VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION

Transcriptie

1 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / Date du dernière adaption BEPALING VAN STREPTOMYCINE EN DIHYDROSTREPTOMYCINE LAB 22 I-MET-047 EIA Honing en vlees 20/05/2014 (aanpassing van het validatierapport aan de template + toevoeging gegevens langetermijnsvalidatie en berekening cut-off) 1

2 Overzicht van de prestatiekenmerken : CCß streptomycine CCß dihydrostreptomycine Honing 20 ppb 20 ppb Vlees 100 ppb 100 ppb De validatie voldoet aan de procedure LAB 00 P180 De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn: CCß streptomycine CCß dihydrostreptomycine Honing 20 ppb 20 ppb Vlees 500 ppb (MRL) 500 ppb (MRL) Inhoud: - samenvattend validatierapport van 20/05/2014 2

3 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par BEPALING VAN STREPTOMYCINE EN DIHYDROSTREPTOMYCINE I-MET-FLVVG-047 EIA Honing en vlees Totaal Ingrid Vermeulen Sectieverantwoordelijke R&C Oorspronkelijk dossier: Ingrid Vermeulen Verantwoordelijke EIA en sneltechnieken 25/05/2004 Aanpassing van het validatierapport aan de template + toevoeging gegevens langetermijnsvalidatie en berekening cut-off Inge Heymans - Analist 19/05/2014 Ingrid Vermeulen, Kathleen Martens Mei 2004 Aanpassing van het validatierapport aan de template + toevoeging gegevens langetermijnsvalidatie en berekening cut-off op 19/05/2014 Oorspronkelijk dossier: Handtekeningen - Signatures: Naam: Mieke Van de Wiele Functie: Sectieverantwoordelijke R&C in 2004 Get. Datum: 25/05/2004 Aangepast validatierapport Naam: Ingrid Vermeulen Functie: Sectieverantwoordelijke R&C Get. Datum: 20/05/2014 Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v

4 Inhoudsopgave 1 DOEL EN TOEPASSINGSGEBIED VALIDATIEPARAMETERS EN WERKWIJZE OVERZICHT DATA HONING Validatiegegevens van 25/05/ Gegevens langetermijnsvalidatie VLEES Validatiegegevens van 25/05/ Gegevens langetermijnsvalidatie VERWERKING VAN DE VALIDATIEGEGEVENS VOLGENS GUIDELINE VAN 20/01/ SELECTIVITEIT / SPECIFICITEIT CCß HONING VLEES ROBUUSTHEID CUT-OFF HONING VLEES BESLUIT BIJLAGEN LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v

5 1 Doel en toepassingsgebied Deze validatie omvat de kwalitatieve screening van streptomycine (STM) en dihydrostreptomycine (DHSTM) in honing en vlees met een competitieve enzyme immunoassay (EIA). Voor honing wordt gescreend op het niveau voorgesteld door het Wetenschappelijk Comité in Advies 2001/11 nl. 20 ppb voor streptomycine en dihydrostreptomycine. Voor vlees wordt gescreend op 100 ppb. In Verordening 37/2010 werd voor vlees een MRL van 500 ppb vastgelegd voor streptomycine en dihydrostreptomycine. 2 Validatieparameters en werkwijze Voor een kwalitatieve screeningsmethode moeten, volgens procedure LAB 00 P180, volgende validatieparameters nagegaan worden: - CCß - Selectiviteit / specificiteit - Robuustheid Hiervoor werden 20 verschillende honingmonsters onbelast en belast op 20 ppb met STM geanalyseerd en werden 20 verschillende vleesmonsters onbelast en belast op 100 ppb met STM geanalyseerd. Deze gegevens werden later uitgebreid met de gegevens van de langetermijnsvalidatie (controlekaarten) en dit zowel voor STM als DHSTM. Eind 2012 werd op basis van de gegevens van de controlekaarten een cut-off berekend voor honing en vlees. Voorheen werden de monsters uit een serie vergeleken ten opzichte van het belaste monster in de serie. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v

6 3 Overzicht data 3.1 HONING Validatiegegevens van 25/05/2004 B/B 0 blanco B/B 0 *20 ppb STM Bl honing 1 1,016 0,568 Bl honing 2 1,033 0,479 Bl honing 3 1,061 0,480 Bl honing 4 0,805 0,465 Bl honing 5 0,947 0,524 Bl honing 6 1,059 0,544 Bl honing 7 0,980 0,542 Bl honing 8 (*) 0,645 0,429 Bl honing 9 1,017 0,532 Bl honing 10 1,095 0,545 Bl honing 11 0,872 0,540 Bl honing 12 1,050 0,558 Bl honing 13 0,825 0,472 Bl honing 14 1,006 0,525 Bl honing 15 1,076 0,566 Bl honing 16 1,035 0,512 Bl honing 17 0,818 0,484 Bl honing 18 0,706 0,462 Bl honing 19 0,889 0,525 Bl honing 20 1,016 0,540 Met : B = de gemeten absorptie van het monster B 0 = de gemiddelde absorptie van de maximum binding (*): deze meting wordt weggelaten omdat het criterium voor blanco monster B/ B 0 > 0,7 niet voldaan is Gegevens langetermijnsvalidatie Onderstaande tabel geeft een overzicht per jaar van het aantal blanco honingmonsters dat in de routinereeksen geanalyseerd werd. In elke reeks werd het monster onbelast, belast op 20 ppb met STM en belast op 20 ppb met DHSTM geanalyseerd. Jaar Aantal geanalyseerd LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v

7 (tot 19/05/2014) Totaal VLEES Validatiegegevens van 25/05/2004 B/B 0 blanco B/B 0 *100 ppb STM Bl vlees 1 0,865 0,400 Bl vlees 2 1,092 0,411 Bl vlees 3 1,017 0,363 Bl vlees 4 0,919 0,382 Bl vlees 5 1,018 0,419 Bl vlees 6 1,051 0,407 Bl vlees 7 0,896 0,423 Bl vlees 8 1,000 0,444 Bl vlees 9 1,019 0,421 Bl vlees 10 1,041 0,419 Bl vlees 11 0,999 0,339 Bl vlees 12 (*) 0,475 0,268 Bl vlees 13 0,940 0,459 Bl vlees 14 0,752 0,403 Bl vlees 15 0,915 0,393 Bl vlees 16 0,843 0,421 Bl vlees 17 0,954 0,424 Bl vlees 18 1,019 0,421 Bl vlees 19 0,998 0,377 Bl vlees 20 0,972 0,407 Met : B = de gemeten absorptie van het monster B 0 = de gemiddelde absorptie van de maximum binding (*): deze meting wordt weggelaten omdat het criterium voor blanco monster B/ B 0 > 0,7 niet voldaan is LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v

8 3.2.2 Gegevens langetermijnsvalidatie Onderstaande tabel geeft een overzicht per jaar van het aantal blanco vleesmonsters dat in de routinereeksen geanalyseerd werd. In elke reeks werd het monster onbelast, belast op 100 ppb met STM en belast op 100 ppb met DHSTM geanalyseerd. Jaar Aantal geanalyseerd (tot 19/05/2014) Totaal 13 4 Verwerking van de validatiegegevens volgens guideline van 20/01/2010 In bijlage 1 en bijlage 2 worden de validatiegegevens van respectievelijk honing en vlees verwerkt volgens de instructies in het document Guidelines for the validation of screening methods for residues of veterinary medicines - 20/01/2010 (Annex II). 5 Selectiviteit / specificiteit De selectiviteit en de specificiteit worden bewezen aan de hand van de conformiteit van de monsters ten opzichte van de overeenkomstige belaste monsters (zie hoofdstuk 3 overzicht data). Zowel voor honing als voor vlees is de cut-off factor Fm kleiner dan de treshold value T (zie hoofdstuk 4). Dit betekent volgens het document Guidelines for the validation of screening methods for residues of veterinary medicines - 20/01/2010 dat de kans op vals positieven kleiner is dan 5% voor beide matrices. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v

9 6 CCß 6.1 Honing Uit de tabel onder hoofdstuk blijkt dat een honingmonster belast met STM op het niveau van 20 ppb 19 maal op 19 kan aangetoond worden. Uit de tabel onder hoofdstuk blijkt dat een honingmonster belast met STM en DHSTM op het niveau van 20 ppb 131 maal op 131 kan aangetoond worden. Dit betekent dat mag aangenomen worden dat voor de matrix honing CCß 20 ppb voor STM en DHSTM. Uit de gegevens uit hoofdstuk 4 blijkt dat voor honing de cut-off factor Fm kleiner is dan B ( = de gemiddelde respons (B/B0) van de blanco monsters). Hieruit kan men volgens het document Guidelines for the validation of screening methods for residues of veterinary medicines - 20/01/2010 ook besluiten dat voor de matrix honing CCß 20 ppb. De CCß wordt verder uitgebouwd door het laten meelopen van belaste monsters op dit niveau (langetermijnsvalidatie). 6.2 Vlees Uit de tabel onder hoofdstuk blijkt dat een vleesmonster belast met STM op het niveau van 100 ppb 19 maal op 19 kan aangetoond worden. Uit de tabel onder hoofdstuk blijkt dat een vleesmonster belast met STM en DHSTM op het niveau van 100 ppb 13 maal op 13 kan aangetoond worden. Dit betekent dat mag aangenomen worden dat voor de matrix honing CCß 100 ppb voor STM en DHSTM. Uit de gegevens uit hoofdstuk 4 blijkt dat voor vlees de cut-off factor Fm kleiner is dan B ( = de gemiddelde respons (B/B0) van de blanco monsters). Hieruit kan men volgens het document Guidelines for the validation of screening methods for residues of veterinary medicines - 20/01/2010 ook besluiten dat voor de matrix vlees CCß 100 ppb. De CCß wordt verder uitgebouwd door het laten meelopen van belaste monsters op dit niveau (langetermijnsvalidatie). 7 Robuustheid De robuustheid wordt geëvalueerd aan de hand van de langetermijnsvalidatie. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v

10 8 Cut-off Eind 2012 werd op basis van de gegevens van langetermijnsvalidatie (controlekaarten) een cut-off waarde berekend voor de bepaling van STM en DHSTM in honing en in vlees. Deze cut-off waarde werd berekend op basis van annex II van Guidelines for the validation of screening methods for residues of veterinary medicines - 20/01/2010 : Cut-off= M + 1,64 SD waarbij M de gemiddelde respons en SD de standaardafwijking van de belaste monsters. 8.1 Honing Voor STM werd een cut-off van 0,518 bekomen, voor DHSTM was de cut-off 0,633 (zie bijlage 3). Uiteindelijk werd de strengste waarde weerhouden als cut-off voor honing nl. 0, Vlees Voor STM werd een cut-off van 0,672 bekomen, voor DHSTM was de cut-off 0,789 (zie bijlage 4). Uiteindelijk werd de strengste waarde weerhouden als cut-off voor vlees nl. 0, Besluit De methode voldoet aan de vereisten voor een kwalitatieve screeningsmethode voor de bepaling van streptomycine en dihydrostreptomycine in de matrix honing op het niveau van 20 ppb en voor de matrix vlees op het niveau van 100 ppb. 10 Bijlagen Bijlage 1: verwerking validatiegegevens honing volgens Guidelines for the validation of screening methods for residues of veterinary medicines - 20/01/2010 (Annex II) Bijlage 2: verwerking validatiegegevens vlees volgens Guidelines for the validation of screening methods for residues of veterinary medicines - 20/01/2010 (Annex II) Bijlage 3: berekening cut-off honing op basis van langetermijnsvalidatie dd Bijlage 4: berekening cut-off vlees op basis van langetermijnsvalidatie dd Bijlage 5: foto s LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v

11 Bijlage 1: verwerking validatiegegevens honing volgens Guidelines for the validation of screening methods for residues of veterinary medicines - 20/01/2010 (Annex II) HONING STM B/B 0 Blanco B/B 0 *20 ppb STM Bl honing 1 1,016 0,568 STM Bl honing 2 1,033 0,479 Bl honing 3 1,061 0,480 Bl honing 4 0,805 0,465 Bl honing 5 0,947 0,524 Bl honing 6 1,059 0,544 Bl honing 7 0,980 0,542 Bl honing 9 1,017 0,532 Bl honing 10 1,095 0,545 Bl honing 11 0,872 0,540 Bl honing 12 1,050 0,558 Bl honing 13 0,825 0,472 Bl honing 14 1,006 0,525 Bl honing 15 1,076 0,566 Bl honing 16 1,035 0,512 Bl honing 17 0,818 0,484 Bl honing 18 0,706 0,462 Bl honing 19 0,889 0,525 Bl honing 20 1,016 0,540 gemiddelde totaal: 0,963 0,519 B M B/B 0 1,200 1,000 0,800 0,600 0,400 0,200 B/B0 Blanco B/B0 *20 ppb STM gemiddelde *20 ppb STM gemiddelde blanco's T Fm Treshold value T: T = B - 1,64 x SDb B: de gemiddelde respons (B/B 0 ) van de blanco monsters = 0,963 SDb: standaardafwijking van de blanco monsters = 0, ,64 x T = 0,781 0, ,000 Bl honing 1 Bl honing 2 Bl honing 3 Bl honing 4 Bl honing 5 Bl honing 6 Bl honing 7 Bl honing 9 Bl honing 10 Bl honing 11 Bl honing 12 Bl honing 13 Bl honing 14 Bl honing 15 Bl honing 16 Bl honing 17 Bl honing 18 Bl honing 19 Bl honing 20 Cut-off factor Fm: (bij ELISA is de response (B/B0) omgekeerd evenredig met de concentratie) Fm = M + 1,64 x SD M: de gemiddelde respons (B/B 0 ) van de belaste monsters = 0,519 SD: de standaardafwijking van de belaste monsters = 0, ,64 x Fm = 0,576 0, Besluit: Fm < T dus kans op vals positieven is kleiner dan 5 % en Fm < B dus CCß 20 ppb (zie 'Guidelines for the validation of screening methods', versie 20/01/2010) ALGEMEEN BESLUIT: CUT-OFF VOLGENS ANNEX II VAN GUIDELINE IS 0,576

12 Bijlage 2: verwerking validatiegegevens vlees volgens Guidelines for the validation of screening methods for residues of veterinary medicines - 20/01/2010 (Annex II) VLEES STM B/B 0 Blanco B/B 0 *100 ppb STM Bl vlees 1 0,865 0,400 STM Bl vlees 2 1,092 0,411 Bl vlees 3 1,017 0,363 Bl vlees 4 0,919 0,382 Bl vlees 5 1,018 0,419 Bl vlees 6 1,051 0,407 Bl vlees 7 0,896 0,423 Bl vlees 8 1,000 0,444 Bl vlees 9 1,019 0,421 Bl vlees 10 1,041 0,419 Bl vlees 11 0,999 0,339 Bl vlees 13 0,940 0,459 Bl vlees 14 0,752 0,403 Bl vlees 15 0,915 0,393 Bl vlees 16 0,843 0,421 Bl vlees 17 0,954 0,424 Bl vlees 18 1,019 0,421 Bl vlees 19 0,998 0,377 Bl vlees 20 0,972 0,407 gemiddelde totaal: 0,964 0,407 B M B/B 0 1,200 1,000 0,800 0,600 0,400 0,200 B/B0 Blanco B/B0 *100 ppb STM gemiddelde *100 ppb STM gemiddelde blanco's T Fm Treshold value T: T = B - 1,64 x SDb B: de gemiddelde respons (B/B 0 ) van de blanco monsters = 0,964 SDb: standaardafwijking van de blanco monsters = 0, ,64 x T = 0,827 0, ,000 Bl vlees 1 Bl vlees 2 Bl vlees 3 Bl vlees 4 Bl vlees 5 Bl vlees 6 Bl vlees 7 Bl vlees 8 Bl vlees 9 Bl vlees 10 Bl vlees 11 Bl vlees 13 Bl vlees 14 Bl vlees 15 Bl vlees 16 Bl vlees 17 Bl vlees 18 Bl vlees 19 Bl vlees 20 Cut-off factor Fm: (bij ELISA is de response (B/B0) omgekeerd evenredig met de concentratie) Fm = M + 1,64 x SD M: de gemiddelde respons (B/B 0 ) van de belaste monsters = 0,407 SD: de standaardafwijking van de belaste monsters = 0, ,64 x Fm = 0,453 0, Besluit: Fm < T dus kans op vals positieven is kleiner dan 5 % en Fm < B dus CCß 100 ppb (zie 'Guidelines for the validation of screening methods', versie 20/01/2010) ALGEMEEN BESLUIT: CUT-OFF VOLGENS ANNEX II VAN GUIDELINE IS 0,453

13 honing Bijlage 3: berekening cut-off honing op basis van langetermijnsvalidatie dd CONTROLEKAART EIA CONTROLEKAART EIA CONTROLEKAART EIA KIT: Euro-diagnostica KIT: Euro-diagnostica KIT: Euro-diagnostica MATRIX: honing opzuivering over C18 MATRIX: honing MATRIX: honing GEGEVENS BLANCO GEGEVENS BELAST MONSTER niveau= 20 ppb streptomycine GEGEVENS BELAST MONSTER niveau= 20 ppb dihydrostreptomycine (gemiddelde waarde van de dubbels t.o.v. B(0)) (gemiddelde waarde van de dubbels t.o.v. B(0)) cut-off= 0,518 (gemiddelde waarde van de dubbels t.o.v. B(0)) cut-off= 0,633 s= 0,05 (deze kaart) s= 0,08 (deze kaart) s= 0,06 (deze kaart) gemidd.= 0,90 (deze kaart) gemidd.= 0,39 (deze kaart) gemidd.= 0,54 (deze kaart) datum B(0)(=MB)aantal B/B(0)a B/B(0)b gemb/b(0) verschil duplo's datum B(0)(=MB) aantal B/B(0)a B/B(0)b gemb/b(0) verschil duplo's datum B(0)(=MB) aantal B/B(0)a B/B(0)b gemb/b(0) verschil duplo's 26/08/2011 1, ,95 0,936 0,943 0,014 26/aug/11 1, ,502 0,499 0,501 0,003 26/aug/11 1, ,625 0,605 0,615 0,02 9/09/2011 1, ,899 0,829 0,864 0,07 9/sep/11 1, ,467 0,561 0,514-0,094 9/sep/11 1, ,545 0,567 0,556-0,022 28/11/2011 1, ,804 0,835 0,820-0,031 28/nov/11 1, ,317 0,325 0,321-0,008 28/nov/11 1, ,382 0,431 0,407-0,049 15/12/2011 2, ,846 0,813 0,830 0,033 15/dec/11 2, ,526 0,527 0,527-0,001 15/dec/11 2, ,614 0,614 0, /02/2012 1, ,924 0,913 0,919 0,011 2/feb/12 1, ,345 0,322 0,334 0,023 2/feb/12 1, ,47 0,469 0,470 0,001 24/02/2012 1, ,882 0,893 0,888-0,011 24/feb/12 1, ,342 0,354 0,348-0,012 24/feb/12 1, ,504 0,543 0,524-0,039 16/03/2012 2, ,858 0,881 0,870-0,023 16/mrt/12 2, ,349 0,403 0,376-0,054 16/mrt/12 2, ,518 0,544 0,531-0,026 19/04/2012 2, ,911 0,901 0,906 0,01 19/apr/12 2, ,343 0,339 0,341 0,004 19/apr/12 2, ,531 0,522 0,527 0,009 9/05/2012 2, ,899 0,898 0,899 0,001 9/mei/12 2, ,36 0,346 0,353 0,014 9/mei/12 2, ,518 0,504 0,511 0,014 1/06/2012 2, ,873 0,828 0,851 0,045 1/jun/12 2, ,471 0,448 0,460 0,023 1/jun/12 2, ,612 0,577 0,595 0,035 22/06/2012 1, ,932 0,895 0,914 0,037 22/jun/12 1, ,349 0,358 0,354-0,009 22/jun/12 1, ,468 0,485 0,477-0,017 25/07/2012 1, ,831 0,844 0,838-0,013 25/jul/12 1, ,345 0,364 0,355-0,019 25/jul/12 1, ,545 0,628 0,587-0,083 23/08/2012 2, ,93 1,02 0,975-0,09 23/aug/12 2, ,374 0,334 0,354 0,04 23/aug/12 2, ,516 0,56 0,538-0,044 6/09/2012 2, ,883 0,898 0,891-0,015 6/sep/12 2, ,358 0,332 0,345 0,026 6/sep/12 2, ,5 0,499 0,500 0,001 18/09/2012 2, ,883 0,84 0,862 0,043 18/sep/12 2, ,344 0,317 0,331 0,027 18/sep/12 2, ,554 0,525 0,540 0,029 1/10/2012 2, ,908 0,859 0,884 0,049 1/okt/12 2, ,358 0,366 0,362-0,008 1/okt/12 2, ,494 0,497 0,496-0,003 15/10/2012 2, ,98 0,978 0,979 0,002 15/okt/12 2, ,552 0,601 0,577-0,049 15/okt/12 2, ,564 0,578 0,571-0,014 31/10/2012 1, ,048 0,952 1,000 0,096 31/okt/12 1, ,399 0,363 0,381 0,036 31/okt/12 1, ,624 0,695 0,660-0,071 21/11/2012 1, ,9 0,94 0,920-0,04 21/nov/12 1, ,33 0,311 0,321 0,019 21/nov/12 1, ,509 0,522 0,516-0,013 6/12/2012 1, ,937 0,968 0,953-0,031 6/dec/12 1, ,331 0,325 0,328 0,006 6/dec/12 1, ,472 0,512 0,492-0,04 standaardafwijking 0, , standaardafwijking 0, standaardafwijking 0, herhaalbaarheidslimiet 0,121 herhaalbaarheidslimiet 0,0936 herhaalbaarheidslimiet 0,0897 Page 1

14 vlees Bijlage 4: berekening cut-off vlees op basis van langetermijnsvalidatie dd Berekening criterium voor duplo's (herhaalbaarheidslimiet) en cut-off t.o.v. belast monster CONTROLEKAART EIA CONTROLEKAART EIA CONTROLEKAART EIA KIT: Euro-diagnostica KIT: Euro-diagnostica KIT: Euro-diagnostica MATRIX: vlees MATRIX: vlees MATRIX: vlees cut-off= 0,672 cut-off= 0,789 GEGEVENS BLANCO GEGEVENS BELAST MONSTER niveau= 100 ppb streptomycine GEGEVENS BELAST MONSTER niveau= 100 ppb dihydrostreptomycine (gemiddelde waarde van de dubbels t.o.v. B(0)) (gemiddelde waarde van de dubbels t.o.v. B(0)) (gemiddelde waarde van de dubbels t.o.v. B(0)) s= 0,07 (deze kaart) s= 0,10 (deze kaart) s= 0,07 gemidd.= 0,93 (deze kaart) gemidd.= 0,50 (deze kaart) gemidd.= 0,67 datum B(0)(=MB) aantal B/B(0)a B/B(0)b gemb/b(0) verschil duplo's datum B(0)(=MB) aantal B/B(0)a B/B(0)b B/B(0) verschil duplo's datum B(0)(=MB) aantal B/B(0)a B/B(0)b gemb/b(0) verschil duplo's 30/07/2004 1, ,938 0,929 0,934 0,009 30/jul/04 1, ,486 0,475 0,481 0,011 30/jul/04 1, ,669 0,651 0,660 0,018 16/02/2007 2, ,925 0,908 0,917 0,017 16/feb/07 2, ,442 0,424 0,433 0,018 16/feb/07 2, ,696 0,657 0,677 0,039 18/06/2009 1, ,027 1,027 1, /jun/09 1, ,67 0,676 0,673-0,006 18/jun/09 1, ,738 0,799 0,769-0,061 19/01/2010 1, ,945 0,921 0,933 0,024 19/jan/10 1, ,519 0,506 0,513 0,013 19/jan/10 1, ,688 0,677 0,683 0,011 20/06/2011 1, ,856 0,833 0,845 0,023 20/jun/11 1, ,422 0,403 0,413 0,019 20/jun/11 1, ,579 0,555 0,567 0,024 6 #DEEL/0! 0/jan/00 0,000 6 #DEEL/0! 0/jan/00 0,000 6 #DEEL/0! 7 #DEEL/0! 0/jan/00 0,000 7 #DEEL/0! 0/jan/00 0,000 7 #DEEL/0! 8 #DEEL/0! 0/jan/00 0,000 8 #DEEL/0! 0/jan/00 0,000 8 #DEEL/0! 9 #DEEL/0! 0/jan/00 0,000 9 #DEEL/0! 0/jan/00 0,000 9 #DEEL/0! 10 #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 11 #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 12 #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 13 #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 14 #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 15 #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 16 #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 17 #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 18 #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 19 #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 20 #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! 0/jan/00 0, #DEEL/0! standaardafwijking 0, , standaardafwijking 0, , standaardafwijking 0, , herhaalbaarheidslimiet 0,0286 herhaalbaarheidslimiet 0,0285 herhaalbaarheidslimiet 0,110 Page 1

15 Bijlage 5: foto s Vóór de SPE-opzuivering wordt het honingextract eerst over een filter gebracht. Automatische monstervoorbereider voor SPE.

16 EIA-kit voor streptomycine. EIA-washer.

17 EIA-plaat na toevoeging van substraat en een half uur incubatie. Door toevoeging van zwavelzuur wordt de substraatreactie gestopt.

18 De kleurintensiteit wordt gemeten met een spectrofotometer bij een golflengte van 450nm. De gemeten absorpties zijn omgekeerd evenredig met de concentratie streptomycine en dihydrostreptomycine.