VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION

Transcriptie

1 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Bepaling van het aantal Enterococcen in water (36 C) I-MET-045 Filtratietechniek aflezen platen bevestiging ISO : 2000 Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / Date du dernière adaption water 17/10/2014

2 Overzicht van de prestatiekenmerken : De herhaalbaarheid bedraagt 0.15 log. De meetonzekerheid bedraagt 0.13 log en de intralabreproduceerbaarheid 0.18 log. De validatie voldoet aan de procedure LAB 00 P180 De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn: Deelnemen aan een ringtest met het bekomen van goede resultaten. Behalen van een herhaalbaarheid van 0.50 log en intralabreproduceerbaarheid van 1 log Inhoud: Versie Herziening Reden Wijzigingen door / datum 1 EH / Herwerking volgens nieuwe template, instructie en aanvulling met gegevens Volledig

3 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Bepaling van het aantal Enterococcen in water (36 C) I-MET-045 Filtratietechniek aflezen platen bevestiging ISO : 2000 Water Verificatie Elly Harnie Sectieverantwoordelijke biologische analyses Naam Nom Elly Harnie Handtekeningen - Signatures: get. Functie - Fonction: Sectieverantwoordelijke biologische analyses Datum - Date: 17/10/2014 Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par Analisten microbiologie: Liesbeth Stas, Kristof De Greif, Sandra De Cocker, Anja Van Beversluys, Stefanie Vanbiesbrouck, Conny De Schepper, Chantal Focquet, Mieke De Mits Start - Début: Einde - Fin: Dit rapport is een herwerking van het originele rapport opgesteld in , naar aanleiding van de nieuwe template. Naam Nom Ronny Martens Handtekeningen - Signatures: get. Functie - Fonction: QAM Datum - Date: 20/10/2014 Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /14

4 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION INLEIDING INITIËLE PROEVEN BEPALEN VAN DE VALIDATIEPARAMETERS JUISTHEID BESMETTE MONSTERS HERHAALBAARHEID BESMETTE MONSTERS INTRALABREPRODUCEERBAARHEID EN MEETONZEKERHEID BESMETTE MONSTERS KOELING BESMETTE MONSTERS RINGANALYSE BESLUIT FOTO S LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /14

5 Samenvatting validatiegegevens Résumé des données de validation Overzicht matrices/ validatieparameters/ criteria Matrices : Water (gebruikt in bereidingen van levensmiddelen, tafelwater, behandeld leidingwater, ) Volgende parameters werden bepaald : Herhaalbaarheid Intralabreproduceerbaarheid (en meetonzekerheid) Relatieve juistheid Criteria : Volgende criteria werden vooropgesteld : Voor de juistheid van de besmette monsters 0.35 log Voor de herhaalbaarheid 0.22 log Voor de intralabreproduceerbaarheid 0.47 log Overzicht validatietesten 1. Inleiding Dit dossier bevat een herwerking van het oorspronkelijke validatiedossier van de bepaling van Enterococcen in water ( ), aangevuld met nieuwe gegevens. In punt 2 worden de initiële proeven beschreven, in punt 3 de validatieproeven en in punt 4 de ringtest. 2. Initiële proeven Proef 1: steriliteit filtratietoestel Werkwijze Het filtratietoestel (oud toestel) werd grondig gereinigd en getest op steriliteit. De filterhouders en ondersteuningen werden in EtOH gelegd gedurende 24 u. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /14

6 Er werd 100 ml steriel water gefiltreerd op een filter. Deze werd geïncubeerd op PCA platen zonder glucose. De drie filterhouders werden getest. Er werden telkens 2 filters van 45 µm per filterhouder geïncubeerd: eén bij 22 C en één bij 36 C. Resultaten De proef werd op 13/02/09 uitgevoerd door AVB (reeks 2). De resultaten zijn genoteerd in onderstaande tabel. Tabel Resultaten steriliteit filtratietoestel proef 1 22 C 36 C Filterhouder 1 besmetting besmetting Filterhouder 2 besmetting besmetting Filterhouder 3 besmetting besmetting Er werd ook steriel water geïncubeerd en een steriele filter. Hierbij werden geen kolonies aangetroffen. Op de filters werden geen kolonies geteld; de rand echter was duidelijk besmet (overgroeiing). Besluit Dit was geen goeie manier om het toestel te steriliseren. In een volgende proef werd een andere manier van steriliseren uitgetest. De filterhouder en filter werden geautoclaveerd. Proef 2: steriliteit filtratietoestel Werkwijze De onderdelen van het filtratietoestel die in de wasmachine kunnen, werden hierin gewassen. Vervolgens werden de verschillende onderdelen geautoclaveerd. Dan werd proef 1 herhaald. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /14

7 Resultaten De proef werd op 17/02/09 uitgevoerd door AVB (reeks 4). De resultaten staan genoteerd in onderstaande tabel. Tabel Resultaten steriliteit filtratietoestel proef 2 (cfu/plaat) 22 C 36 C Filterhouder Filterhouder Filterhouder Er werd ook een steriele filter geïncubeerd, zonder filtratie en ook een blanco plaat was; beide waren in orde. Besluit Op de meeste filters werden kolonies aangetroffen. Deze filterhouders kunnen niet gebruikt worden om water te analyseren. Er werd gekeken voor een ander systeem: er zouden wegwerp houders met filters worden besteld en uitgetest. Het onderstel van het filtratietoestel kan wel gebruikt worden (komt niet in contact met het staal). Proef 3: controle van water Werkwijze Het aangekochte water werd gecontroleerd door 0.1 ml hiervan uit te platen op Slanetz en Bartley agar. Resultaten De proef werd door AVB uitgevoerd op 19/02/09 (reeks 5). Na 48 u incubatie werden geen kolonies teruggevonden op de platen. Besluit Het water blijkt geschikt voor het besmetten met Enterococcen. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /14

8 Proef 4: besmetten van water Werkwijze Er werd gebruikgemaakt van Quanti-cults voor het besmetten van stalen. Werkwijze oplossen Quanti-cult Enterococcus (Q7030C) - Neem een vial (A) met een blauw dekseltje en plaats het in een broedstoof bij 37 C om de vloeistof op te warmen gedurende 5 tot 10 minuten - Neem een vial (B) met een rood dekseltje en laat het op kamertemperatuur komen - Neem vial A uit de broedstoof en verwijder het blauwe deksel en plaats het rode deksel van vial B op vial A. - Plaats vial A in het blauwe rekje, aanwezig in de doos - Draai het blauwe rek om en plaats het in een broedstoof op 37 C gedurende 15 minuten - Na incubatie: meng door de vial verschillende keren om te draaien Opgelet: niet schudden Controleer of alle bacteria opgelost zijn. Indien er nog zwarte partikeltjes te zien zijn op het rode deksel, plaats de vial terug in de broedstoof voor 1 tot 2 minuten Water wordt op twee niveaus besmet: 1) Werkwijze besmetting (verwacht aantal < 100 cfu; hoog niveau): - Breng 1 ml van de opgeloste Quanti-cult in 100 ml drinkwater en meng goed (dit wordt ook bij b. gebruikt) * - Filtreer hiervan 10 ml en leg de filter op Slanetz en Bartley agar. Herhaal dit. - Incubeer de platen. 2) Werkwijze besmetting (verwacht aantal < 10 cfu; laag niveau): - Neem 1 ml van de vorige oplossing (*) en los op in 100 ml drinkwater en meng goed. - Filtreer dit en leg de filter op Slanetz en Bartley agar. Herhaal dit protocol. - Incubeer de platen. Analyseer ook het blanco monster drinkwater (100 ml filtreren). De analysereeks bestaat uit volgende monsters en platen: - monster 1a: water laag niveau: 1 plaat - monster 1b: water laag niveau: 1 plaat - monster 2a: water hoog niveau: 1 plaat - monster 2b: water hoog niveau: 1 plaat - blanco water: 1 plaat LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /14

9 Resultaten De proef werd door AVB en SDC uitgevoerd op 03/03/09. Er werd aangekocht water gebruikt om te besmetten. De kolonies werden allemaal bevestigd op BEA (opgelet bij luchtbellen zijn er problemen in de bevestiging). Tabel Resultaten proef Enterococcen Monster AVB SDC AVB SDC I Duploverschil I cfu/xml cfu/xml Log cfu/xml Log cfu/xml AVB SDC 1a 5* 6* b 5* 7* a b blanco < 1 < 1 * geschatte aantallen x = 10 of 100 ml Besluit De duploverschillen zijn kleiner dan 0.22 log. De bekomen resultaten voldoen aan het verwachte aantal. 3. Bepalen van de validatieparameters Aan de hand van besmette monsters werden de validatieparameters bepaald (opgelet: er werd een ander protocol gevolgd dan beschreven in punt 2; dit komt omdat een nieuw protocol tijdens de valdatie van andere parameters was uitgetest). Werkwijze - Breng 400 µl van de opgeloste Quanti-cult in 400 ml drinkwater en meng goed - Filtreer hiervan 100 ml en leg de filter op Slanetz en Bartley-agar en incubeer C bij 36 C±2 C LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /14

10 Doe dit tweemaal per persoon. Analyseer ook het blanco monster drinkwater (100 ml filtreren). Plaat 100 µl van de Quanti-cult uit op Slanetz en Bartley agar om de concentratie te tellen. Tel de platen na 44 tot 48 h en controleer ze na 2 dagen koeling (aantal en uitzicht kolonies). Bevestig 5 kolonies per positieve plaat. De analysereeks ziet er als volgt uit: - besmet water: 1 plaat - besmet water duplo: 1 plaat - blanco water: 1 plaat - telling Quanti-cult = 1 plaat (100 µl) 3.1 Juistheid besmette monsters De resultaten voor de relatieve juistheid (d), berekend ten opzichte van de referentiewaarde, is in onderstaande tabel aanwezig. Alle resultaten voldoen aan het vooropgestelde criterium van 0.35 log. Tabel Relatieve juistheid (d) besmette monsters (log) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /14

11 Datum Monster Analist cfu / 100 ml d 17/03/2009 1a AVB 26-0,25 LS 27-0,23 1b AVB 37-0,09 LS 29-0,20 17/03/2009 2a SDC 28-0,26 KDG 34-0,18 2b SDC 35-0,17 KDG 30-0,23 23/03/2009 3a LS 34-0,14 SV 37-0,10 3b LS 36-0,11 SV 32-0,16 24/03/2009 4a KDG 31-0,05 CDS 27-0,11 4b KDG 31-0,05 CDS 38 0,04 27/03/2009 5a MDM 29-0,25 SV 28-0,26 5b MDM 34-0,18 SV 29-0,25 31/03/2009 6a MDM 29-0,34 KDG 32-0,29 6b MDM 31-0,31 KDG 36-0,24 10/04/2009 7a MDM 33-0,20 LS 23-0,36 7b MDM 25-0,32 LS 23-0,36 24/04/2009 8a SV 29-0,23 CDS 42-0,07 8b SV 33-0,17 CDS 35-0,15 16/06/2009 9a CDS 28-0,09 SDC 27-0,11 9b CDS 28-0,09 SDC 29-0,08 Blanco waarden < 1 cfu/ 100 ml; a en b = duplobepalingen LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /14

12 3.2 Herhaalbaarheid besmette monsters De resultaten gebruikt voor het berekenen van de herhaalbaarheid zijn aanwezig in onderstaande tabel. De herhaalbaarheid bedraagt 0.15 log. Dit voldoet aan het vooropgestelde criterium van 0.22 log. Tabel Gegevens herhaalbaarheid (cfu/100 ml) Datum Analist Resultaat 1 Resultaat 2 17/03/2009 AVB LS /03/2009 SDC KDG /03/2009 LS SV /03/2009 KDG CDS /03/2009 MDM SV /03/2009 MDM KDG /04/2009 MDM LS /04/2009 SV CDS /06/2009 CDS SDC Intralabreproduceerbaarheid en meetonzekerheid besmette monsters De meetonzekerheid werd bepaald conform de instructie LAB P 507 Microbiologie Schatting van de Meetonzekerheid. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /14

13 Staal nummer Tabel Gegevens meetonzekerheid Datum Resultaat A (kve/ 100ml) Resultaat B (kve/100ml) 1 17/03/ /03/ /03/ /03/ /03/ /03/ /04/ /04/ /06/ /05/ De meetonzekerheid bedraagt 0.13 log en de intralabreproduceerbaarheid 0.18 log. 3.4 Koeling besmette monsters Tijdens de validatietesten werd in verschillende reeksen de koeling uitgetest van platen (controle uitzicht en hoeveelheid kolonies ; controle koeling bevestigingstesten ; vergelijking resultaten). Een overzicht wordt gegeven in onderstaande tabel. Tabel Overzicht koelen platen Datum reeks Analist Test OK/NOK 03/03/09 AVB BEA koelen na incubatie Goed af te lezen, maar toch wijziging uitzicht (zone rond kolonie anders) 03/03/09 SDC BEA koelen na incubatie Goed af te lezen, maar toch wijziging uitzicht 24/03/09 KDG Slanetz en Bartley 1 d koelen voor incubatie 30/03/09 SV Slanetz en Bartley 1 d koelen voor incubatie en 2d nadien 24/03/09 CDS Slanetz en Bartley 1 d koelen voor incubatie en 1d nadien (zone rond kolonie anders) OK OK OK De ISO norm 8199 laat toe om platen te koelen indien ze niet dadelijk kunnen afgelezen worden indien er geen veranderingen optreden. Bovenstaande tabel toont aan dat het koelen van platen na incubatie geen problemen geeft. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /14

14 4. Ringanalyse Op 31/03/09 werd een ringanalyse van KWR uitgevoerd door SDC en AVB. Vier stalen water werden geanalyseerd voor enterococcen. De resultaten zijn aanwezig in onderstaande tabel. Tabel Resultaten ringanalyse Monster Cfu/100 ml Log cfu/100 ml AVB SDC AVB SDC I logverschil I De resultaten van beide analisten overeen (logverschil < 0.47 log). Volgende z-scores werden bekomen: - 1.0, 0.9, 1.1 en Besluit De herhaalbaarheid bedraagt 0.15 log. Daarmee voldoet ze aan het eigen criterium van 0.22 log. De meetonzekerheid bedraagt 0.13 log en de intralabreproduceerbaarheid 0.18 log. 6. Foto s Hier zijn enkele foto s van de methode aanwezig. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /14

15 Filtratietoestel Plaatjes wateranalyse LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /14

16 Aflezing bevestiging BEA LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /14