Op weg naar optimale HER2 testing in Nederland? Dr. V.T.H.B.M. Smit Patholoog, LUMC

Transcriptie

1 Op weg naar optimale HER2 testing in Nederland? Dr. V.T.H.B.M. Smit Patholoog, LUMC

2 Outline Introductie HER2/Neu Oorzaken van variatie in HER2 testing (E)QA SKML (spiegelinformatie) 2012: twee rondzendingen NordiQC (extern oordeel) 2012 twee rondzendingen Conclusies ( Take-home messages)

3 Hanahan and Weinberg, Cell (2011) 144:646

4

5

6 HER2 testing in NL Mammacarcinoom (sinds 2005) Biopten/resecties Maagcarcinomen (sinds 2009, beperkt, stadium IV, palliatie)

7 HER2 gene amplification HER2 mrna over-replication + selection of cells with growth advantage HER2 protein normal amount HER2 mrna HER2 protein elevated amount

8 HER2 gene amplification

9

10 Overall survival stratified by Trastuzumab HR - HR + Dawood S et al. JCO 2010;28: by American Society of Clinical Oncology

11 Belang juiste HER2 status Een fout-positieve uitslag kan leiden tot een onnodige (dure) therapie met alleen bijwerkingen Bij een fout-negatieve uitslag wordt de patiënt een potentieel gunstige therapie onthouden Testmethode? IHC FISH, BRISH, SISH, CISH MLPA

12 HER2-IHC in Breast cancer IHC 0 (no staining or staining in <10% of tumor cells, negative), IHC 1+ (faint/barely perceptible incomplete membrane staining in >10% of tumor cells, negative), IHC 2+ (weak to moderate complete membrane staining in >10% of tumor cells, equivocal) IHC 3+ (strong complete membrane staining in >10% (until 2007) or >30% (2007 now) of tumor cells

13 Magnification rule according to IHC intensity score (vd Vijver rule ) Microscope magnification (~ distance) needed to demonstrate distinct (i.e complete strong) intercellular membranous staining Score Magnification: x-fold 2.5x 5x 10x 20x 20x 40x 40x Intensity Strong (no magnification) Weak to moderate Barely visible Negative

14 HER2 testing in Breast cancer (ISH-mono).. Small cluster of large spot? Her2 (normal) Her2 (amplified, 6-10) Her2 (equivocal, 3-5) Her2 (amplified >10)

15 HER2 testing in Breast cancer (ISH-duo) Her2 (normal, <1.8) Her2 (amplified, >2.2) Her2 (equivocal, ) Her2 (amplified >2.2)

16 FISH in Breast cancer Testing was traditionally mostly done by FISH. For FISH assessments, an HER2:CEP17 (centromeric probe 17) ratio. Amplification: >2.2 is now used ( 2.0 before 2007). Equivocal: Negative: <1.8

17 Examples of cases

18 (>94%) Am J Clin Pathol 2009;132:

19 What % of HER2 amplified cases can be expected? none <1% 0 (negative) 1+ (negative) >?? >95% 2+ (equivocal) 3+ (positive)

20 CISH results of 533 IHC 2+ breast cancers 100 % of total patient population ,6 5,1 7,4 21,3% 13,9 < >10 spots per nucleus J.Clin. Pathol, 2011

21 Algorithm of HER2 testing

22 Oorzaken van variatie in Her2 testing Tissue-fixation Antibodies/CISH/FISH Scoringsystem Interobserver variability

23

24 Interobserver variabiliteit IHC

25

26 Training -program

27 Training -program

28 Her2 testing (IHC and FISH/CISH) 0,7% 21% >94-98% Retest with C/SISH/FISH

29 Oorzaken van variatie in HER2 testing Interpretation criteria Use of image analysis Reporting elements Scoring system Post-analytic Time to slicing and fixation HER2-testing variation Type of tissue Pre-analytic Method of tissue processing Time of fixation Type/volume of fixation Assay validation Assay conditions Controls Analytic Laboratory procedures Equipment calibration Test reagents Type of antigen retrieval Staff competence Wolff et al 2007

30 Type of Tissue Biopsy of primary tumor Standardized fixation time (6-48h) Large volume/tissue Neo-adjuvant therapy (NAT) Pittfals Retraction/crush-artefact bij IHC Tumorheterogeneity Resection-material (WLE/ablatio) ASCO guidelines (HER2; resections) Biopsy of metastasis ( receptor-conversion )

31 94% CNB versus Resection-specimen

32 Receptor conversion after NAT Biopsy and resection A review of the literature (PubMed search) 32 relevant studies Hormone receptor status conversion 8-33% HER2 expression (IHC 3+) switch up to 9-43%

33 Extern Quality Assessment HER2 testing SKML spiegel-informatie Qbase zelf scoren, zelf invoeren 2 rondzendingen per jaar NordiQC extern oordeel (optimal, good, borderline, poor) 2 rondzendingen per jaar (sponsorship Roche)

34 SKML (1 ste ) HER2 IHC en ISH (n=41/35) Punch IHC ISH 1 (Lever) - - 2/3 0/1+ neg 4/5/6 2+/2+/2+ neg/pos/pos 7/8 3+/3+ pos/pos

35 IHC-Items die gescoord dienen te worden relevant HER2?? (1 ste rondzending) Àankleuring Tumor, lymfocyten, plasmacellen, stromacellen, epitheel, endotheel, gladde spiercellen, etc Onderdeel van de cel Kern, cytoplasma, kern en cytoplasma, membraan, dot/golgi, luminaal oppervlak, etc Sterkte van de kleuring (-, +,++) Geschatte tumorcellen positief 1-25%, 25-50%, 50-75, %. NVT Voldoet de kleuring aan uw eisen Ja, te zwak, teveel achtergrond

36 SKML HER2 IHC (n=41)

37 SKML HER2 IHC (n=41)

38 SKML HER2 IHC (n=41)

39 SKML Results IHC (N=41) 1 : lever 2 en 3 : score , 5, 6 : score en 8 : 100% concordant

40 IHC-Items die gescoord dienen te worden relevant HER2 (2de rondzending) Sterkte van de aankleuring 0, +, ++, +++ Voldoet de kleuring aan uw eisen Ja, te zwak, teveel achtergrond Percentage positieve tumorcellen Negatief 1-9% 10-29% >30% NVT

41 SKML HER2 IHC 2 de rondzending n=39) Punch

42 SKML HER2 IHC 2 de rondzending n=39) Punch 5 (ampl) 6 (ampl) 7 (ampl) 8 (ampl)

43 Op welke casus wilt u op basis van de IHC een ISH doen? (N=39)

44 ISH- Items die gescoord dienen te worden relevant HER2?? Is de HER2/Neu DNA test te beoordelen? Ja, geen signaal, artefact, NVT Aantal getelde celkernen <20, 21-40, , , NVT Weefsel positief beoordeeld voor amplificatie Positief, negatief, geen routine ISH, NTB, NVT Score per weefsel van de HER2, amplificatie Kopie per kern <4, kopie/kern 4-5, 5-6, >6, Her2/Chr17 <1.8, , >2.2, Her2/ref <1.5, Her2/ref Trastuzumab behandeling? Ja Her2 ampl., ja ampl. en Her2-IHC ++/+++, nee geen ampl/ihc positief, nee, geen ampl., nee, IHC negatief, NTB, anders

45 HER2-ISH (n=35)

46 HER2-ISH (n=35)

47 HER2-ISH, Punches 5 t/m 8

48 HER2-ISH, Punches 5 t/m 8 6 casus ISH onjuist 2 patienten ten onrechte Trastuzumab 3 patienten ten onrechte GEEN Trastuzumab (1 patient foutieve ISH maar negatieve IHC) 35 x 7 = 245 patienten 2%

49 NordiQC-EQA/Roche Taakgroep Moleculaire diagnostiek (QC) Twee rondzendingen per jaar (2009/2013) Deelname gratis (ook in 2013!!) Onafhankelijk

50 NordiQC/Roche B8-B14 Deelname van 136/201/236 labs (worldwide) 50 laboratoria uit Nederland (NL) 36 labs IHC, B8 (75%) 40 labs IHC, B9 (80%) 41 labs IHC, B10 (80%) 39 labs IHC, B14 (80%) ISH (NL) 28 labs, CISH, B14 9 labs, FISH, B14

51

52 Evaluation

53 Overall results HER2 (n=263 labs)

54 Pass-rate laboratories (n=263,79%) 68-95%

55 Dutch-results (IHC, B14) HER-2 IHC Dutch participants 49 No protocols 7 No slides returned 3 Participated in B14 39 Optimal 28 Good 4 Borderline 2 Poor 5

56 Dutch-results (IHC, B14) Sufficient 32/39 82% Insufficient 7/39 18% Scoring consensus 28/37 76% Among sufficient 26/30 87% Among insufficient 2/7 29% System used by insufficient Herceptest 3 Home-brew SP3 4

57 NordiQC FISH/SISH (n=118 laboratories)

58 NordiQC FISH/SISH (n=118 laboratories)

59 NordiQC FISH/SISH (amplification) IHC 0, ratio IHC 3+, ratio IHC 1+, ratio IHC 2+, ratio IHC 2+, ratio

60 Dutch-results (ISH) BRISH 18 Sufficient 17/18 94% Consensus 15/18 83% FISH 9 Sufficient 6/9 66% Consenus 7/9 77%

61 Conclusies ( Take-home -messages!) HER2 testing (IHC) in NL blijft suboptimaal (80%)!! 10 jaar bezig met HER2 testing NL! (casus pars pro-toto) FDA-approved kits beter dan in-house systems Deelname aan EQA verbetert de kwaliteit SKML rondzendingen geven spiegelinformatie maar geen oordeel EQA (NordiQC ook voor 2013 gecontinueerd (sponsor Roche) (Resultaten ER/PR ook voor verbetering vatbaar (87%)) Nog geen 100% participatie

62 Conclusies ( Take-home -messages!) Tijdperk van vrijblijvendheid lijkt voorbij 1. Verplichte deelname rondzendingen essentieel 2. Volume discussie voor moleculaire testen? 3. Netwerk van laboratoria moleculaire testing (10-15 in NL?) gele kaarten in EQA is rood? Acknowledgements - M.J. vd Vijver (AMC) - J. Wesseling (AvL) - M. Vyberg (NordiQC) - S. Rotteveel (Roche) - I. Stuij (SKML)