niet uitgevoerd vleesproducten LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

38 vleesbereidingen 2, kaas swabs swabs swabs swabs volledige vogels volledige vogels patisserie patisserie patisserie ber. rauwe eieren Filet américain koude schotel Filet américain Filet americain Filet americain Filet americain Filet americain Filet americain gehakt Gehakt Gehakt Gehakt Gehakt Filet americain Filet americain Filet americain Filet americain Filet americain Roomijs Vacht Vacht Vacht Vacht Vacht kleppige weekdieren Versneden vlees Versneden vlees LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

39 Versneden vlees Vleesproducten Mayonaise Filet americain Filet americain Versneden vlees Filet americain Koude zakouski Versneden vlees Volledige vogels Vleessla Kipsla Charc. worst Vleesber. pluimvee (S. Typhimurium) Vleesber. pluimvee (S. Typhimurium) Vleesber. pluimvee (S. Typhimurium) Vleesber. pluimvee (S. Typhimurium) Vleesber. pluimvee (S. Typhimurium) Kaas Kipsla Weekdieren Kipsla pudding pudding volledige vogels versneden vlees braadkippen versneden vlees bereidingen met rauwe eieren vloeibare eiproducten koude zakoeski LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

40 5 Foto s van de methode Hieronder volgen enkele foto s van de methode. PCR met bijhorende computer LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

41 PCR plaat in het PCR toestel brengen en starten van het toestel LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

42 Enten RVS en MKTTn + XLD plaat LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

43 + Brilliance Salmonella LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42

44 Bevestigingstest met API LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /42