BEPALING VAN DOXYCYCLINE, TETRACYCLINE, OXYTETRACYCLINE EN CHLOORTETRACYCLINE IN

Transcriptie

1 Federaal Agentschap voor de Veiligheid van de Voedselketen Bestuur Laboratoria I-MET-FLVVT-091 I-MET-FLVVT-091 BEPALING VAN DOXYCYCLINE, TETRACYCLINE, OXYTETRACYCLINE EN CHLOORTETRACYCLINE IN DIERENVOEDERS (HPLC) Versie 02 Datum van toepassing Opgesteld door : Mieke Vanbrabant, sectieverantwoordelijke Nazicht door : Sophie De Volder; QAM; Goedkeuring vrijgave door : Mandy Lekens; Labomanager; Beheer & locatie geldende versie : FLVVT; M:\DOCUMENTEN\QAM\Kwaliteitsysteem Bestemmelingen : Medewerkers FLVVT Trefwoorden : Toevoegingsmiddelen dierenvoeders v.02 1/9

2 Overzicht wijzigingen Herziening door/datum * Reden van de herziening Tekstdeel/draagwijdte van de herziening M. Vanbrabant Opsteller van initiële versie Volledige tekst M. Vanbrabant Update documentbeheer Volledige tekst februari 2012 * Het verschil tussen de huidige datum en de laatste herziening mag niet meer dan 5 jaar bedragen. Wijzigingen ten opzichte van de vorige versie worden gemarkeerd in rood. Indien omwille van de omvang van de wijzigingen, de tekst door gebruik van markeringen niet meer leesbaar wordt, wordt de markering van wijzigingen weggelaten in de nieuwe versie. Dit wordt vermeld in de historiek van het document. dierenvoeders v.02 2/9

3 INHOUDSTABEL 1 DOEL TOEPASSINGSGEBIED WETTELIJKE EN NORMATIEVE DOCUMENTEN DEFINITIES EN AFKORTINGEN PRINCIPE PRESTATIEKENMERKEN VEILIGHEIDSVOORSCHRIFTEN EN BIJZONDERE MAATREGELEN REAGENTIA EN HULPSTOFFEN REAGENTIA HULPSTOFFEN Doxycycline standaard stockoplossing, 200 µg/ml (W0531) Tetracycline standaard stockoplossing, 200 µg/ml (W0409) Oxytetracycline standaard stockoplossing, 200 µg/ml (W1838) Chloortetracycline standaard stockoplossing, 200 µg/ml (W1839) Mengsel van tetracyclines, standaard werkoplossing, 10 µg/ml (W2001) TOESTELLEN ALGEMEEN SPECIFICATIES VOOR DEZE METHODE WERKWIJZE EXTRACTIE Diervoeder Voormengsel/Premix HPLC-BEPALING KWALITEITSCONTROLE BEREKENING EN RAPPORTERING VERWIJZING NAAR BIJHORENDE PROCEDURES, INSTRUCTIES, DOCUMENTEN, FORMULIEREN OF LIJSTEN... 9 dierenvoeders v.02 3/9

4 1 Doel Kwantitatieve bepaling van doxycycline, tetracycline, oxytetracycline en chloortetracycline in dierenvoeders. 2 Toepassingsgebied De methode is geschikt voor de controle van de dosering van doxycycline, tetracycline, oxytetracycline en chloortetracycline in gemedicineerde diervoeders en premixen. De rapporteringsgrens van de methode bedraagt 2,5 mg/kg. 3 Wettelijke en normatieve documenten Een overzicht van de wettelijke en normatieve documenten wordt gegeven in LAB 25-L 18 OVERZICHT WETGEVING FLVVT. 4 Definities en afkortingen Term HPLC Definitie High Performance Liquid Chromatography 5 Principe Het monster wordt geëxtraheerd met zure methanol. Na verdunning van het bekomen extract met extractievloeistof wordt het geanalyseerd d.m.v. hoge druk vloeistofchromatografie (HPLC) met behulp van een PDA detector. 6 Prestatiekenmerken De relevante meetonzekerheden zijn terug te vinden in LAB 25-L 22 OVERZICHT MEETONZEKERHEDEN FLVVT. De waarden voor de reproduceerbaarheid (RSD R %) zijn terug te vinden in M:\DOCUMENTEN\QAM\Tweedelijn\Beoordeling tweedelijn.xlsx. dierenvoeders v.02 4/9

5 7 Veiligheidsvoorschriften en bijzondere maatregelen De scheikundige producten die bij deze analysemethode gebruikt worden, zijn ondergebracht bij de potentieel giftige en kankerverwekkende stoffen. Dit maakt het noodzakelijk de voorziene maatregelen in het laboratorium toe te passen om blootstelling aan of contact met deze producten tot een minimum te herleiden. Algemene en specifieke veiligheidsvoorschriften zijn opgenomen in LAB 25-P 07 VEILIGHEIDSINSTRUCTIES FLVVT. 8 Reagentia en hulpstoffen 8.1 Reagentia Alle reagentia dienen van pro analyse -kwaliteit te zijn of van hogere kwaliteit indien vermeld. Reagentia Labonr Methanol, HPLC-kwaliteit (CH 3 OH) R Water, HPLC-kwaliteit R Acetonitril, HPLC-kwaliteit (CH 3 CN) R Zoutzuur, 37 % (HCl) R Oxaalzuur p.a. R Tetramethylammoniumchloride (TMACl) R Extractievloeistof (Zure methanol): Pipetteer 5,0 ml HCl (dichtheid 1,18 g/ml) in een 1000 ml maatkolf en leng aan tot de maatstreep met methanol (R0183). W0698 De houdbaarheid van deze werkoplossing bedraagt 2 jaar Oxaalzuuroplossing (0,01 M): Los 1,26 g oxaalzuur (R0234) en 0,5 g tetramethylammoniumchloride (R0633) op in 1000 ml water. W0591 De houdbaarheid van deze werkoplossing bedraagt 2 jaar Mobiele fase: acetonitril / oxaalzuuroplossing (W0591) (17/83) Deze verhouding kan wijzigen naargelang het type kolom. De houdbaarheid van deze oplossing bedraagt 2 jaar. W0043 dierenvoeders v.02 5/9

6 8.2 Hulpstoffen Doxycycline standaardstof van gegarandeerde zuiverheid (S0126) Tetracycline standaardstof van gegarandeerde zuiverheid (S0108) Oxytetracycline standaardstof van gegarandeerde zuiverheid (S0106) Chloortetracycline standaardstof van gegarandeerde zuiverheid (S0107) Doxycycline standaard stockoplossing, 200 µg/ml (W0531) Weeg, rekening houdend met de zuiverheid, 10 mg doxycycline (S0126) tot op 0,1 mg nauwkeurig af in een maatkolf van 50 ml. Los op in methanol (R0183) en leng vervolgens aan tot de maatstreep. Deze oplossing is 4 weken houdbaar bij een temperatuur van 4 ± 4 C Tetracycline standaard stockoplossing, 200 µg/ml (W0409) Weeg, rekening houdend met de zuiverheid, 10 mg tetracycline (S0108) tot op 0,1 mg nauwkeurig af in een maatkolf van 50 ml. Los op in methanol (R0183) en leng vervolgens aan tot de maatstreep. Deze oplossing is 4 weken houdbaar bij een temperatuur van 4 ± 4 C Oxytetracycline standaard stockoplossing, 200 µg/ml (W1838) Weeg, rekening houdend met de zuiverheid, 10 mg oxytetracycline (S0106) tot op 0,1 mg nauwkeurig af in een maatkolf van 50 ml. Los op in methanol (R0183) en leng vervolgens aan tot de maatstreep. Deze oplossing is 4 weken houdbaar bij een temperatuur van 4 ± 4 C Chloortetracycline standaard stockoplossing, 200 µg/ml (W1839) Weeg, rekening houdend met de zuiverheid, 10 mg chloortetracycline (S0107) tot op 0,1 mg nauwkeurig af in een maatkolf van 50 ml. Los op in methanol (R0183) en leng vervolgens aan tot de maatstreep. Deze oplossing is 4 weken houdbaar bij een temperatuur van 4 ± 4 C Mengsel van tetracyclines, standaard werkoplossing, 10 µg/ml (W2001) Pipetteer 1,0 ml van de standaard stockoplossing(en) van de te analyseren tetracycline(s) in een 20 ml maatkolf. Leng aan tot de maatstreep met verdunningsvloeistof (mobiele fase, W0043). Deze werkoplossing wordt bereid op de dag van de analyse. dierenvoeders v.02 6/9

7 9 Toestellen 9.1 Algemeen Een overzicht van gebruikte apparatuur wordt gegeven in LAB 25-L 21 APPARATUUR GEBRUIKT VOOR ANALYSEN FLVVT. 9.2 Specificaties voor deze methode De volgende condities worden als leidraad gegeven; andere parameters mogen worden gebruikt op voorwaarde dat vergelijkbare resultaten worden verkregen. HPLC-kolom: o Analytische kolom: Purospher RP-18e; 125 mm x 3 mm; 5 μm (LichroCart, Merck) of gelijkwaardig o Guard-kolom: overeenkomstig met analytische kolom (eventueel) Detector: UV op 360 nm Loopsnelheid: 0,8 ml/min Injectievolume: 20 µl 10 Werkwijze 10.1 Extractie Diervoeder Weeg 2 tot 50 g ± (0,1 g) van het monster af in een fles van 250 ml en voeg 100 ml zure methanol (W0698) toe. Sluit de fles af en schud gedurende 30 minuten. Centrifugeer en verdun indien nodig het extract met extractieoplossing (W0698) overeenkomstig de gebruikte standaard werkoplossing. Deze oplossing is klaar voor injectie in het HPLC-toestel Voormengsel/Premix Weeg 1 tot 5 g ± (0,1 g) van het monster af in een fles van 250 ml en voeg 100 ml zure methanol (W0698) toe. Schud gedurende 30 minuten. Verdun indien nodig het extract met extractieoplossing (W0698) overeenkomstig de gebruikte standaard werkoplossing. Deze oplossing is klaar voor injectie in het HPLC-toestel. dierenvoeders v.02 7/9

8 10.2 HPLC-bepaling Algemene richtlijnen m.b.t. het gebruik van het HPLC-systeem (opstart, injectieschema,..) worden weergegeven in LAB 25-P Kwaliteitscontrole Zie LAB 25-P Berekening en rapportering De berekening van de hoeveelheid tetracycline(s) wordt uitgevoerd door de software aan de hand van een standaardcurve (zie ook LAB 25-P 02). Het gehalte aan tetracycline(s) in mg/kg in het monster kan ook bepaald worden met behulp van onderstaande formule : waarbij : A = piekoppervlakte of -hoogte van de monsteroplossing B = piekoppervlakte of -hoogte van de standaardoplossing V = volume van het monsterextract in ml (rekening houdend met eventueel uitgevoerde verdunningen) m = massa van het monster in g C = concentratie van de standaardoplossing in µg/ml De rapportering en de resultaatvalidatie zijn beschreven in LAB 25-P 02. Enkel resultaten 2,5 mg/kg worden gerapporteerd. dierenvoeders v.02 8/9

9 13 Verwijzing naar bijhorende procedures, instructies, documenten, formulieren of lijsten LAB 25-D 18 LAB 25-L 18 LAB 25-L 21 LAB 25-L 22 LAB 25-P 02 LAB 25-P 07 LAB 25-F 62 WERKWIJZE TETRACYCLINES (HPLC) OVERZICHT WETGEVING FLVVT APPARATUUR GEBRUIKT VOOR ANALYSEN FLVVT OVERZICHT MEETONZEKERHEDEN FLVVT RESULTAATVALIDATIE HPLC-METHODEN COCCIDIOSTATICA EN GROEIBEVORDERENDE STOFFEN VEILIGHEIDSINSTRUCTIES FLVVT REGISTRATIE KOLOMMEN & CONTROLEKAART dierenvoeders v.02 9/9