VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION

Transcriptie

1 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / Date du dernière adaption Detectie van Salmonella spp. in monsters afkomstig van de primaire productie LAB 24 I-MET-034 (ISO 6579 Amendment 1: Annex D) Aanrijking detectie - isolatie Swabs, omgevingsstalen uit kippenhokken (stof, overschoentjes, faeces) 20/06/2012

2 Overzicht van de prestatiekenmerken : detectielimiet = 10 cfu/swabs of /25 g of /overschoentjes De validatie voldoet aan de procedure LAB 00 P180 De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn voor de betreffende matrices/parameters: Deelnemen aan een ringtest met het bekomen van goede resultaten. Behalen van een detectielimiet van 10 cfu /swabs of /25 g of /overschoentjes Historiek validatiedossier: Versie Herziening Reden Wijzigingen door / datum 1 EH/ Aanpassing dossier 2006, 2008 naar de nieuwe template en procedure P180 Samenvoegen dossier en aanvullen met extra gegevens en foto s

3 VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Detectie van Salmonella spp. in monsters afkomstig van de primaire productie I-MET-034 (ISO 6579 Amendment 1: Annex D) Aanrijking detectie - isolatie Swabs, omgevingsstalen uit kippenhokken (stof, overschoentjes, faeces) Verificatie Elly Harnie Sectieverantwoordelijke biologische analyses Naam Nom: Elly Harnie Handtekeningen - Signatures: get. Functie - Fonction: Sectieverantwoordelijke biologische analyses Datum - Date: Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par Analisten microbiologie: K. De Greif, L. Stas, S. Vanbiesbrouck, A. Van Beversluys, C. De Schepper, M. De Mits, C. Focquet, H. Van Remoortel, S. De Cocker Start - Début: Einde - Fin: De validatie werd uitgevoerd in 2006 en 2008; dit document is een samenvatting van de validatietesten en een aanvulling van het dossier als gevolg van de nieuwe rapport-template. Het labo was al geaccrediteerd voor de ISO Naam Nom: Ronny Martens Handtekeningen - Signatures: get. Functie - Fonction: QAM Datum - Date: Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

4 Samenvatting validatiegegevens Résumé des données de validation 1. Validatieparameters / matrices Matrices : 2006: swabs en lymfeklieren (varkens) 2008: verdere aanvulling met omgevingsstalen uit kippenhokken (stof, overschoentjes, faeces) Opvolging aan de hand van besmette stalen, ringtesten Volgende parameters werden bepaald : - Detectielimiet Criteria: - Detectielimiet bekomen van ongeveer 10 cfu 2. Overzicht testen Gebruikte referenties : BCR of referentiemonster V.W.A Testen uitgevoerd in 2006 : lymfeklieren en swabs afkomstig van varkenskarkassen In 2004 werd de methode Salmonella MSRV opgestart voor de analyse van monsters genomen in kippenhokken. Er werd opleiding gevolgd bij Y. Ghafir (Ulg). Ook werd een bezoek gebracht aan het ARSIA in Ciney bezocht waar Salmonella MSRV in routine wordt uitgevoerd. Dankzij ringanalyses georganiseerd door het CODA zijn de analisten vertrouwd geraakt met de methode. De methode werd nooit geïmplementeerd. Vanaf 16 oktober 2006 wordt de methode opnieuw opgestart voor de analyse van swabs en lymfeklieren. Op 24/08/06 werd uitleg gegeven door A. Vandenbrande (Ulg) in verband met de methode en de monstervoorbereiding van lymfeklieren. De MSRV methode verschilt enkel in het gebruik van het MSRV medium van de klassieke methode, gebruikt in het labo. Daarom werd slechts een beperkte validatie uitgevoerd. In een eerste stap werden twee proeven uitgevoerd op swabs die in het labo voor handen waren (= make-up watjes). In een tweede stap werd een proef uitgevoerd op swabs die in de praktijk zullen gebruikt worden (= sponsjes). Lymfeklieren waren niet voor handen voor het valideren van de methode LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

5 2.1.1 Proef 1 Werkwijze - Verdunnen van het referentiemonster (6i-0506) o Oplossing 1: 5 x verdunnen 20 cfu / ml o Oplossing 2: 10 x verdunnen 10 cfu / ml - 4 steriele swabs in een Stomacherzak brengen - 1 ml van oplossing 1 toe voegen ml gebufferd peptonwater toevoegen. - De zak in de Stomacher bevestigen en de inhoud schudden. Analyseren zoals beschreven in het voorlopig werkvoorschrift MET076 (uitgavedatum 29/06/06 = versie van in 2004) tot en met isolatie op XLD/OSCM. Dit herhalen voor oplossing 2. Resultaat De proef werd door KDG uitgevoerd op 11/07/2006. Op dit moment werd de MSRV bodem van Merck (poeder) nog gebruikt. In het monster swabs besmet met oplossing 1 en het monster swabs besmet met oplossing 2 werd Salmonella teruggevonden op MSRV (halo) en verder bevestigd op XLD en OSCM. Besluit De detectielimiet is kleiner dan 10 cfu/swabs Proef 2 In een tweede proef werd de kant en klare bodem MSRV van Biokar (Ledtechno) gebruikt (aangeraden door Ulg op 24/08/06). Werkwijze - Verdunnen van het referentiemonster zodat een concentratie van 10 cfu / ml wordt verkregen. Uitplaten van 1 ml over drie platen OSCM om te tellen (in duplo). - Eén steriele swab in een steriele Stomacherzak brengen. - 1 ml verdund referentiemonster toevoegen op het oppervlak van de swab ml gebufferd peptoonwater toevoegen. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

6 - Stomacheren en verder werken zoals beschreven in het voorlopig werkvoorschrift (uitgavedatum 04/10/06). Per persoon één monster besmetten en analyseren (tot en met het enten op XLD/OSCM). Resultaten De proef werd door LS, KDG en SV uitgevoerd op 04/10/06. Er werden 9-10 cfu s toegevoegd aan de swabs (telling uitgevoerd door SV). In het monster swabs werd Salmonella teruggevonden op MSRV (halo) en verder bevestigd op XLD en OSCM door alle analisten. Besluit De detectielimiet van de methode is kleiner dan 10 cfu/swabs Proef 3 In een derde proef werd de detectielimiet van de methode bepaald op de swabs die zullen gebruikt worden bij monstername (= 1 bevochtigd sponsje in een steriele zak). Werkwijze - Verdunnen van het referentiemonster zodat een concentratie van 10 cfu/ml wordt verkregen. Uitplaten van 1 ml over drie platen OSCM om te tellen (in duplo). - Met een steriele pincet de swab uit de Stomacherzak nemen en over een deel van het oppervlak van een stuk rauw varkensvlees wrijven (= bijbesmetting). - De swab opnieuw in de Stomacherzak brengen. - 1 ml van het verdund referentiemonster toevoegen op het oppervlak van de swab in de Stomacherzak (het blanco monster wordt niet besmet) ml gebufferd peptoonwater toevoegen. - Stomacheren en verder werken zoals beschreven in het voorlopig werkvoorschrift (uitgavedatum 04/10/06). Per persoon worden twee monsters besmet en geanalyseerd (tot en met het enten op XLD/OSCM). Er wordt ook een blanco monster geanalyseerd (= 1 persoon). LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

7 Resultaten De proef werd door LS, KDG en SV uitgevoerd op 10/10/06. Er werden 9 cfu toegevoegd aan de swabs (telling uitgevoerd door KDG). In alle monsters swabs werd Salmonella teruggevonden op MSRV (halo) en verder bevestigd op XLD en OSCM door alle analisten. Het blanco monster was negatief. Besluit De detectielimiet van de methode is kleiner dan 10 cfu/swabs. In de loop van 2006 werd overgeschakeld op een tweede versie van de bodem OSCM (verbeterde vorm). Hiervoor werden een vijftigtal stalen uitgeplaat op OSCM en OSCM II door verschillende personen. De resultaten kwamen overeen. 2.2 Testen uitgevoerd in 2008 : stalen genomen in kippenhokken (stof, overschoentjes, faeces) Aanvullingen dossier 2006 naar aanleiding van een uitbreiding van de scope. Omdat de methode al gekend was, was dit een beperkte validatie. Omdat er geen teststalen ter beschikking waren werden voedingstalen geanalyseerd met de klassieke ISO methode en met de MSRV methode. Dezelfde resultaten werden bekomen (zie onderstaande tabel). LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

8 Analist Datum Monsternummer Resultaat MSRV Resultaat ISO LS 02/12/ MDM 03/12/ AVB 03/12/ SV 05/12/ KDG 09/12/ SDC 10/12/ HVR 12/12/ CDS 12/12/ Ook werden swabs besmet en geanalyseerd om de detectielimiet opnieuw te bepalen. De detectielimiet bedroeg 10 cfu/swabs (er werden door 3 personen swabs besmet rond detectielimiet en geanalyseerd). Analist Datum Resultaat HVR 15/12/08 + CDS 16/12/08 + MDM 16/12/08 + LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

9 2.3 Aanvulling aan de hand van ringtesten en besmette monsters De resultaten werden aangevuld aan de hand van besmette monsters en proefmonsters. Tabel overzicht besmette monsters Datum Matrix Besmettingsniveau Analist Blanco staal Besmet staal 17/11/2009 overschoentjes 10 cfu CF /01/2010 Faeces (25g) 10 cfu KDG /01/2010 Faeces (25g) 10 cfu LS Faeces (25g) 10 cfu /11/2011 overschoentjes 10 cfu AVB /05/2012 Stof (25g) 10 cfu KDG - + LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

10 Tabel overzicht proefmonsters Datum Monsternummer Matrix Analisten Resultaat 1 Resultaat 2 12/10/ Stof Chantal/Stefanie /10/ Overschoentjes Stof Faeces Stof Faeces Stof /11/ Faeces /11/ Faeces Chantal/Anja Stof Faeces Faeces Faeces Faeces /11/ Overschoentjes Chantal/Stefanie Overschoentjes Overschoentjes /11/ Overschoentjes Chantal/Liesbeth /03/ Faeces Stefanie/Liesbeth Stof Faeces Stof Overschoentjes - - Er werd deelgenomen aan ringtesten in 2009, 2010, 2011 (CODA; 20 stalen per ringtest); er werden goede resultaten bekomen. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

11 3. Algemeen besluit In onderstaande tabel is een samenvatting aanwezig van de besmette stalen; De detectielimiet van de methode is 10 cfu/swabs, /25 g faeces of overschoentjes = OK. Er werden 24 voedingsstalen parallel met de ISO methode uitgevoerd en dezelfde resultaten werden bekomen. Er werden ook 23 stalen door twee personen geanalyseerd en dezelfde resultaten werden bekomen. Er werd deelgenomen aan ringtesten in 2009, 2010, 2011 (CODA; 20 stalen per ringtest); er werden goede resultaten bekomen. Datum matrix Besmettingsniveau Analist Blanco staal Besmet staal 11/07/2006 swabs 20 cfu/swabs KDG cfu/swabs KDG + 04/10/2006 swabs 9-10 cfu/swabs KDG - + LS + SV + 10/10/2006 swabs 9 cfu/swabs KDG - + LS + SV + 15/12/2008 overschoentjes 10 cfu / HVR - + overschoentjes CDS + MDM + 17/11/2009 overschoentjes 10 cfu / overschoentjes CF /01/2010 Faeces 10 cfu/25g KDG /01/2010 Faeces 10 cfu/25g LS Faeces 10 cfu/25g /11/2011 overschoentjes 10 cfu / AVB - + overschoentjes 30/05/2012 stof 10 cfu/25g KDG - + Verdere opvolging van het dossier gebeurt aan de hand van: - Referenties (elke reeks positieve controle; afwisselende stammen) - Besmette monsters (tweedelijnscontrole) - Ringtest (jaarlijks) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

12 4. Foto s methode Hieronder volgen verschillende foto s van de methodiek. Initiële stap: overbrengen staal in een monsternamezak Toevoegen gebufferd peptonwater LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

13 Na incubatie: enten MSRV Isolatie positieve stalen op XLD / OSCM (Brilliance Salmonella) LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

14 Voorbeeld positieve platen XLD /OSCM (Brilliance Salmonella) Positieve stalen worden bevestigd aan de hand van een biochemische test LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13

15 Laatste stap: aflezen biochemische test en doorgeven resultaat LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v /13