Couperondzending februari De Wiest Bart 26 juni 2013 Onze Lieve Vrouw Ziekenhuis Aalst

Transcriptie

1 Couperondzending februari 2013 De Wiest Bart 26 juni 2013 Onze Lieve Vrouw Ziekenhuis Aalst

2 Couperondzending februari 2013 Deelnemers: 26 Antistoffen: EMA: n=25 p16: n=23 p63: n=25 β-hcg: n=15

3 Couperondzending februari 2013 Panel: Scoring 16/4/2013 (OLV Aalst) Onafhankelijk, in consensus 3 pathologen Dr C. Van den Broecke (AZ St-Lucas, Gent) Dr K. Wetzels (AZ St-Blasius, Dendermonde) Dr H. Woestenborghs (AZ Nikolaas, St-Niklaas)

4 Procedure panelbeoordeling Literatuurstudie mbt. antilichaam: NordiQC website, datasheets, wat moet / kan aankleuren? wat mag zeker niet aankleuren? Vastleggen criteria aankleuring per AS Beoordeling o consensus binnen het panel o reden voor afwijkend resultaat bij borderline/onvoldoende resultaat Scoreblad

5 Beoordelingscriteria Optimaal: perfecte aankleuring in elk weefsel Goed: voldoende aankleuring in elk weefsel maar wel minder goede signal-to-noise ratio actie : evt optimalisatie nodig Borderline: onvoldoende aankleuring in één van de weefsels (te zwakke, vals negatieve aankleuring) ; vals positieve aankleuring. actie : optimalisatie nodig Onvoldoende: slechte aankleuring in meerdere weefsels (vals negatieve / positieve aankleuring) actie : dringend optimalisatie nodig.

6 Protocol EMA Clone E29: DAKO (n=16): incubatietijd van VENTANA (n=9): incubatietijd van Format: RTU (n=21) Conc. (n=3) 1:200 en 1:500 Clone GP1.4 NEOMARKERS (n=1):incubatietijd van 32 1:1000

7 Protocol EMA Voorbehandeling: Geen: n=1 3 niet gespecifieerd HIER: DAKO: Hoge ph buffer: 30-68? (n=11) Lage ph buffer: n=1 Geconcentreerde vorm: 30 (n=1) LEICA: Hoge ph buffer: 30 (n=1) VENTANA: Hoge ph buffer» CC1 buffer: short 8 (n=1)» CC1 buffer: standard (n=5)» CC1 buffer: extended 120 (n=1)

8 Protocol EMA detectiekit: Peroxidase : polymeertechniek DAKO Envision/Flex Leica Refine Ventana UltraView Alk. Fosfatase: 1 deelnemer chromogeen DAB / Fast Red Incubatietijd: 10-20

9 Scoringscriteria EMA Membranair Tonsil / Appendix: Middelmatige tot sterke membranaire aankleuring van epitheliale cellen en plasmacellen. Geen aankleuring van bloed- en lymfevaten en andere lymfoïde cellen, zenuwvezels, spiercellen. Meningioom / Heldercellig nier Ca Pancreas: Lever: Minstens zwakke tot matige aankleuring van merendeel van neoplastische cellen Alle epitheliale cellen. Galwegen positief, rest: negatief.

10 Antistof EMA: appendix Optimaal Borderline/Onvoldoende

11 Antistof EMA: pancreas Optimaal Borderline/Onvoldoende

12 Resultaatbespreking EMA EMA (appendix - pancreas - tonsil - lever - herldercellig niercelca - meningioom) Referentiecoupe Eigen controlecoupe Eindbeoordeling Opmerkingen panel (optimaal / goed / borderline / S A M S A M onvoldoende) Labo Optimaal Labo Optimaal iets zwakker dan andere Labo Optimaal Labo Optimaal Labo Optimaal Labo Optimaal Labo Optimaal meningioom zwakker dan DAB kleuring Labo Goed achtergrond + Labo Goed Mag sterker Meningioom en NierCa OK ; appendix Goed Labo 010 zwak? Verdunning? Tech. Probeem? Labo Goed Mag sterker Labo Goed eigen controle OK; multiblok zwakker Labo Optimaal lever achtergrond ++ ; Goed Labo 014 spoelprobleem(dab residu)? Labo Goed Mag sterker Labo 016 Labo Optimaal Labo Optimaal Labo Goed Mag sterker Labo Optimaal Meningioom en NierCa OK ; multiblok -? ? Suboptimaal Labo 021 Technisch probleem (2 zones?) Labo 022 Labo Borderline tonsil veel te zwak ; verdunning? Labo Optimaal ongelijkmatige aankleuring, tech Goed Labo 025 probleem? Eigen controle OK Labo Goed Mag sterker ; montering niet OK Labo Optimaal

13 Resultaatbespreking EMA Algemeen N=25 NQC 2010 n % suff % suff optimaal % 62 % goed 9 36 % 92 % 32% 94 % Borderline 1 4 % suboptimaal 1 4 %

14 Resultaatbespreking EMA Opgesplitst per clone N=25 DAKO E29 % suff VENTANA E29 % suff NEOMARKERS GP1.4 n=16 n=8 n=1 % suff optimaal % 3 37,5% 0 goed 3 19 % 5 62,5% 1 - borderline 1 6% suboptimaal 1 6% 0 0 Totaal suff 88% 100% - NQC % 87% -

15 Resultaatbespreking EMA Invloed format AS RTU: geen merkbare invloed Conc. AS: zorgvuldig titreren Invloed incubatietijd DAKO clone: meest optimale resultaten bij 20 inc. kortere incubatietijden: meestal minder optimaal Ventana clone: meest optimale resultaten bij inc. langere incubatietijd: geen beter resultaat

16 Resultaatbespreking EMA Invloed HIER type voorbehandeling: geen invloed ph: enkel hoge ph buffer gebruikt Geen voorbehandeling: goed, maar geen optimaal resultaat

17 Resultaatbespreking EMA Besluit: Suff. ~92% (AEC ook optimaal) DAKO clone: Meer optimale resultaten Conc. AS: correcte titer bepaling (plasmacel tonsil te zwak) Neomarkers clone: Conc. AS: correcte titer bepaling (plasmacel tonsil te zwak) Ventana clone: Minder optimale resultaten, maar meer suff. resultaten Algemeen zwakkere aankleuring meningioom, tonsil Evt. protocol aanpassen om kleuring sterker te maken

18 Antistof EMA meningioom DAKO E29 VENTANA E29

19 Protocol p16 Gebruikte clones: BD G (n=1) 1:10 Incubatietijd: 30 Immunologic JC8 (n=1) 1:400 Incubatietijd: 28 SantaCruz JC8 (n=2) 1:50-1:100 Incubatietijd: VENTANA E6H4 (n=18) RTU Incubatietijd: deelnemers: RTU ½ tot ¼ verdunning

20 Protocol p16 Voorbehandeling: Geen: n=1 HIER: Leica: high ph ~9 n=2 DAKO: Hoge ph buffer: n=4 Lage ph buffer: n=4 VENTANA: hoge ph buffer CC1 buffer: short (n=2) CC1 buffer: mild (n=5) CC1 buffer: standard (n=5)

21 Protocol p16 detectiekit: Peroxidase : polymeertechniek DAKO Envision/Flex Leica Refine Ventana UltraView Alk. Fosfatase: 1 deelnemer chromogeen: DAB / Fast Red Incubatietijd: 10-20

22 Antistof p16 Scoringscriteria: Cytoplasmatische- en kernaankleuring Tonsil: Cytoplasmatische- en kernaankleuring van de squameuse epitheliale cellen en macrofagen: middelmatig tot sterk. Matige aankleuring van folliculaire denditrische cellen Normaal cervicaal epitheel HSIL: Geen aankleuring van oppervlakkige squameuse epitheliale cellen Middelmatige tot sterke aankleuring van bijna alle neoplastische cellen Cave NordiQC: fibroblasten en columnair epitheel mag zwak aankleuren

23 Antistof p16: HSIL Optimaal Borderline/Onvoldoende

24 Antistof p16: tonsil Optimaal Borderline/Onvoldoende

25 Resultaatbespreking p16 p16 (tonsil - CIN3 - normale cervix) Referentiecoupe Eigen controlecoupe Eindbeoordeling Opmerkingen panel (optimaal / goed / borderline / S A M S A M onvoldoende) Labo Goed Multiblok kan sterker Labo Goed Lichte achtergrond Labo Optimaal capillairen kleuren aan in eigen coupe Labo geen beoordeling HSIL omgeplooid ; tonsil OK Labo Optimaal Labo Optimaal Tonsil zwak Labo 007 Labo Goed endotheel + ; basale membraan + Labo Goed denditrische cellen -! Labo Optimaal Labo Optimaal eigen controle kleurt wel zwakker Labo Goed kiemcentra tonsil: te zwak Labo Goed kiemcentra tonsil: te zwak ; endotheel licht + Labo Borderline Stroma ++ ; EndoCx + Labo Goed Mag sterker Labo 016 Labo Goed EndoCx + Labo Goed endotheel + ; cervix achtergrond Labo Optimaal Labo Goed Labo Goed kiemcentra tonsil: te zwak Labo Optimaal Labo 023 Labo Goed Tonsil veel te zwak Labo 025 Labo Goed Tonsil te zwak ; HSIL mag sterker Labo Goed endotheel + ; basale membraan +

26 Resultaatbespreking p16 Algemeen n=23 1 geen beoordeling, lijkt OK (HSIL omgeplooid) N=22 NQC 2009 n % suff % suff optimaal 7 32% 44% goed 14 63,5 % 95,5 % 46% 90 % Borderline 1 4,5 % 8% Onvoldoende 0 0 %

27 Resultaatbespreking p16 Opgesplitst per clone n=22 S Cruz/IL JC8 % suff VENTANA MTM E6H4 % suff Bect. Dick. G n=4 n=17 n=1 % suff optimaal 3 (SCr) 100 % 6 35% 0 goed 1 (IL) % 1 - borderline % 0 Totaal suff 100% 94% - NQC % 100% 67%

28 Resultaatbespreking p16 Invloed HIER: Hoge/lage ph: geen invloed Tijdsduur: weinig/geen invloed Geen voorbehandeling: borderline resultaat cf. NQC: HIER is mandatory to obtain an optimal result.

29 Resultaatbespreking p16 Besluit: Suff. ~95,5% Clone Type niet bepalend voor suff. resultaat. Opm. clone G : NQC slechts 67% suff Clone E6H4 (RTU) verdunnen: Resultaat zakt naar goed/borderline Verd. ½ OK ; verd. ¼ geeft oa. aankleuring endotheel, stroma, NQC: ½ tot 1/10 optimaal: invloed detectiekit, stainer platform? Finetuning?

30 Protocol p63 Gebruikte clones: BC4A4 Biocare / Klinipath (n=5) 1:100-1:150 Incubatietijd: A4 Dako /Immunologic / Ventana (n=17) RTU of conc. (1:100-1:150) Incubatietijd: A4/Y4A3 bio SB (n=1) 1:100 Incubatietijd: 15 7JUL Leica (n=1) 1:40 Incubatietijd: 60

31 Protocol p63 Voorbehandeling: Geen: n=1 HIER: Leica: high ph ~9 n=2 (20-30 ) DAKO: Hoge ph buffer: n=10 Lage ph buffer: n=1 VENTANA: hoge ph buffer CC1 buffer: short (n=1) CC1 buffer: mild (n=2) CC1 buffer: standard (n=5) CC1 buffer: extended (n=1)

32 Protocol p63 detectiekit: Peroxidase : polymeertechniek DAKO Envision/Flex Leica Refine Ventana UltraView Alk. Fosfatase: n=2 chromogeen: DAB / Fast Red Incubatietijd: DAB: 8-20 AEC: Versterking: amplifier / linker (n=6)

33 Antistof p63 Scoringscriteria: Kernaankleuring Tonsil: Kernaankleuring van de squameuse epitheliale cellen: middelmatig tot sterk. Minstens zwakke aankleuring van lymfocyten Prostaat: Borst: Aankleuring van basale cellaag, luminale cellen negatief Middelmatige tot sterke aankleuring van myoepitheliale cellen Cave NordiQC: geen of max. een zwakke cytoplasmatische aankleuring is toegestaan (oa. spiercellen)

34 Resultaatbespreking p63 p63 (tonsil - ductaal borst Ca - prostaat) Referentiecoupe Eigen controlecoupe Eindbeoordeling Opmerkingen panel (optimaal / goed / borderline / S A M S A M onvoldoende) Labo Optimaal Labo Optimaal multiblok kan iets sterker; eigen Optimaal Labo 003 controle OK Labo Optimaal (zwakke tegenkleuring) Labo geen beoordeling p40 ipv p63: interpretatie? Labo Optimaal Mag sterker Labo Optimaal Labo Goed achtergrond in alle punches! Labo Optimaal Labo Borderline Labo Optimaal Labo Optimaal (zwakke tegenkleuring) Labo Optimaal (zwakke tegenkleuring) Labo Borderline Algemeen te zwak: optimalisatie nodig Tonsil, borstca veel te zwak: Borderline Labo 015 optimalisatie nodig Labo 016 Labo Optimaal Labo Optimaal Labo Goed Mag sterker Labo Optimaal Labo Optimaal Labo Optimaal Labo Onvoldoende tonsil vals negatief Labo (dik) Onvoldoende Tonsil +- ; borstca zwak ; Prostaat - Labo 025 Labo Optimaal Labo Optimaal

35 Antistof p63: tonsil Optimaal Borderline/Onvoldoende

36 Antistof p63: prostaat Optimaal Borderline/Onvoldoende

37 Antistof p63: prostaat Optimaal Borderline/Onvoldoende

38 Resultaatbespreking p63 Algemeen n=25 1 deelnemer: clone p40 geen beoordeling (ander aankleuringspatroon in tonsil, ) Suff. 75% N=24 NQC 2009 n % suff % suff optimaal 16 67% 38% goed 2 8 % 75% 57% 95 % Borderline 3 13% 5% Onvoldoende 2 8 %

39 Resultaatbespreking p63 Opgesplitst per clone format/producent Concentrated: suff 60% n=7 IL 4A4 % suff Biocare 4A4 % suff 4A4+ Y4A3 % suff 7JUL % suff n=3 n=2 n=1 n=1 optimaal 2 66,5 % goed borderline onvoldoende 1 33,5% Totaal suff 66% 50% - - NQC 2009 Geen data 2 goed / 1 borderline

40 Resultaatbespreking p63 Opgesplitst per clone format/producent RTU: suff 94% n=16 DAKO 4A4 % suff VENTANA 4A4 % suff n=3 n=13 optimaal 2 66,5% 11 85% goed 1 33,5% 1 7,5% borderline 0 1 7,5% onvoldoende 0 0 Totaal suff 100% 92% NQC 2009 (enkel Ventana data) - 67%

41 Resultaatbespreking p63 Clone BC4A4 Biocare (conc.) Resultaat optimaal - borderline 4A4+Y4A3 Zelfde lot, verdunning 1:100, inc.tijd en stainer ph en DAB-tijd verschillend Quid? NQC 2009: 2 goed / 1 borderline Borderline resultaat (titer, HIER, gevoeligheid detectiekit,?) NQC 2009 (n=11) suff.:100% Optimalisatie protocol 7JUL Borderline resultaat (titer, HIER, gevoeligheid detectiekit,?) NQC 2009 (n=4) suff.:geen data

42 Resultaatbespreking p63 Besluit: Invloed format AS RTU: meeste protocols OK Conc.: 40% borderline/onvoldoende (te zwak/vals negatief) Optimalisatie nodig NQC BC4A4=OK ; 7JUL +- Invloed HIER: Type buffer speelt weinig/geen rol. Geen voorbehandeling: borderline (n=1) p40: nieuwe merker

43 Protocol β-hcg Gebruikte clones: polyclonaal n=15 RTU: n=14 DAKO (n=9): incubatietijd AS Ventana (n=5): incubatietijd AS Conc.: n=1 DAKO 1:10 Incubatietijd AS 15

44 Protocol β-hcg Voorbehandeling: Geen: n=1 HIER: Geen: n=1 (Conc. AS) DAKO: Hoge ph buffer: n=8 Lage ph buffer: n=1 VENTANA: hoge ph buffer CC1 buffer: mild (n=3): CC1 buffer: standard (n=1) CC1 buffer: extended (n=1)

45 Protocol β-hcg Detectiekit: Peroxidase : polymeertechniek DAKO Envision/Flex (n=8) Leica Refine (n=1) Ventana UltraView (n=4) Alk. Fosfatase: DAKO: n=1 Ventana UltraView: n=1 Chromogeen: DAB / Fast Red Incubatietijd: DAB: 8-20 AEC: 16-25

46 Antistof β-hcg Scoringscriteria: Cytoplasmatische aankleuring Placenta: Sterke, distincte aankleuring van normale trofoblastische cellen Seminoom: Negatieve of max. zwakke aankleuring van neoplastische cellen Sterke, distincte aankleuring van synciotiotrofoblastische cellen Cave NordiQC: Middelmatige tot sterke niet-specifieke aankleuring van neoplastische cellen van het seminoom en het stroma van de placenta is niet toegestaan (een lichte achtergrond wordt aanvaard)

47 Antistof β-hcg beta-hcg (schildklier - placenta - prostaat - long - seminoom) Referentiecoupe Eigen controlecoupe Eindbeoordeling Opmerkingen panel (optimaal / goed / S A M S A M borderline / onvoldoende) Labo 001 Labo 002 Labo Optimaal eigen controle "goed" Labo Optimaal Labo Goed zwakkere zones? Tech. Probleem? Labo 006 Labo Borderline stroma ++ ; seminoom ++ Labo 008 Labo Onvoldoende long: macrofagen+stroma+spier+ ; seminoom ++ ; placenta: stroma+ Labo 010 Labo Onvoldoende spier + ; seminoom ++ ; placenta: stroma++ Labo 012 Labo Onvoldoende spier + ; seminoom ++ ; placenta: stroma++ Labo Onvoldoende placenta veel te zwak ; vals - Labo 015 Labo 016 Labo Optimaal Labo Optimaal Labo Borderline seminoom + ; placenta: stroma+ Labo 020 Labo Borderline placenta vals neg ; seminoom ++ ; tech. probleem (zones?)? Labo 022 Labo 023 Labo Borderline placenta veel te zwak ; eigen controle variatie Labo Goed kleuring OK; ongelijkmatig. Eigen controle OK Labo 026 Labo Optimaal

48 Antistof β-hcg: placenta Optimaal Borderline/Onvoldoende

49 Antistof β-hcg: seminoom Optimaal Borderline/Onvoldoende

50 Resultaatbespreking β-hcg Algemeen n=14 N=14 NQC 2004 n % suff % suff optimaal 5 36 % 39 % goed 2 14 % 50 % 28 % 67 % borderline 4 29 % 23 % onvoldoende 3 21% 10 %

51 Resultaatbespreking β-hcg Besluit: Invloed format AS RTU: suff. 47% Conc.: geen suff. (n=1) Invloed HIER: Enkel bij hoge ph protocol suff. Lage ph (n=1): borderline (korte inc. tijd 10 ) Geen voorbehandeling: onvoldoende (n=1) NordiQC : A buffer at ph 8-9 is suitable for almost all epitopes. Still, however, HIER is carried out at ph 6 in most laboratories! In our experience, an increase in ph from 6 to 9 gives a four fold staining enhancement on the average.

52 Resultaatbespreking β-hcg Besluit: Zeer laag aantal suff. (50%) Conc. AS (n=1): onvoldoende RTU: slechts 54% suff. 30% borderline resultaat ; 15% onvoldoende Invloed clone DAKO: suff. 70% (n=7) ; borderline n=2 ; onvoldoende n=1 Ventana: suff. geen ; borderline n=2 ; onvoldoende n=3

53 Resultaatbespreking besluit SUFFICIENT 2013 NQC EMA 92 % 94 % 2010 p16 95 % 95 % 2009 p63 75 % 95 % 2009 β-hcg 50 % 67 % 2004

54 Couperondzending vervolg Planning 2013 Rondzending coupes 9/2013 Beoordeling panel 11/2013 Presentatie resultaten 12/2013 AS: AMACR / P504S / Racemase CK5/6 CD117/c-Kit PSA

55 Couperondzending vervolg Opmerkingen deelnemers Voldoende plaats voor eigen controle Volledig invullen AS formulieren HIER: totale tijd ; steeds invullen (ook indien niet van toepassing) NBF-Fixatietijd, -duur eigen controle (indien gekend) Extra stappen bij opmerkingen noteren (biotine block, ) Eigen beoordeling kleuring: indien een punch zoals verwacht niet mag aankleuren: dit is een specifieke reactie, dus score 3 geven Tijdstip aanmaak coupes + strektijd? Mailverkeer: labo nr in onderwerp vermelden aub

56 Couperondzending februari 2013 Vragen?