VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION

Transcriptie

1 LABO: FLVVM VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / Date du dernière adaption Bepaling van het aantal Pseudomonas aeruginosa in water I-MET-042 Filtratietechniek aflezen platen bevestiging ISO 16266:2006 water 21/10/2014

2 LABO: FLVVM Overzicht van de prestatiekenmerken : De herhaalbaarheid bedraagt 0.20 log. De meetonzekerheid bedraagt 0.25 log en de intralabreproduceerbaarheid 0.35 log.. De validatie voldoet aan de procedure LAB 00 P180 De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn: Deelnemen aan een ringtest met het bekomen van goede resultaten. Behalen van een herhaalbaarheid van 0.50 log en intralabreproduceerbaarheid van 1 log Inhoud: Versie Herziening Reden Wijzigingen door / datum 1 EH / Herwerking volgens nieuwe template, instructie en aanvulling met gegevens Volledig

3 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Bepaling van het aantal Pseudomonas aeruginosa in water I-MET-042 Filtratietechniek aflezen platen bevestiging ISO 16266:2006 Water Verificatie Elly Harnie Sectieverantwoordelijke biologische analyses Naam Nom Elly Harnie Handtekeningen - Signatures: get. Functie - Fonction: Sectieverantwoordelijke biologische analyses Datum - Date: 20/10/2014 Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par Analisten microbiologie Liesbeth Stas, Kristof De Greif, Sandra De Cocker, Anja Van Beversluys, Stefanie Vanbiesbrouck, Conny De Schepper, Chantal Focquet, Mieke De Mits Start - Début: Einde - Fin: Dit rapport is een herwerking van het originele rapport opgesteld in , naar aanleiding van de nieuwe template. Naam Nom Ronny Martens Handtekeningen - Signatures: get. Functie - Fonction: QAM Datum - Date: 21/10/2014 Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P LAB 00 P 180 F 003 validatiedossier pseudomonas v /11

4 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION... 1 MATRICES : INLEIDING INITIËLE PROEVEN: BESMETTEN VAN WATER MET PSEUDOMONAS BEPALEN VALIDATIEPARAMETERS JUISTHEID BESMETTE MONSTERS HERHAALBAARHEID BESMETTE MONSTERS INTRALABREPRODUCEERBAARHEID EN MEETONZEKERHEID BESMETTE MONSTERS KOELING BESMETTE MONSTERS RINGANALYSE BESLUIT FOTO S LAB 00 P 180 F 003 validatiedossier pseudomonas v /11

5 Samenvatting validatiegegevens Résumé des données de validation Overzicht matrices/ validatieparameters/ criteria Matrices : Water (gebruikt in bereidingen van levensmiddelen, tafelwater, behandeld leidingwater, ) Volgende parameters werden bepaald : - Herhaalbaarheid - Intralabreproduceerbaarheid (en meetonzekerheid) - Relatieve juistheid Criteria : Volgende criteria werden vooropgesteld : - Voor de juistheid van de besmette monsters 0.35 log - Voor de herhaalbaarheid 0.22 log - Voor de intralabreproduceerbaarheid 0.47 log Overzicht validatietesten 1. Inleiding Dit dossier bevat een herwerking van het oorspronkelijke validatiedossier ( ) van de bepaling van Pseudomonas aeruginosa in water, aangevuld met nieuwe gegevens. In punt 2 van het dossier worden de initiële proeven beschreven en onder punt 3 de validatieproeven. In punt 4 wordt de ringtest beschreven. LAB 00 P 180 F 003 validatiedossier pseudomonas v /11

6 2. Initiële proeven: besmetten van water met Pseudomonas Omdat waterstalen nauwelijks besmet zijn met Pseudomonas werden stalen besmet om te testen. Het filtratiesysteem werd getest bij de opstart van Enterococcen (zie desbetreffende validatiedossier). Werkwijze Er werd gebruikgemaakt van Quanti-cults voor het besmetten van stalen. Werkwijze oplossen Quanti-cult Pseudomonas aeruginosa: - Neem een vial (A) met een blauw dekseltje en plaats het in een broedstoof bij 37 C om de vloeistof op te warmen gedurende 5 tot 10 minuten - Neem een vial (B) met een rood dekseltje en laat het op kamertemperatuur komen - Neem vial A uit de broedstoof en verwijder het blauwe deksel en plaats het rode deksel van vial B op vial A. - Plaats vial A in het blauwe rekje, aanwezig in de doos - Draai het blauwe rek om en plaats het in een broedstoof op 37 C gedurende 15 minuten - Na incubatie: meng door de vial verschillende keren om te draaien Opgelet: niet schudden Controleer of alle bacteria opgelost zijn. Indien er nog zwarte partikeltjes te zien zijn op het rode deksel, plaats de vial terug in de broedstoof voor 1 tot 2 minuten Werkwijze besmetting (verwacht aantal < 100 cfu): - Breng 400 µl van de opgeloste Quanti-cult in 400 ml drinkwater en meng goed - Filtreer hiervan 100 ml en leg de filter op CN-agar en incubeer. Doe dit tweemaal per persoon. Analyseer ook het blanco monster drinkwater (100 ml filtreren). Plaat 100 µl van de Quanti-cult uit op CN-agar om de concentratie te tellen. Tel de platen na 44 tot 48 h en controleer ze na 2 dagen koeling (aantal en uitzicht kolonies). Bevestig 5 kolonies per positieve plaat. De analysereeks ziet er als volgt uit: - besmet water: 1 plaat - besmet water duplo: 1 plaat - blanco water: 1 plaat - telling Quanti-cult = 1 plaat (100 µl) LAB 00 P 180 F 003 validatiedossier pseudomonas v /11

7 Resultaten De proef werd door SDC en AVB uitgevoerd op 17/03/09. Een samenvatting van de resultaten is aanwezig in onderstaande tabel. Tabel Resultaten proef 1 Pseudomonas aeruginosa Monster AVB SDC AVB SDC cfu/100ml cfu/100ml Log cfu/100ml Log cfu/100ml 1a 16 5** b 14 8** a 7** b ** geschatte aantallen blanco < 1 < 1 In 100 µl bleken 5-10 cfu s terug te vinden te zijn (= gemiddeld 7.5 cfu/ml of 0.88 log *) De stam Enterococcus faecalis gaf een goede groei op plaat (geel, fluorescerende kolonies). De kolonies, afkomstig van de quanti-cult gaven blauw-groene kolonies. Op beide soorten werden alle bevestigingstesten uitgevoerd, met een goed resultaat tot gevolg. King B agar bleek na 2 dagen koeling nog altijd goed af te lezen. Besluit De juistheden en duploverschillen zijn goed, ook al gaat het soms om geschatte aantallen. Bij een volgende proef zal er op een iets hoger niveau worden besmet. 3. Bepalen validatieparameters De proef, beschreven onder 1. werd uitgevoerd met steeds verschillende koppels en op verschillende tijdstippen om de validatieparameters te bepalen. De proef werd iets aangepast omdat op een hoger niveau werd besmet (800 µl opgeloste Quanti-cult toevoegen aan 400 ml water i.p.v. 400 µl). - Breng 800 µl van de opgeloste Quanti-cult in 400 ml drinkwater en meng goed LAB 00 P 180 F 003 validatiedossier pseudomonas v /11

8 - Filtreer hiervan 100 ml en leg de filter op CN-agar en incubeer C bij 36 C±2 C Doe dit tweemaal per persoon. Analyseer ook het blanco monster drinkwater (100 ml filtreren). Plaat 100 µl van de Quanti-cult uit op CN-agar om de concentratie te tellen. Tel de platen na 44 tot 48 h en controleer ze na 2 dagen koeling (aantal en uitzicht kolonies). Bevestig 5 kolonies per positieve plaat. De analysereeks ziet er als volgt uit: - besmet water: 1 plaat - besmet water duplo: 1 plaat - blanco water: 1 plaat - telling Quanti-cult = 1 plaat (100 µl) AVB en SDC gaven de praktische uitleg aan de analisten. Er werden verschillende types van drinkwater getest. 3.1 Juistheid besmette monsters De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De relatieve juistheden werden uitgerekend aan de hand van een referentiewaarde, bepaald in elke reeks. Alle resultaten voldoen aan het vooropgestelde criterium van 0.35 log, met uitzondering van de reeksen uitgevoerd op 23/04/2009 en 16/6/2009 (te wijten aan geschatte aantallen van de Quanticult zelf). LAB 00 P 180 F 003 validatiedossier pseudomonas v /11

9 Tabel Overzicht relatieve juistheid d (log) Datum Monster Analist cfu / 100 ml d 17/03/2009 1a SDC 5-0,18 AVB 16 0,32 1b SDC 8 0,02 AVB 14 0,27 31/03/2009 2a SDC 20 0,04 LS 15-0,08 2b SDC 26 0,15 LS 24 0,12 31/03/2009 3a AVB 22 0,18 SV 16 0,04 3b AVB 17 0,07 SV 19 0,12 6/04/2009 4a LS 27 0,06 KDG 34 0,16 4b LS 26 0,04 KDG 27 0,06 6/04/2009 5a SDC 21 0,22 SV 23 0,26 5b SDC 27 0,33 SV 20 0,20 10/04/2009 6a LS 14 0,15 KDG 15 0,18 6b LS 18 0,26 KDG 14 0,15 23/04/2009 8a LS 16 0,50 MDM 15 0,48 8b LS 11 0,34 MDM 15 0,48 16/06/2009 9a CDS 20 0,42 SDC 23 0,48 9b CDS 23 0,48 SDC 21 0,44 Blanco s < 1 cfu / 100 ml ; a en b = duplo s LAB 00 P 180 F 003 validatiedossier pseudomonas v /11

10 3.2 Herhaalbaarheid besmette monsters De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De herhaalbaarheid bedraagt 0.20 log. Daarmee voldoet ze aan het eigen criterium van 0.22 log. Tabel Gegevens herhaalbaarheid (cfu/100ml) Datum Analist Resultaat 1 Resultaat 2 17/03/2009 SDC 5 8 AVB /03/2009 SDC LS /03/2009 AVB SV /04/2009 LS KDG /04/2009 SDC SV /04/2009 LS KDG /04/2009 KDG CDS /04/2009 LS MDM /06/2009 CDS SDC /09/2009 MDM LS Intralabreproduceerbaarheid en meetonzekerheid besmette monsters De meetonzekerheid werd bepaald conform de instructie LAB P 507 Microbiologie Schatting van de Meetonzekerheid. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. De meetonzekerheid bedraagt 0.25 log en de intralabreproduceerbaarheid 0.35 log. LAB 00 P 180 F 003 validatiedossier pseudomonas v /11

11 Staal nummer Tabel Gegevens meetonzekerheid (drinkwater) Datum Resultaat A (kve/ 100ml) Resultaat B (kve/ 100ml) 1 17/03/ /03/ /03/ /04/ /04/ /04/ /04/ /04/ /06/ /09/ Koeling besmette monsters Tijdens de validatietesten werd in verschillende reeksen de koeling uitgetest van platen (controle uitzicht en hoeveelheid kolonies ; controle koeling bevestigingstesten ; resultaten). Een overzicht wordt gegeven in onderstaande tabel. Tabel Samenvatting testen koelen Datum reeks Analist Test OK/NOK 17/03/09 AVB 2 d koelen King B OK 31/03/09 LS 2 d koelen CN-agar na incubatie OK 31/03/09 SV 2 d koelen CN-agar na incubatie OK 06/04/09 LS 2 d koelen CN-agar na incubatie OK 06/04/09 KDG 2 d koelen CN-agar na incubatie 1 d koelen NA agar water na incubatie OK De ISO norm 8199 laat toe om platen te koelen indien ze niet dadelijk kunnen afgelezen worden indien er geen veranderingen optreden. Bovenstaande tabel toont aan dat het koelen van platen na incubatie geen problemen geeft. 4. Ringanalyse Op 13/10/2009 werd deelgenomen aan een ringtest (KWR). Er werden 4 stalen geanalyseerd en de resultaten werden als Goed beoordeeld door de organisator. LAB 00 P 180 F 003 validatiedossier pseudomonas v /11

12 5. Besluit De herhaalbaarheid bedraagt 0.20 log. De meetonzekerheid bedraagt 0.25 log en de intralabreproduceerbaarheid 0.35 log. Daarmee voldoen ze aan de vooropgestelde criteria. 6. Foto s Hieronder zijn enkel foto s van de methode aanwezig. Filtratietoestel LAB 00 P 180 F 003 validatiedossier pseudomonas v /11

13 CN agar (blanco en geënt) Buisje King B agar (bevestiging) LAB 00 P 180 F 003 validatiedossier pseudomonas v /11