VALIDATIEPLAN PLAN DE VALIDATION

Transcriptie

1 VALIDATIEPLAN PLAN DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par I-MET-FLVVT-031 Bepaling van Amoxicilline HPLC Dierenvoeders Totaal Totale Secundair Secondaire Mini-validatie validation minimale Mieke Vanbrabant Verantwoordelijke sectie toevoegingsmiddelen Naam Nom: Mieke Vanbrabant Functie - Fonction: Verantwoordelijke sectie toevoegingsmiddelen Datum - Date: Naam Nom: Mandy Lekens Functie - Fonction: Labmanager Datum - Date: Handtekeningen Signatures: (get.) Handtekeningen - Signatures: (get.) LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan Modèle plan de validation v /13

2 1 Validatieplan 1.1 Doel en toepassingsgebied Validatie van de kwantitatieve bepaling van amoxicilline met behulp van een afgeleide HPLC-methode (Virbac). Er wordt voornamelijk gewerkt naar het doseringsgehalte in dierenvoeders van 200 à 400 mg/kg. Voor deze methode worden de volgende prestatiekenmerken bepaald: lineariteit en werkgebied, bepaalbaarheidsgrens (rapporteringsgrens) en aantoonbaarheidsgrens, specificiteit en selectiviteit, juistheid en terugvinding, precisie, herhaalbaarheid, reproduceerbaarheid en robuustheid. 1.2 Analisten Het validatieonderzoek wordt uitgevoerd onder toezicht van sectieverantwoordelijke Mieke Vanbrabant door de volgende analisten: Raymond Van Sandt (RVS) Martine Bral (MB) Anne-Marie Voets (AV) 1.3 Lineariteit en werkgebied Een ijklijn in solvent en een ijklijn in matrix worden opgesteld op basis van 3 concentratieniveaus. De lineariteit van de ijklijnen wordt bewezen aan de hand van het statistisch verwerkingsprogramma Statgraphics (Lack-of-fit test). Een Statgraphics vergelijking tussen de ijklijn in solvent en de ijklijn in matrix wordt uitgevoerd om aan te tonen dat er geen significant verschil bestaat tussen deze ijklijnen (Comparison of regression lines). In dat geval wordt er in het verdere validatieonderzoek gebruik gemaakt van een ijklijn in solvent. Is dit niet het geval, dan wordt in de verdere analyses gewerkt met een ijklijn in matrix. De werkgebieden worden gekozen in functie van de meest voorkomende doseringsgehaltes. 1.4 Juistheid/Terugvinding Bij herhaalde analyses van een monster moet het resultaat liggen tussen 80 en 110% van het belaste gehalte. Voor een belast blanco voeder worden de afwijkingen hierop opgevolgd aan de hand van een controlekaart. Indien er onvoldoende controlekaartgegevens beschikbaar zijn, wordt de juistheid in eerste instantie bepaald aan de hand van herhaalbaarheidsgegevens. 1.5 Precisie De analyse wordt uitgevoerd onder zowel herhaalbaarheids- als reproduceerbaarheids-omstandigheden, volgens LAB 25-I 51 VALIDATIE. LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan Modèle plan de validation v /13

3 1.6 Selectiviteit/Specificiteit De piekidentificatie gebeurt aan de hand van specifieke DAD-spectra en de retentietijd. De piekkwantificatie gebeurt aan de hand van de piekoppervlakte. 1.7 Bepaalbaarheidsgrens (rapporteringsgrens) en aantoonbaarheidsgrens De rapporteringsgrens wordt bepaald aan de hand van de signaal/ruis-verhouding (S/N) van monsters belast op laag niveau. Voor de rapporteringsgrens dient S/N 6 te zijn; voor de aantoonbaarheidsgrens is S/N Reproduceerbaarheid (Inter) Deelname aan ringtesten indien mogelijk. 1.9 Robuustheid Langetermijnsvalidatie zal uitgevoerd worden op basis van Shewart-controlekaarten (trendanalyse). LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan Modèle plan de validation v /13

4 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / Date de la dernière adaption I-MET-FLVVT-031 Bepaling van Amoxicilline HPLC Dierenvoeders 2013/01/31 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

5 Overzicht van de prestatiekenmerken: o Zie paragraaf 2 Het validatiedossier werd opgesteld op basis van procedure LAB 00 P180 De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn: o Zie paragraaf 2.2 en 2.3 Historiek validatie Versie Herziening door/datum Reden van herziening Wijzigingen 01 11/2010, M. Vanbrabant Opsteller initiële versie Volledige tekst 01 01/2013, M. Vanbrabant Voorbereiding publicatie (geen versie wijziging) Toevoeging validatieplan en overzicht validatierapport + historiek LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

6 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par I-MET-FLVVT-031 Bepaling van Amoxicilline HPLC Dierenvoeders Totaal Totale Secundair Secondaire Mini-validatie validation minimale Mieke Vanbrabant Verantwoordelijke sectie toevoegingsmiddelen Naam Nom: Mieke Vanbrabant Functie - Fonction: Verantwoordelijke sectie toevoegingsmiddelen Datum - Date: Martine Bral: laborant Raymond Van Sandt: laborant Annemie Voets: laborant Start - Début: Einde - Fin: Naam Nom: Mandy Lekens Functie - Fonction: Labmanager Datum - Date: Handtekeningen Signatures: (get.) Handtekeningen - Signatures: (get.) Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

7 2 Validatieonderzoek en gegevens Voor elke gegevensreeks werd een Grubbs-analyse uitgevoerd voor de detectie van outliers. Indien hierbij een outlier (OL) werd vastgesteld, werd deze niet gebruikt voor de verdere berekeningen. 2.1 Lineariteit en werkgebied Een ijklijn met de volgende concentraties werd twee maal in duplo opgesteld, 2 maal in solvent en 2 maal in matrix, en dit voor 2 niveaus: Component Amoxicilline (AMOX) Concentratie in monster (mg/kg) Concentratie in oplossing (µg/ml) Concentratie in monster (mg/kg) Concentratie in oplossing (µg/ml) , , ,375 Uitvoerder: RVS Datum: 02/08/2010; 03/08/2010; 03/09/2010; 13/10/2010; 14/10/2010 HPLC: keten 4 Regressie-analyse op beide niveaus in solvent en matrix en onderlinge vergelijking van de regressielijnen van solvent en matrix toont aan dat het lineaire model geschikt is en dat de standaardcurve in matrix vergelijkbaar is met deze in solvent op beide niveaus (zie resultaten Statgraphics). Het werkgebied voor lage gehaltes ligt tussen 25 en 75 mg/kg. Het werkgebied voor gemiddelde gehaltes ligt tussen 200 en 600 mg/kg. 2.2 Juistheid/Terugvinding Bij herhaalde analyses van een monster belast op 200 mg/kg moet het resultaat liggen tussen 80 en 110% ( mg/kg). Voor controlekaartmetingen tijdens de periode augustus 2009 oktober 2010 werden geen afwijkingen vastgesteld en bedraagt het terugvindingspercentage voor amoxicilline 100,32% (Uitvoerder RVS). LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

8 2.3 Precisie Herhaalbaarheid De herhaalbaarheid werd bepaald aan de hand van herhaalde analyses van eenzelfde monster door dezelfde analist op hetzelfde toestel op dezelfde dag. De herhaalbaarheid (HH) wordt gedefinieerd als 2,8 x S r. Voor dierenvoeder werd de herhaalbaarheid bepaald voor zowel routinemonsters als voor belaste monsters Diervoeder (spike 25 mg/kg) De analyse op een belast monster werd 12 maal uitgevoerd. Hiertoe werd een blanco voeder belast op 25 mg/kg door aan 5 g voeder 125 µg amoxicilline toe te voegen (i.e. 625 µl van de standaard stockoplossing van 200 µg/ml). Vervolgens werd methode MET-FLVVT-031 gevolgd Diervoeder (routinemonster , verwacht gehalte 300 mg/kg) Voormengsel (routinemonster , verwacht gehalte 400 mg/kg) De analyse op routinemonsters werd 12 maal uitgevoerd volgens methode MET-FLVVT-031. Monster A B C Injectie Resultaat (mg/kg) Resultaat (mg/kg) Resultaat (mg/kg) 1 24, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ,781 Gemiddelde 24,37 293,29 412,00 S r 0,30 5,56 7,34 HH 0,85 15,55 20,54 RSD r (%) 1,24 1,89 1,78 RSD Horwitz 9,86 6,78 6,49 Max RSD Horwitz 6,57 4,52 4,33 Uitvoerder RVS RVS AV Datum 04/11/ /11/ /11/2010 HPLC keten 4 keten 4 keten 3 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

9 2.3.2 Reproduceerbaarheid (Intra) De reproduceerbaarheid werd bepaald aan de hand van analyses van monsters door verschillende analisten, eventueel op verschillende tijdstippen en op verschillende HPLC-toestellen. De reproduceerbaarheid wordt gedefinieerd als 2,8 x S R. Voor dierenvoeder werd de reproduceerbaarheid bepaald voor zowel routinemonsters als voor belaste monsters Diervoeder (spike 25 mg/kg) Datum Injectie Resultaat (mg/kg) Uitvoerder 04/11/ ,031 RVS 4 04/11/ ,256 RVS 4 13/12/ ,499 RVS 4 13/12/ ,743 RVS 4 13/12/ ,428 MB 4 13/12/ ,613 MB 4 13/12/ ,301 AV 4 13/12/ ,723 AV 4 14/12/ ,746 RVS 4 14/12/ ,332 RVS 4 14/12/ ,567 MB 4 14/12/ ,874 MB 4 14/12/ ,309 AV 4 14/12/ ,646 AV 4 15/12/ ,698 RVS 4 15/12/ ,359 RVS 4 15/12/ ,166 MB 4 15/12/ ,817 MB 4 Gemiddelde 25,06 S R 0,70 Reproduceerbaarheid 1,95 RSD R (%) 2,78 HPLC keten LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

10 Diervoeder (routinemonster , verwacht gehalte 300 mg/kg) Datum Injectie Resultaat (mg/kg) Uitvoerder HPLC keten 03/11/ ,869 RVS 4 03/11/ ,468 RVS 4 09/11/ ,484 RVS 4 09/11/ ,672 RVS 4 09/11/ ,306 MB 4 09/11/ ,136 MB 4 09/11/ ,767 AV 4 09/11/ ,982 AV 4 13/12/ ,923 AV 4 13/12/ ,215 AV 4 13/12/ ,589 MB 4 13/12/ ,623 MB 4 13/12/ ,141 RVS 4 13/12/ ,786 RVS 4 04/01/ ,572 RVS 4 04/01/ ,158 RVS 4 04/01/ ,099 MB 4 04/01/ ,405 MB 4 Gemiddelde 277,18 S R 8,74 Reproduceerbaarheid 24,47 RSD R (%) 3,15 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

11 Diervoeder (routinemonster , verwacht gehalte 350 mg/kg) Datum Injectie Resultaat (mg/kg) Uitvoerder HPLC keten 13/12/ ,052 AV 4 13/12/ ,197 AV 4 13/12/ ,886 MB 4 13/12/ ,019 MB 4 13/12/ ,330 RVS 4 13/12/ ,153 RVS 4 14/12/ ,070 RVS 4 14/12/ ,192 RVS 4 14/12/ ,992 MB 4 14/12/ ,285 MB 4 14/12/ ,970 AV 4 14/12/ ,363 AV 4 15/12/ ,720 RVS 4 15/12/ ,854 RVS 4 15/12/ ,934 MB 4 15/12/ ,732 MB 4 15/12/ ,419 AV 4 15/12/ ,601 AV 4 Gemiddelde 341,10 S R 10,31 Reproduceerbaarheid 28,86 RSD R (%) 3, Selectiviteit/Specificiteit Zie Bepaalbaarheidsgrens (rapporteringsgrens) en aantoonbaarheidsgrens Voor de bepaling van de rapporteringsgrens werden 6 deelmonsters belast op 25 mg/kg en geanalyseerd. De signaal/ruis-verhouding (S/N) bedroeg 23,2. Voor de bepaling van de aantoonbaarheidsgrens werden 6 deelmonsters belast op 12,5 mg/kg en geanalyseerd. De signaal/ruis-verhouding (S/N) bedroeg 13,8. Aangezien 25 mg/kg binnen het werkgebied valt, het chromatogram voldoet aan de S/N-verhouding en we vooral werken naar de doseringsgehaltes, wordt dit gehalte aangenomen als rapporteringsgrens. Uitvoerder: RVS Datum: 22/10/2010; 26/10/2010 HPLC: keten 4 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

12 2.6 Reproduceerbaarheid (Inter) Er werd nog niet deelgenomen aan ringtesten, een 2 e lijnscontrole wordt uitgevoerd. 2.7 Robuustheid Zie Standaarden houdbaarheid Ter controle worden de piekoppervlakken van standaard 2-injectie genoteerd: Aanmaak op 26/04/ /07/2010 Datum Area Datum Area 26/04/ /07/ /05/ /08/ /05/ /08/ /05/ /08/ /05/ /08/ /06/ /08/ /06/ /09/ /06/ /10/ /06/ /07/ Gemiddelde 49492, ,38 STDEV 800,33 579,64 RSD (%) 1,62 1,25 De relatieve standaarddeviatie van deze oppervlakken is gering binnen de houdbaarheidstermijn van 3 maanden. De afwijking ten opzichte van de vorige STD2-injectie mag maximaal 20% bedragen, maar een dalende trend moet vermeden worden. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

13 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13