VALIDATIEPLAN PLAN DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par I-MET-FLVVT-140: Bepaling van Pyrethroïden in vlees GC-MS Vlees Totaal Eva Wevers Sectieverantwoordelijke Contaminanten Eva Wevers Handtekeningen - Signatures: Sectieverantwoordelijke Contaminanten 03/08/2011 Get. Goedgekeurd door Eva Wevers Sectieverantwoordelijke Contaminanten 03/08/2011 Handtekeningen - Signatures: Get. LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan Modèle plan de validation v.01 2012-03-15 1/24
Stap Phase 1: Bepaling van het toepassingsgebied Déterminer le champs d application Matrices: Vlees Componenten: Pyrethroïden: Bifenthrin Cyfluthrin Cyhalothrin (lambda) Cypermethrin Deltamethrin (cis) Fenvaleraat (RR/SS-isomeren) Fenvaleraat (RS/SR-isomeren) Permethrin Fenvaleraat (som RR/SS- en RS/SS-isomeren) Werkgebied: éénpuntskalibratie: op basis van controlemonster belast op MRL Kalibratiecurve: meerdere punten onder en boven MRL (concentraties worden vastgelegd na lineariteitsonderzoek) Stap Phase 2: Doel en statuut van de analysemethode Le but et status de la méthode d analyse Het betreft een: Kwantitatieve methode Interne (in-house) methode Screeningsmethode: kwantificatie aan de hand van éénpuntskalibratie op basis van controlemonster belast op MRL Bevestigingsmethode: kwantificatie aan de hand van kalibratiecurve LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan Modèle plan de validation v.01 2012-03-15 2/24
Stap Phase 3: Keuze validatieparameters Choisir les paramètres à valider De volgende validatieparameters zullen bepaald worden tijdens het validatieonderzoek: Werkgebied Lineariteit Juistheid/terugvinding Precisie: herhaalbaarheid en reproduceerbaarheid Selectiviteit/specificiteit Aantoonbaarheidsgrens en bepaalbaarheidsgrens Meetonzekerheid De acceptatiecriteria voor de verschillende validatieparameters worden beschreven in stap 4: Externe eisen voor validatieparameters Stap Phase 4: Externe eisen voor validatieparameters Des exigences externes pour les paramètres à valider De MRL s voor pyrethroïden zijn terug te vinden in Verordening (EG) nr. 396/2005 van het Europees Parlement en de Raad van 23 februari 2005 tot vaststelling van maximumgehalten aan bestrijdingsmiddelenresiduen in of op levensmiddelen en diervoeders van plantaardige en dierlijke oorsprong en houdende wijziging van Richtlijn 91/414/EG. Verordening (EU) nr. 37/2010 van de Commissie van 22 december 2009 betreffende farmacologisch werkzame stoffen en de indeling daarvan op basis van maximumwaarden voor residuen in levensmiddelen van dierlijke oorsprong Richtlijnen voor de validatieprocedure van pesticidenresidu s zijn terug te vinden in SANCO document (SANCO/12495/2011 Method Validation and Quality Control Procedures for Pesticide Residues Analysis in Food and Feed). Overzicht van de validatieparameters en de criteria (bron SANCO/12495/2011) Validatieparameter Criteria Lineariteit Afwijking < ± 20% LOQ MRL Specificiteit (repons in blanco monsters) < 30% van LOQ Precisie: RSD r 20% Precisie: RSD wr 20% Juistheid 70 120% LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan Modèle plan de validation v.01 2012-03-15 3/24
De validatieprocedure wordt uitgevoerd volgens de richtlijnen in Beschikking 2002/657/EG van de Commissie van 12 augustus 2002 ter uitvoering van Richtlijn 96/23/EG van de Raad wat de prestaties van analysemethoden en de interpretatie van resultaten betreft. Overzicht van de criteria voor identificatie door middel van massaspectrometrie (bron Beschikking 2002/657/EG) Relatieve retentietijd van de analyt moet overeenkomen met die van de ijkoplossing binnen een marge van ± 0.5% voor GC-MS Maximaal toelaatbare marges voor relatieve ionenintensiteiten voor GC-MS Relatieve intensiteit (% van hoofdpiek) Maximaal toelaatbare marge > 50% ± 20% > 20% tot 50% ± 25% > 10% tot 20% ± 30% 10% ± 50% Stap Phase 5: Keuze van de monsters Le choix d échantillons Wegens het ontbreken van gecertificeerd referentiemateriaal wordt het validatieonderzoek uitgevoerd op monsters die belast worden met een standaardoplossing. Voor het validatieonderzoek werd gebruik gemaakt van rundvlees, varkensvlees en kippenvlees uit de supermarkt. LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan Modèle plan de validation v.01 2012-03-15 4/24
VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / Date de la dernière adaption I-MET-FLVVT-140: Bepaling van Pyrethroïden in vlees GC-MS Vlees 02/07/2012 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 5/24
Overzicht van de prestatiekenmerken: o Juistheid (zie paragraaf 3) o Precisie (zie paragraaf 4) De validatie voldoet aan procedure LAB 00 P180 De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn: o Precisie: RSD wr (binnenlaboratoriumreproduceerbaarheid) bepaald op minstens één niveau 20% (voor screening op ½ MRL of lager en voor bevestiging op MRL-niveau) o Juistheid (of terugvinding) bepaald op minstens één niveau gelegen tussen 70 en 120% (voor screening op ½ MRL of lager en voor bevestiging op MRL-niveau) Historiek validatie Versie Herziening door/datum Reden van herziening Wijzigingen Versie 01 Eva Wevers 07/2012 / / LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 6/24
VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par I-MET-FLVVT-140: Bepaling van Pyrethroïden in vlees GC-MS Vlees Totaal Eva Wevers Sectieverantwoordelijke Contaminanten Eva Wevers Handtekeningen - Signatures: Sectieverantwoordelijke Contaminanten 02/07/2012 Get. Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par Mieke Van Thienen - Analist Sara Crauwels - Analist Start - Début: 11/08/2011 Einde - Fin: 10/02/2012 Eva Wevers Sectieverantwoordelijke Contaminanten 02/07/2012 Handtekeningen - Signatures: Get. Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P 00 180. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 7/24
Inhoudstabel VALIDATIEPLAN PLAN DE VALIDATION... 1 STAP PHASE 1: BEPALING VAN HET TOEPASSINGSGEBIED DÉTERMINER LE CHAMPS D APPLICATION... 2 STAP PHASE 2: DOEL EN STATUUT VAN DE ANALYSEMETHODE LE BUT ET STATUS DE LA MÉTHODE D ANALYSE... 2 STAP PHASE 3: KEUZE VALIDATIEPARAMETERS CHOISIR LES PARAMÈTRES À VALIDER... 3 STAP PHASE 4: EXTERNE EISEN VOOR VALIDATIEPARAMETERS DES EXIGENCES EXTERNES POUR LES PARAMÈTRES À VALIDER... 3 STAP PHASE 5: KEUZE VAN DE MONSTERS LE CHOIX D ÉCHANTILLONS... 4 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION... 5 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION... 7 INHOUDSTABEL... 8 1 WERKGEBIED... 9 2 LINEARITEIT... 10 3 JUISTHEID... 11 3.1 TERUGVINDING VOLGENS ÉÉNPUNTSKALIBRATIE... 11 3.2 TERUGVINDING VOLGENS KALIBRATIECURVE... 12 4 PRECISIE... 13 4.1 PRECISIE VOLGENS ÉÉNPUNTSKALIBRATIE... 13 4.2 PRECISIE VOLGENS KALIBRATIECURVE... 14 5 AANTOONBAARHEIDSGRENS EN BEPAALDBAARHEIDSGRENS... 15 6 SELECTIVITEIT / SPECIFITEIT... 16 7 ROBUUSTHEID... 19 8 MEETONZEKERHEID... 20 9 IDENTIFICATIECRITERIA DOOR MIDDEL VAN MASSASPECTROMETRIE... 21 10 BIJLAGEN... 22 10.1 OVERZICHT MRL S VOOR PYRETHROÏDEN VOOR VERSCHILLENDE VLEESSOORTEN... 22 10.2 FOTO S... 23 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 8/24
Validatiedossier 1 Werkgebied De methode voor de bepaling van pyrethroïden wordt toegepast op de matrix vlees. Het validatieonderzoek werd uitgevoerd met rundvlees uit de supermarkt. Er werd ook nagegaan of er verschillen zijn tussen rundvlees en andere soorten vlees zoals varkensvlees en kippenvlees. Het varkensvlees en het kippenvlees voor deze experimenten werd eveneens aangekocht in de supermarkt. De MRL s voor pyrethroïden zijn terug te vinden in Verordening (EG) nr. 396/2005 van het Europees Parlement en de Raad van 23 februari 2005 tot vaststelling van maximumgehalten aan bestrijdingsmiddelenresiduen in of op levensmiddelen en diervoeders van plantaardige en dierlijke oorsprong en houdende wijziging van Richtlijn 91/414/EG. Verordening (EU) nr. 37/2010 van de Commissie van 22 december 2009 betreffende farmacologisch werkzame stoffen en de indeling daarvan op basis van maximumwaarden voor residuen in levensmiddelen van dierlijke oorsprong MRL s voor éénzelfde component kunnen verschillen naargelang de diersoort waarvan het vlees afkomstig is. De MRL voor deltamethrin in varkensvlees bedraagt bv. 50 ng/g terwijl deze in kippenvlees 10 ng/g bedraagt. Daarom wordt er geopteerd voor een worst case scenario waarbij de monsters vergeleken worden met een controlemonster belast op de laagst mogelijk MRL, onafhankelijk van de diersoort. In onderstaande tabel worden de laagste MRL s voor pyrethroïden in vlees weergegeven. In bijlage wordt een overzicht gegeven van alle MRL s voor pyrethroïden in vlees. Laagste MRL voor pyrethroïden in vlees Pyrethroïden Bifenthrin Cyfluthrin Cyhalothrin (lambda) Cypermethrin Deltamethrin (cis) Fenvaleraat (RR/SS-isomeren) Fenvaleraat (RS/SR-isomeren) Permethrin Fenvaleraat (som RR/SS- en RS/SS-isomeren) MRL (ng/g product) 50 ng/g 10 ng/g 20 ng/g 10 ng/g 10 ng/g 20 ng/g 10 ng/g 50 ng/g 30 ng/g De kalibratiecurve zal zodanig samengesteld worden dat minimum vijf punten zich zowel onder als boven de laagste MRL bevinden. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 9/24
2 Lineariteit De kalibratiecurve wordt aangemaakt in de matrix vlees. Het vlees wordt belast op volgende concentraties: Level 1: 1/5 MRL Level 2: 1/2 MRL Level 3: MRL Level 4: 2 MRL Level 5: 3 MRL Level 6: 5 MRL De kalibratiecurve werd op drie verschillende dagen geanalyseerd. De bekomen respons ratio s werden onderworpen aan statistische analyse m.b.v. het programma StatGraphics waaruit bleek dat voor alle componenten de curve voldoet aan een lineair model. Daarnaast waren de criteria voor de correlatiecoëfficiënt (R² minimaal 0.995) en het aantal kalibratiepunten (minimaal vijf) voldaan voor alle curven. De statistische analyse toonde ook aan dat voor alle componenten de kalibratiecurve door het nulpunt gaat. Hierdoor is het mogelijk om voor de screeningsmethode te werken met een éénpuntskalibratie op basis van een controlemonster belast op de MRL. Alle monsters met een concentratie boven de helft van de concentratie van het controlemonster worden opnieuw geanalyseerd volgens de bevestigingsmethode waarbij de kwantificatie gebeurt a.d.h.v. de volledige kalibratiecurve. Evaluatiecriteria Alle kalibratiecurven voldoen aan: Kalibratiecurven voldoen aan lineair model Correlatiecoëfficiënt R² > 0.995 Minimaal vijf kalibratiepunten Kalibratiecurven gaan door het nulpunt => éénpuntskalibratie mogelijk voor screeningsmethode (a.d.h.v. controlemonser belast op MRL) Maximale afwijking < ± 20% (volgens SANCO/12495/2011) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 10/24
3 Juistheid Wegens het ontbreken van gecertificeerd referentiemateriaal werd de terugvinding bepaald. De terugvinding werd bepaald op drie niveaus (1/2 MRL, MRL en 3/2 MRL). Voor elk concentratieniveau werden 21 monsters geanalyseerd. De kwantificatie gebeurde zowel op basis van een éénpuntskalibratie als een volledige kalibratiecurve. In onderstaande tabellen is een overzicht te vinden van de gemiddelde terugvinding. 3.1 Terugvinding volgens éénpuntskalibratie Terugvinding (%) voor concentratieniveau 1/2 MRL (éénpuntskalibratie) 1/2 MRL Toegevoegde Teruggevonden Terugvinding (%) concentratie (ng/g) concentratie (ng/g) Bifenthrin 25,00 26,18 105 Cyfluthrin 5,00 5,37 107 Cyhalothrin (lambda) 10,00 10,11 101 Cypermethrin 5,00 5,57 111 Deltamethrin (cis) 5,00 5,21 104 Fenvaleraat (RR/SS) 10,00 10,05 101 Fenvaleraat (RS/SR) 5,00 4,98 100 Permethrin 25,00 25,55 102 Som Fenvaleraat 15,00 15,03 100 Terugvinding (%) voor concentratieniveau MRL (éénpuntskalibratie) MRL Toegevoegde Teruggevonden Terugvinding (%) concentratie (ng/g) concentratie (ng/g) Bifenthrin 50,00 46,58 93 Cyfluthrin 10,00 8,99 90 Cyhalothrin (lambda) 20,00 18,32 92 Cypermethrin 10,00 9,28 93 Deltamethrin (cis) 10,00 10,38 104 Fenvaleraat (RR/SS) 20,00 18,33 92 Fenvaleraat (RS/SR) 10,00 8,80 88 Permethrin 50,00 46,29 93 Som Fenvaleraat 30,00 27,13 90 Terugvinding (%) voor concentratieniveau 3/2 MRL (éénpuntskalibratie) 3/2 MRL Toegevoegde Teruggevonden Terugvinding (%) concentratie (ng/g) concentratie (ng/g) Bifenthrin 75,00 71,80 96 Cyfluthrin 15,00 14,42 96 Cyhalothrin (lambda) 30,00 29,55 98 Cypermethrin 15,00 14,45 96 Deltamethrin (cis) 15,00 15,14 101 Fenvaleraat (RR/SS) 30,00 29,65 99 Fenvaleraat (RS/SR) 15,00 14,80 99 Permethrin 75,00 73,42 98 Som Fenvaleraat 45,00 44,45 99 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 11/24
3.2 Terugvinding volgens kalibratiecurve Terugvinding (%) voor concentratieniveau 1/2 MRL (kalibratiecurve) 1/2 MRL Toegevoegde Teruggevonden Terugvinding (%) concentratie (ng/g) concentratie (ng/g) Bifenthrin 25,00 25,29 101 Cyfluthrin 5,00 5,01 100 Cyhalothrin (lambda) 10,00 9,82 98 Cypermethrin 5,00 5,33 107 Deltamethrin (cis) 5,00 4,94 99 Fenvaleraat (RR/SS) 10,00 9,46 95 Fenvaleraat (RS/SR) 5,00 4,87 97 Permethrin 25,00 25,25 101 Som Fenvaleraat 15,00 14,34 96 Terugvinding (%) voor concentratieniveau MRL (kalibratiecurve) MRL Toegevoegde Teruggevonden Terugvinding (%) concentratie (ng/g) concentratie (ng/g) Bifenthrin 50,00 49,82 100 Cyfluthrin 10,00 8,95 90 Cyhalothrin (lambda) 20,00 18,68 93 Cypermethrin 10,00 9,93 99 Deltamethrin (cis) 10,00 10,50 105 Fenvaleraat (RR/SS) 20,00 18,24 91 Fenvaleraat (RS/SR) 10,00 8,90 89 Permethrin 50,00 48,25 97 Som Fenvaleraat 30,00 27,14 90 Terugvinding (%) voor concentratieniveau 3/2 MRL (kalibratiecurve) 3/2 MRL Toegevoegde Teruggevonden Terugvinding (%) concentratie (ng/g) concentratie (ng/g) Bifenthrin 75,00 79,04 105 Cyfluthrin 15,00 15,15 101 Cyhalothrin (lambda) 30,00 30,79 103 Cypermethrin 15,00 15,56 104 Deltamethrin (cis) 15,00 14,92 99 Fenvaleraat (RR/SS) 30,00 30,38 101 Fenvaleraat (RS/SR) 15,00 15,64 104 Permethrin 75,00 77,19 103 Som Fenvaleraat 45,00 46,01 102 Evaluatiecriteria Alle berekende percentages terugvinding voldoen aan: Terugvinding tussen 70% en 120% voor de concentratieniveaus 1/2 MRL, MRL en 3/2 MRL (volgens SANCO/12495/2011) Terugvinding tussen 70% en 110% voor concentraties > 1 ng/g en < 10 ng/g en tussen 80% en 110% voor concentraties 10 ng/g (volgens Beschikking 2002/657/EG) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 12/24
4 Precisie Wegens het ontbreken van gecertificeerd referentiemateriaal werd de precisie bepaald aan de hand van belaste monsters. De precisie werd bepaald op drie niveaus (1/2 MRL, MRL en 3/2 MRL). Voor elk concentratieniveau werden 21 monsters geanalyseerd. De kwantificatie gebeurde zowel op basis van een éénpuntskalibratie als een volledige kalibratiecurve. In onderstaande tabellen is een overzicht te vinden van de bekomen waarden voor herhaalbaarheid en reproduceerbaarheid. 4.1 Precisie volgens éénpuntskalibratie Precisie voor concentratieniveau 1/2 MRL (éénpuntskalibratie) 1/2 MRL Herhaalbaarheid Reproduceerbaarheid Concentratie (ng/g) %RSD r r [2,8 * s r ] %RSD R R [2,8 * s R ] Bifenthrin 25 3,70 2,71 5,08 3,72 Cyfluthrin 5 4,12 0,62 5,37 0,81 Cyhalothrin (lambda) 10 4,49 1,27 4,69 1,33 Cypermethrin 5 4,09 0,64 5,39 0,84 Deltamethrin (cis) 5 4,51 0,66 8,36 1,22 Fenvaleraat (RR/SS) 10 7,16 2,01 8,40 2,36 Fenvaleraat (RS/SR) 5 7,52 1,05 8,84 1,23 Permethrin 25 4,49 3,21 5,46 3,91 Som Fenvaleraat 15 6,93 2,92 8,21 3,45 Precisie voor concentratieniveau MRL (éénpuntskalibratie) MRL Herhaalbaarheid Reproduceerbaarheid Concentratie (ng/g) %RSD r r [2,8 * s r ] %RSD R R [2,8 * s R ] Bifenthrin 50 3,70 4,82 6,45 8,41 Cyfluthrin 10 7,75 1,95 14,64 3,68 Cyhalothrin (lambda) 20 3,95 2,03 5,37 2,75 Cypermethrin 10 6,76 1,76 7,30 1,90 Deltamethrin (cis) 10 7,16 2,08 7,16 2,08 Fenvaleraat (RR/SS) 20 8,09 4,15 11,79 6,05 Fenvaleraat (RS/SR) 10 8,73 2,15 13,14 3,24 Permethrin 50 4,66 6,05 5,02 6,50 Som Fenvaleraat 30 8,23 6,25 12,06 9,16 Precisie voor concentratieniveau 3/2 MRL (éénpuntskalibratie) 3/2 MRL Herhaalbaarheid Reproduceerbaarheid Concentratie (ng/g) %RSD r r [2,8 * s r ] %RSD R R [2,8 * s R ] Bifenthrin 75 7,21 14,49 9,28 18,67 Cyfluthrin 15 4,72 1,91 12,15 4,91 Cyhalothrin (lambda) 30 7,96 6,58 7,96 6,58 Cypermethrin 15 8,83 3,57 8,83 3,57 Deltamethrin (cis) 15 5,18 2,19 12,07 5,11 Fenvaleraat (RR/SS) 30 10,54 8,75 10,54 8,75 Fenvaleraat (RS/SR) 15 10,95 4,54 12,58 5,21 Permethrin 75 7,99 16,43 7,99 16,43 Som Fenvaleraat 45 10,48 13,04 10,48 13,04 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 13/24
4.2 Precisie volgens kalibratiecurve Precisie voor concentratieniveau 1/2 MRL (kalibratiecurve) 1/2 MRL Herhaalbaarheid Reproduceerbaarheid Concentratie (ng/g) %RSD r r [2,8 * s r ] %RSD R R [2,8 * s R ] Bifenthrin 25 4,37 3,10 4,37 3,10 Cyfluthrin 5 5,53 0,78 9,58 1,34 Cyhalothrin (lambda) 10 4,30 1,18 5,60 1,54 Cypermethrin 5 4,79 0,71 9,27 1,38 Deltamethrin (cis) 5 7,22 1,00 8,73 1,21 Fenvaleraat (RR/SS) 10 7,49 1,99 11,20 2,97 Fenvaleraat (RS/SR) 5 7,45 1,02 12,83 1,75 Permethrin 25 4,36 3,08 4,36 3,08 Som Fenvaleraat 15 7,01 2,81 11,44 4,59 Precisie voor concentratieniveau MRL (kalibratiecurve) MRL Herhaalbaarheid Reproduceerbaarheid Concentratie (ng/g) %RSD r r [2,8 * s r ] %RSD R R [2,8 * s R ] Bifenthrin 50 4,21 5,88 8,37 11,67 Cyfluthrin 10 8,10 2,03 15,81 3,96 Cyhalothrin (lambda) 20 4,09 2,14 4,09 2,14 Cypermethrin 10 7,05 1,96 7,05 1,96 Deltamethrin (cis) 10 9,03 2,65 9,03 2,65 Fenvaleraat (RR/SS) 20 8,37 4,27 8,37 4,27 Fenvaleraat (RS/SR) 10 10,05 2,50 12,71 3,17 Permethrin 50 4,10 5,54 4,10 5,54 Som Fenvaleraat 30 8,59 6,53 8,59 6,53 Precisie voor concentratieniveau 3/2 MRL (kalibratiecurve) 3/2 MRL Herhaalbaarheid Reproduceerbaarheid Concentratie (ng/g) %RSD r r [2,8 * s r ] %RSD R R [2,8 * s R ] Bifenthrin 75 7,69 17,03 7,69 17,03 Cyfluthrin 15 4,50 1,91 7,03 2,98 Cyhalothrin (lambda) 30 7,73 6,67 7,73 6,67 Cypermethrin 15 9,04 3,94 9,04 3,94 Deltamethrin (cis) 15 6,86 2,86 10,48 4,38 Fenvaleraat (RR/SS) 30 10,79 9,18 10,79 9,18 Fenvaleraat (RS/SR) 15 10,17 4,45 10,17 4,45 Permethrin 75 8,18 17,68 8,18 17,68 Som Fenvaleraat 45 10,27 13,23 10,27 13,23 Evaluatiecriteria De waarden voor herhaalbaarheid en reproduceerbaarheid werden berekend met behulp van template LAB 00 P180 F004. Alle berekende RSD s voor precisie (herhaalbaarheid en reproduceerbaarheid) voldoen aan: RSD r 20% voor de concentratieniveaus 1/2 MRL, MRL en 3/2 MRL (volgens SANCO/12495/2011) RSD R 20% voor de concentratieniveaus 1/2 MRL, MRL en 3/2 MRL (volgens SANCO/12495/2011) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 14/24
5 Aantoonbaarheidsgrens en bepaaldbaarheidsgrens De aantoonbaarheidsgrens en de bepaaldbaarheidsgrens werden niet exact bepaald door voor alle pyrethroïden individueel na te gaan welke concentratie een signaal/ruis-verhouding van minimum 3 (voor de LOD) of minimum 6 (voor de LOQ) oplevert. De rapporteringsgrens bedraagt 1/5 van de laagste MRL. Dit komt overeen met het laagste punt van de kalibratiecurve. Voor dit punt is de signaal/ruis-verhouding voor alle pyrethroïden groter dan of gelijk aan 6. Theoretische LOQ en LOD voor pyrethroïden in vlees Pyrethroïden MRL (ng/g product) Rapporteringsgrens (ng/g product) Bifenthrin 50 ng/g 10 ng/g Cyfluthrin 10 ng/g 2 ng/g Cyhalothrin (lambda) 20 ng/g 4 ng/g Cypermethrin 10 ng/g 2 ng/g Deltamethrin (cis) 10 ng/g 2 ng/g Fenvaleraat (RR/SS) 20 ng/g 4 ng/g Fenvaleraat (RS/SR) 10 ng/g 2 ng/g Permethrin 50 ng/g 10 ng/g Som Fenvaleraat 30 ng/g 6 ng/g Evaluatiecriteria Alle rapporteringsgrenzen voldoen aan: LOQ MRL (volgens SANCO/12495/2011) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 15/24
6 Selectiviteit / specifiteit De selectiviteit /specificiteit werd nagegaan door 21 blanco-negatief monsters en 21 monsters belast op de MRL te analyseren. Voor alle uitgevoerde analysen kon de conformiteit van het blanco-negatief monster aangetoond worden ten opzichte van de monsters belast op de MRL. Bovendien werd ook de helft van de respons ratio voor monsters belast op de MRL berekend aangezien dit criterium bij de screeningsmethode gebruikt wordt om te beslissen welke monsters bevestigd dienen te worden. Daarnaast werd de gemiddelde respons ratio van 9 monsters belast op de rapporteringsgrens, nl. laagste punt van de kalibratiecurve (1/5 MRL), bepaald en 30 % van deze waarde berekend. In de onderstaande tabel is een overzicht te vinden van de gemiddelde en de berekende respons ratio s. Respons ratio s voor blanco-negatief, MRL, helft MRL (op basis van MRL), 1/5 MRL en 30 % van 1/5 MRL Respons ratio's blanco negatief MRL helft van MRL 1/5 MRL 30 % van 1/5 MRL Bifenthrin 0,005 10,252 5,126 2,311 0,693 Cyfluthrin 0,002 0,134 0,067 0,038 0,011 Cyhalothrin (lambda) 0,008 0,520 0,260 0,113 0,034 Cypermethrin 0,005 0,162 0,081 0,045 0,013 Deltamethrin (cis) 0,001 0,076 0,038 0,017 0,005 Fenvaleraat (RR/SS) 0,001 0,175 0,087 0,037 0,011 Fenvaleraat (RS/SR) 0,001 0,243 0,122 0,049 0,015 Permethrin 0,015 1,627 0,814 0,350 0,105 Evaluatiecriteria Alle blanco-negatief monsters waren conform ten opzichte van de monsters belast op de MRL. Alle respons ratio s voldoen aan de voorwaarde: Respons ratio blanco-negatief < respons ratio MRL Respons ratio blanco-negatief < respons ratio helft MRL (criterium bevestigingsmethode) Respons ratio blanco-negatief < respons ratio 1/5 MRL Respons ratio blanco-negatief < respons ratio 30 % van LOQ (1/5 MRL) (volgens SANCO/12495/2011) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 16/24
Alle experimenten van dit validatiedossier werden uitgevoerd met rundvlees. Er werd nagegaan of het mogelijk is om belaste monsters van andere vleessoorten te kwantificeren ten opzichte van een kalibratiecurve in rundvlees. Hiertoe werd de terugvinding voor kippenvlees en varkensvlees bepaald op drie niveaus (1/2 MRL, MRL en 3/2 MRL). Voor beide soorten vlees werden telkens 2 monsters belast op elke concentratie. De kwantificatie gebeurde ten opzichte van rundvlees zowel op basis van een éénpuntskalibratie als een volledige kalibratiecurve. In onderstaande tabellen is een overzicht te vinden van de gemiddelde terugvinding. Terugvinding (%) voor matrix kip (éénpuntskalibratie en kalibratiecurve in rund) Kip éénpuntskalibratie kalibratiecurve Terugvinding (%) 1/2 MRL MRL 3/2 MRL 1/2 MRL MRL 3/2 MRL Bifenthrin 116 119 120 117 120 119 Cyfluthrin 118 112 105 103 101 97 Cyhalothrin (lambda) 112 112 116 108 111 118 Cypermethrin 117 118 117 119 116 118 Deltamethrin (cis) 118 119 119 114 119 118 Fenvaleraat (RR/SS) 86 85 79 78 78 76 Fenvaleraat (RS/SR) 86 80 78 74 75 73 Permethrin 115 114 115 112 115 117 Som Fenvaleraat 86 83 79 77 77 75 Terugvinding (%) voor matrix varken (éénpuntskalibratie en kalibratiecurve in rund) Varken éénpuntskalibratie kalibratiecurve Terugvinding (%) 1/2 MRL MRL 3/2 MRL 1/2 MRL MRL 3/2 MRL Bifenthrin 110 110 110 108 108 109 Cyfluthrin 103 104 105 102 102 103 Cyhalothrin (lambda) 105 107 107 105 105 104 Cypermethrin 108 102 105 104 109 104 Deltamethrin (cis) 113 116 116 118 117 115 Fenvaleraat (RR/SS) 87 92 94 77 82 86 Fenvaleraat (RS/SR) 82 82 84 73 77 78 Permethrin 105 105 105 107 104 104 Som Fenvaleraat 85 88 90 76 80 84 Evaluatiecriteria Alle berekende percentages terugvinding voldoen aan: Terugvinding tussen 70% en 120% voor de concentratieniveaus 1/2 MRL, MRL en 3/2 MRL (volgens SANCO/12495/2011) Het is dus mogelijk om pyrethroïden in andere vleessoorten te kwantificeren op basis van een éénpuntskalibratie of een kalibratiecurve in rundvlees. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 17/24
Zowel voor de matrix kip als voor de matrix varken werden 2 blanco-negatief monsters en 2 monsters belast op de MRL geanalyseerd. Voor alle uitgevoerde analysen kon de conformiteit van het blanco-negatief monster aangetoond worden ten opzichte van de monsters belast op de MRL. In de onderstaande tabel is een overzicht te vinden van de gemiddelde respons ratio s. Daarnaast werd ook de helft van de respons ratio voor monsters belast op de MRL berekend aangezien dit criterium bij de screeningsmethode gebruikt wordt om te beslissen welke monsters bevestigd dienen te worden. Respons ratio s matrix kip voor blanco-negatief, MRL en helft MRL (op basis van MRL) Respons ratio's - Kip blanco negatief MRL helft waarde MRL Bifenthrin 0,067 13,456 6,728 Cyfluthrin 0,003 0,194 0,097 Cyhalothrin (lambda) 0,008 0,673 0,336 Cypermethrin 0,006 0,235 0,118 Deltamethrin (cis) 0,002 0,090 0,045 Fenvaleraat (RR/SS) 0,001 0,126 0,063 Fenvaleraat (RS/SR) 0,001 0,165 0,083 Permethrin 0,014 2,328 1,164 Respons ratio s matrix varken voor blanco-negatief, MRL en helft MRL (op basis van MRL) Respons ratio's - Varken blanco negatief MRL helft waarde MRL Bifenthrin 0,001 16,168 8,084 Cyfluthrin 0,001 0,203 0,102 Cyhalothrin (lambda) 0,007 0,850 0,425 Cypermethrin 0,003 0,272 0,136 Deltamethrin (cis) 0,001 0,089 0,044 Fenvaleraat (RR/SS) 0,001 0,220 0,110 Fenvaleraat (RS/SR) 0,001 0,263 0,131 Permethrin 0,021 2,706 1,353 Evaluatiecriteria Alle blanco-negatief monsters waren conform ten opzichte van de monsters belast op de MRL, zowel voor de matrix kip als voor de matrix varken. Alle respons ratio s voldoen aan de voorwaarde: Respons ratio blanco-negatief < respons ratio MRL (zowel voor de matrix kip als voor de matrix varken) Respons ratio blanco-negatief < respons ratio helft MRL (zowel voor de matrix kip als voor de matrix varken) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 18/24
7 Robuustheid De robuustheid wordt nagegaan aan de hand van controlekaarten. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 19/24
8 Meetonzekerheid De meetonzekerheden werden berekend volgens de procedure LAB P 508 Meetonzekerheid. De kwantificatie van de gebruikte data gebeurde op basis van een volledige kalibratiecurve. De meetonzekerheid werd op drie verschillende concentratieniveaus bepaald (1/2 MRL, MRL en 3/2 MRL). Meetonzekerheid voor drie concentratieniveaus Meetonzekerheid (MO) niveau hoog niveau midden niveau laag % MO concentratiebereik % MO concentratiebereik % MO concentratiebereik Bifenthrin 35 > 75 ng/g 33 25-75 ng/g 31 < 25 ng/g Cyfluthrin 32 > 15 ng/g 44 5-15 ng/g 34 < 5 ng/g Cyhalothrin (lambda) 34 > 30 ng/g 33 10-30 ng/g 32 < 10 ng/g Cypermethrin 35 > 15 ng/g 33 5-15 ng/g 37 < 5 ng/g Deltamethrin (cis) 34 > 15 ng/g 35 5-15 ng/g 33 < 5 ng/g Fenvaleraat (RR/SS) 36 > 30 ng/g 37 10-30 ng/g 36 < 10 ng/g Fenvaleraat (RS/SR) 36 > 15 ng/g 42 5-15 ng/g 36 < 5 ng/g Permethrin 33 > 75 ng/g 30 25-75 ng/g 30 < 25 ng/g Som Fenvaleraat 35 > 45 ng/g 38 15-45 ng/g 36 < 15 ng/g LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 20/24
9 Identificatiecriteria door middel van massaspectrometrie Ter identificatie van de pyrethoïden worden de ionenverhoudingen van de productionen vergeleken met deze in het controlemonster. De precursor- en productionen zijn weergegeven in onderstaande tabel. Precursor- en productionen Pyrethroïden Precursorion Productionen Bifenthrin 181 165 en 166 Cyfluthrin 226 151 en 206 Cyhalothrin (lambda) 181 151 en 152 Cypermethrin 181 127 en 152 Deltamethrin (cis) 253 92 en 93 Fenvaleraat (RR/SS) 125 89 en 90 Fenvaleraat (RS/SR) 125 89 en 90 Permethrin 183 115, 153 en 168 De ionenverhoudingen werden voor drie verschillende concentraties (1/2 MRL, MRL en 3/2 MRL) berekend en vergeleken met deze van het controlemonster. Evaluatiecriteria Alle ionenverhoudingen voldoen aan: Maximaal toelaatbare marges voor relatieve ionenintensiteiten voor GC-MS (volgens Beschikking 2002/657/EG) Relatieve intensiteit (% van hoofdpiek) Maximaal toelaatbare marge > 50% ± 20% > 20% tot 50% ± 25% > 10% tot 20% ± 30% 10% ± 50% LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 21/24
10 Bijlagen 10.1 Overzicht MRL s voor pyrethroïden voor verschillende vleessoorten MRLs Pyrethroïden - Vlees LET OP: Lagere norm in andere wetgeving!!! Pesticide residues and P mg/kg product (bij vlees: < 10 % vet) maximum (*) Indicates residue lower levels limit of analytical determination V mg/kg vet (bij vlees: > 10 % vet) 396/2005 (i) Vlees, vleesbereidingen, slachtafval, bloed, dierlijke vetten en bereidingen hierop gebaseerd ** P V P V P V P V P V P V P V P V Varkens 0,3 3 0,01 0,05 0,05 0,5 0,05 0,5 0,2 2 0,02 0,2 0,01 0,05 0,05* / Runderen 0,3 3 0,01 0,05 0,05 0,5 0,05 0,5 0,2 2 0,02 0,2 0,01 0,05 0,05* / Schapen 0,3 3 0,01 0,05 0,05 0,5 0,05 0,5 0,2 2 0,02 0,2 0,01 0,05 0,05* / Geiten 0,3 3 0,01 0,05 0,05 0,5 0,05 0,5 0,2 2 0,02 0,2 0,01 0,05 0,05* / Paarden, ezels, muildieren, muilezels Pluimvee (kippen, ganzen, eenden, kalkoenen, parelhoenders, struisvogels, duiven) Andere landbouwhuisdieren (vb konijn, kangoeroe, wild) Bifenthrin Cyfluthrin som van de isomeren som van de isomeren Cypermethrin cisdeltamethrin Lambdacyhalothrin Deltamethrin Cypermethrin som van de isomeren Fenvalerate en esfenvalerate som RR en SS isomeren som RS en SR isomeren 0,05* 0,05* 0,01 0,05 0,05 0,5 0,05 0,5 0,2 2 0,02 0,2 0,01 0,05 0,05* 0,05* 0,01 0,05 0,02* 0,02* 0,01 0,1 0,01 0,1 0,02* 0,02* 0,02* 0,02* 0,05* / 0,3 3 0,01 0,05 0,05 0,5 0,05 0,5 0,02 0,2 0,02 0,2 0,01 0,05 Permethrin som van de isomeren 37/2010 Bifenthrin P V P V P V P V P V P V P V Runderen 0,01 0,025 0,05 Geiten 0,01 Cyfluthrin som van de isomeren som van de isomeren Alle herkauwers 0,01 0,02 cisdeltamethrin Lambdacyhalothrin Deltamethrin som van de isomeren Fenvalerate en esfenvalerate som van de RR, SS, RS en SR isomeren Permethrin som van de isomeren LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 22/24
10.2 Foto s Foto 1: Extractie van pyrethroïden uit vlees door middel van schudden met acetonitrile. Foto 2: Opzuivering door middel van kolom met gedesactiveerd aluminiumoxide gevolgd door SPE (C18). LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 23/24
Foto 3: Indampen van extract bekomen na opzuiveringsstap. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 24/24