Resultaten EKE IHC 2016/1. De Wiest Bart 31 mei 2016 OLV Ziekenhuis Aalst

Transcriptie

1

2 Resultaten EKE IHC 2016/1 De Wiest Bart 31 mei 2016 OLV Ziekenhuis Aalst

3 EKE IHC 2016/1 Samenwerking met WIV: nationaal EKE Verplichte deelname voor elk erkend labo 81 labo s erkend voor IHC Vlaams gewest: 46 deelnemers Brussels gewest: 11 deelnemers Waals gewest: 18 deelnemers 2 firma EQA labs (Roche, Dako) Antistoffen: CK7: n=75 VIM: n=70

4 EKE IHC 2016/1 Opzet en structuur OLV zorgt voor selectie AS, aanmaak paraffineblokken, snijden coupes, homogeniteitstest WIV zorgt voor logistiek, inscannen glaasjes, verspreiden individueel en opmaak globaal rapport Presentatie resultaten / netwerking

5 EKE IHC 2016/1 Panel Scoring 22/03/2016 (AZ St-Jan, Brugge) Onafhankelijk, in consensus 3 pathologen Dr. L. Van Walleghem (AZ St-Jan, Brugge) Dr. I. Dalle (AZ St-Lucas, Brugge) Dr. A.M. Dierick (WIV)

6 Procedure panelbeoordeling Literatuurstudie m.b.t. antilichaam: NordiQC website, datasheets, Wat moet / kan aankleuren? Wat mag zeker niet aankleuren? Vastleggen criteria aankleuring per AS Beoordeling Consensus binnen het panel Reden voor afwijkend resultaat bij borderline/onvoldoende Scorebladen

7 Beoordelingscriteria Optimaal: perfecte aankleuring in elk weefsel Goed: voldoende aankleuring in elk weefsel maar wel minder goede intensiteit en/of signal-to-noise ratio actie: evt. optimalisatie nodig Borderline: algemeen te zwak ; onvoldoende aankleuring in één van de weefsels (vals negatieve aankleuring ; vals positieve aankleuring) actie: optimalisatie nodig Onvoldoende: slechte aankleuring in meerdere weefsels (vals negatieve/positieve aankleuring) actie: dringend optimalisatie nodig

8 Protocol CK7 clones n= 75 (73 labo + 2 firma) Clone OVTL 12/30: n=47 Concentrated: n=14 Dako: n=7 Thermo/Neomarkers: n=3 Biogenex: n=2 Leica/Novocastra: n=2 RTU: n=32 Dako: n=30 Klinipath: n=1 1 onbekend RTU en verder verdund: n =1 Thermo/Neomarkers Clone SP52 : n=23 Clone RN7 : n=3

9 Protocol CK7 clones Clone OVTL 12/30 Dako conc. Incubatietijd en verdunning: Dako stainer: geen Roche stainer: 1/50-1/100-1/200 (+amp) - 1/800 (+amp) ; inc. Leica stainer: 1/1000 (RT) ; 15 inc. Clone OVTL 12/30 andere conc. Biogenex: beiden 1/200 ; inc. Leica/NCL: 1/ inc. ; 1/ inc. Thermo/Neomarkers: Roche stainer: 1/ inc. ; 1/ inc. Immunologic Autostainer: 1/ inc.

10 Protocol CK7 clones Clone OVTL 12/30 Dako RTU Dako Omnis 8-12,5 inc. 5/6 incuberen bij 32 C Dako Autostainer 17/22 inc. tijd 20 RT Manueel 30 inc. RT Clone OVTL 12/30 Klinipath RTU Ventana XT i-view detectiekit 16 inc. 36 C Clone OVTL 12/30 RTU verdund Ventana GX (UV): 32 inc. bij 36 C

11 Protocol CK7 clones Clone OVTL RTU Clone SP52 RTU: n=23 Ventana/Cell Marque: n=22 UV: inc. (XT) ; (Ultra) UV Datasheet XT: 16 inc. -> 4/9 ; >16 inc. ook goed-optimaal UV datasheet Ultra: 20 inc. -> 4/12 ; <20 inc. ook optimaal 16% incuberen bij RT ipv bij 36 C OV: beiden 12 RT bij 36 C (Ultra) ; datasheet niet gekend Leica/Novocastra: n=1 UV: 28 inc. Clone RN7 RTU: n=3 Leica platform: n= inc.

12 Protocol CK7 voorbehandeling Clone OVTL 12/30 concentrated: Geen: n=2 HIER: n=7 Roche platform: hoge ph: CC Leica ph9: Autostainer ph6 20 Enzym (n=4): Protease 1: 4-8 Combinatie enzym+hier (n=1): Roche platform: P3 4 + HIER CC1 30 RTU: RTU en verder verdund :

13 Protocol CK7 voorbehandeling Clone OVTL12/30 conc. Clone OVTL 12/30: RTU: Geen: n=0 HIER (n=30): manueel (n=1): 20 heating time ph9 (totale tijd?) Dako platform: ph9 (Omnis 30 - Autostainer ) = datasheet Roche platform: CC1 60 Enzym (n=3) : Roche platform: P1 8 RTU en verder verdund 1/2: Thermo/Neomarkers: n=1 Roche platform: CC1 30

14 Protocol CK7 voorbehandeling Clone OVTL12/30 Clone SP52 (RTU): Ventana/Cell Marque: n=22 Geen: n=1 1 onbekend UV: 8-90 CC1 (UV Datasheet: 60 CC1) OV: CC1 (Ultra) Leica/Novocastra: n=1 UV: 46 CC1 Clone RN7: RTU Leica platform: HIER ph6: n= (=datasheet)

15 Scoringscriteria CK7 Aankleuringspatroon: cytoplasmatisch long: alveolair epitheel sterk positief (hoge expressor) pancreas: epitheel grote ducti sterk positief (hoge expressor) meerderheid epitheel tussenliggende ducti zwak/matig positief (lage expressor) nier: epitheel collecting ducti en verspreide epitheliale cellen van Bowman kapsel: matig/sterk positief epitheliale cellen in proximale tubuli: negatief maagcorpus mucosa: luminale foveolaire epitheliale cellen minstens zwak positief andere cellen: negatief long NSLC: minstens zwak/matig (wisselend) positief (lage expressor) long AdCa: matig/sterk positief (hoge expressor) colon AdCa: neoplastische cellen zwak positief (controle specificiteit)

16 Resultaatbespreking CK7 Labo CK7 / EINDBEOORDELING Labo CK7 / EINDBEOORDELING Labo CK7 / EINDBEOORDELING QML004 Optimaal QML099 Optimaal QML213 Borderline QML006 Goed QML100 Optimaal QML214 Onvoldoende QML007 Optimaal QML102 Goed QML217 Goed QML010 Optimaal QML113 Optimaal QML220 Optimaal QML012 Optimaal QML120 Optimaal QML227 Goed QML014 Optimaal QML124 Optimaal QML230 Goed QML015 Optimaal QML129 Optimaal QML241 Optimaal QML017 Optimaal QML133 Optimaal QML244 Optimaal QML020 Optimaal QML135 Geen beoordeling mogelijk QML245 Goed QML028 Goed QML142 Optimaal QML250 Optimaal QML032 Borderline QML145 Optimaal QML252 Optimaal QML037 Optimaal QML149 Onvoldoende QML255 Optimaal QML044 Goed QML152 Optimaal QML260 Optimaal QML048 Optimaal QML155 Optimaal QML261 Goed QML051 Optimaal QML160 Optimaal QML263 Optimaal QML058 Optimaal QML163 Optimaal QML264 Optimaal QML062 Goed QML164 Optimaal QML269 Optimaal QML066 Optimaal QML168 Optimaal QML270 Optimaal QML072 Optimaal QML175 Optimaal QML275 Borderline QML080 Goed QML185 Optimaal QML286 Goed QML081 Goed QML188 Optimaal QML293 Optimaal QML083 Optimaal QML191 Optimaal QML298 Optimaal QML089 Optimaal QML193 Goed QML300 Goed QML090 Optimaal QML201 Optimaal QML093 Goed QML207 Goed QML098 Goed QML212 Optimaal

17 Antistof CK7: overzicht Optimaal Onvoldoende Pancreas Colon AdCa Maag Long AdCa Long NSLC Long Nier

18 Antistof CK7: long Optimaal Onvoldoende Biogenex OVTL12/30 ; 1/ ; Protease1 4 ; iview Ventana BMK XT Leica OVTL12/30 1/ RT; geen pretreat ; Leica Bond Max Sterke expressor

19 Antistof CK7: pancreas Optimaal Onvoldoende Biogenex OVTL12/30 ; 1/ ; Protease1 4 ; iview Ventana BMK XT Leica OVTL12/30 1/ RT; geen pretreat ; Leica Bond Max Sterke expressor

20 Antistof CK7: nier Ventana JC70 RTU 32 CC1 60 Ventana stainer UV Biogenex OVTL12/30 ; 1/ ; Protease1 4 ; iview Ventana BMK XT Leica OVTL12/30 1/ RT; geen pretreat ; Leica Bond Max Optimaal Onvoldoende

21 Antistof CK7: long NSLC Biogenex OVTL12/30 ; 1/ ; Protease1 4 ; iview Ventana BMK XT Leica OVTL12/30 1/ RT; geen pretreat ; Leica Bond Max Zwakke expressor Optimaal Onvoldoende

22 Antistof CK7: maag Biogenex OVTL12/30 ; 1/ ; Protease1 4 ; iview Ventana BMK XT Leica OVTL12/30 1/ RT; geen pretreat ; Leica Bond Max Optimaal Zwakke expressor Onvoldoende

23 Antistof CK7 Leica RN7 RTU 15 RT; ph6 20 ; Leica Bond Max datasheet Optimaal Leica RN7 RTU 15 RT; ph6 10 ; Leica Bond Max Onvoldoende

24 Antistof CK7 Dako OVTL12/30 ; 1/50 24 ; Protease1 8 ; iview Ventana BMK GX Dako OVTL12/30 ; 1/50 32 ; CC1 8 ; UView Ventana BMK XT Zwakke expressor Sterke expressor

25 Resultaatbespreking CK7 Algemeen n=75 * NQC 2014 n % suff % suff optimaal % 40% 92 % goed % 40% 80 % Borderline 3 4 % 15 % Onvoldoende 2 3 % 1 % Niet beoordeelbaar 1 1 % * 2 deelnemende firma s werden niet opgenomen in de resultaten

26 Resultaatbespreking CK7 Opgesplitst per clone n=75 ** OVTL conc. % suff OVTL % suff SP52 RTU RTU % suff RN7 RTU % suff n=14 n=32 * n=23 n=3 optimaal 6 43% 25 81% 15 65% 2 - goed 5 36% 5 16% 8 35% 0 - borderline 1 7% 1 3% onvoldoende 2 14% Totaal suff 79% 97% 100% - NQC % 100% 98 % 86% * 1 niet beoordeelbaar ** 2 deelnemende firma s werden niet opgenomen in de resultaten Opmerking: 1 deelnemer RTU ½ verdund: optimaal resultaat

27 Resultaatbespreking CK7 Verdeling optimale resultaten conc AS per stainer Immunologic Autostainer * Ventana Benchmark GX / XT / Ultra Leica Bond III / Max Buffer TRS ph 6,1 TRS ph 9,0 Geen pretreat Protease 1 ph 6,0 (CC2) ph 8,5 (CC1) Combinatie enzym/hier Geen pretreat ph 6,0 (ER1) ph 9,0 (ER2) Totaal aantal Optimaal OVTL12/ * Geen Dako stainers met conc. AS

28 Resultaatbespreking CK7 Invloed AS / incubatietijd / HIER Clone RN7 AS RTU 15 RT na ph6 20 (datasheet) geeft optimaal resultaat Identiek protocol maar met korte HIER (10 ) = borderline resultaat: nier en spino te zwak. Clone SP52 UV detectie optimaal resultaat mogelijk met: AS inc.tijd +/- amplifier bij RT/36 C na HIER CC Leica clone: optimaal resultaat met: AS 28 bij 36 C na HIER CC1 46 Langere HIER (>60 ): achtergrond OV detectie enkel optimaal resultaat met: AS 12 bij 36 C na HIER CC1 24 langere HIER: lichte achtergrond

29 Resultaatbespreking CK7 Invloed AS / incubatietijd / HIER Clone OVTL conc. Dako clone: Suff. resultaat mogelijk zonder epitoop retrieval (n=1): 1/200 AS 32 +amp (UV kit) AS 1/50-1/1000 kan suff. resultaat geven afhankelijk van de totale sensitiviteit van het protocol Kleine verdunning (1/50, 32 inc.) gecombineerd met een te korte HIER (8 CC1 UV kit) = onvoldoende: algemeen te zwak Gelijkaardig protocol met enzym (8 ), iview kit = goed Andere clones: Biogenex: 1/ inc. na P1 4-8 en iview/uv-kit geeft optimaal resultaat Leica/NCL: 1/ inc. na HIER ph9 20 geeft optimaal resultaat Thermo/Neo: enkel protocol 1/ na P1 8 en UVkit geeft optimaal resultaat

30 Resultaatbespreking CK7 Invloed AS / incubatietijd / HIER Clone OVTL RTU Dako clone: Omnis: optimaal resultaat mogelijk met: AS 8-10 na ph9 30 Envision Flex+ Autostainer: optimaal resultaat mogelijk met: AS na ph Envision Flex/Envision Flex + Langere AS inc. tijd onafh. van andere protocolsettings (retrieval, kit, ) geeft lichte achtergrond nier Klinipath clone: BMK XT iview: suff. resultaat mogelijk met: AS 16 bij 36 C na P1 8

31 Resultaatbespreking CK7 Besluit: - Suff. 92 % Algemene score beduidend hoger NQC 2014 Suff. resultaat te behalen bij alle gebruikte clones/stainers 64% gebruikt OVTL clone, 79% RTU Conc. AS bij 19% deelnemers RTU presteert beter dan conc. AS (suff. ~98% <> 79%), resultaat ~NQC RTU OVTL clone geeft meer optimale resultaten dan SP52 clone (achtergrond) Extra controlecoupe: 41% Conc. AS: Voorbehandeling: enkel suff. result met hoge ph ; enzymatisch of combinatie protocol ook optimaal mogelijk type voorbehandeling heeft geen invloed op suff. resultaat Geen voorbehandeling = onvoldoende, sterke expressor veel te zwak Gemiddelde range: 1/50-1/1000

32 Resultaatbespreking CK7 Besluit: Sterke expressor : Alveolair epitheel long en pancreas (grote ducti): meestal OK 2/73 vals negatief Zwakke expressors: 5/73 te zwakke aankleuring pancreas tussenliggende ducti, spino Normale maag (foveolair epitheel) zwak/vals negatief Oorzaken borderline/onvoldoende: Verkeerde keuze HIER ph (lage ph) of geen voorbehandeling Suboptimale titer AS Combinatie van beiden Aanbevolen controle: pancreas epitheel grote ducti sterk positief (hoge expressor) meerderheid epitheel tussenliggende ducti zwak/matig positief (lage expressor)

33 Resultaatbespreking CK7 CSQI (critical stain quality indicators) NQC: hoog sensitief protocol CK 7 icapc. A, Liver: virtually all epithelial cells of bile ducts must show a moderate to strong cytoplasmic staining reaction. B, Pancreas: virtually all epithelial cells of intercalated ducts must show a weak to moderate cytoplasmic staining reaction (LLOD). C, Appendix: generally, no staining reaction is seen. Scattered columnar epithelial cells and endothelial cells may show a weak to moderate cytoplasmic staining reaction. icapc indicates immunohistochemistry critical assay performance controls; LLOD, low limit of detection. Standardization of Positive Controls in Diagnostic Immunohistochemistry: Recommendations From the International Ad Hoc Expert Committee Torlakovic, Emina E.; Nielsen, Søren; Francis, Glenn; Garratt, John; Gilks, Blake; Goldsmith, Jeffrey D.; Hornick, Jason L.; Hyjek, Elizabeth; Ibrahim, Merdol; Miller, Keith; Petcu, Eugen; Swanson, Paul E.; Zhou, Xiaoge; Taylor, Clive R.; Vyberg, Mogens Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology. 23(1):1-18, January doi: /PAI

34

35 Protocol Vimentine clones n=68 Clone V9: Concentrated: n=13 Dako: n=8 Thermo/Neomarkers: n=1 Biogenex: n=2 Leica/Novocastra: n=1 BioSB: n=1 RTU: n=50 Dako: n=28 Ventana/CellMarque: n=19 Leica/Novocastra: n=3 RTU en verder verdund: n=1 Dako Clones 3B4, SP20 en SRL33

36 Protocol Vimentine clones Clone V9 Dako conc. Incubatietijd en verdunning: Dako stainer: verdunning? inc. 10 RT Roche stainer: 1/100-1/600 ; +/- amp ; inc. Leica stainer: 1/150 (RT) ; 15 inc. Clone V9 conc. andere producent Thermo/Neomarkers: Ventana XT: 1/ inc. 36 C Biogenex: Leica BondIII: 1/ inc. 36 C Ventana XT: 1/ inc. RT Leica/NCL: Leica Bond III 1/ inc. RT BioSB: Ventana XT: 1/ inc. 36 C

37 Protocol Vimentine clones Clone V9 conc. Clone V9 Dako RTU Dako Omnis 5-22,5 inc. (datasheet: AS 22,5 inc.tijd, n=3/6) 1/6 incubeert bij RT Dako Autostainer 5-20 inc. tijd RT 8/19 inc. tijd 20 RT (datasheet) Roche platform: inc. tijd bij 36 C, iview detectie (oude) datasheet: 16 inc. tijd bij 37 C Manueel 30 inc. tijd RT

38 Protocol Vimentine clones Clone V9 conc. Clone V9 Dako RTU Clone V9 Ventana/C. Marque RTU iview detectiekit 20 inc. bij 36 C UV detectiekit 8-32 inc. (datasheet AS 16 inc., n=11/16) 2/16 incuberen bij RT OV detectiekit 4-8 inc. bij 36 C 1 onbekend

39 Protocol Vimentine clones Clone V9 conc. Clone V9 Dako RTU Clone V9 Ventana/C. Marque Clone V9 RTU 1/3 verdund ultraview : 24 inc. bij 36 C op Benchmark GX Clone andere producent V9 RTU Leica/NCL 15 inc. RT op Leica Bond Max 8 inc. bij 36 C op Benchmark XT

40 Protocol Vimentine clones Clones V9 Clone 3B4 Dako: n=2 Clone SRL33 UV detectiekit: 1/40 32 inc. OV detectiekit: 1/ inc. +amp. 4 Leica/NCL: n=1 15 inc. RT op Leica Bond Max Clone SP20 RTU: n=1 Thermo/Neomarkers 30 inc. RT op Dako Autostainer

41 Protocol Vimentine voorbehandeling clone V9: Concentrated: Roche platform: Geen voorbehandeling: n=1 enkel CC1 30 (n=8) Datasheet (2008): standaard CC1 Leica platform ph9: 10 (optimaal) ph6: Dako Autostainer: ph6 50 RTU RTU 1/3 verdund

42 Protocol Vimentine voorbehandeling Clone V9 conc. clone V9: RTU: Dako clone: HIER ph9: n=9 (Autostainer) ; n=4 (Omnis) ph6: n=11 (Autostainer) ; n=2 (Omnis) Ventana clone: HIER iview: 38 CC1 UV: 8-64 CC1 (datasheet: standaard CC1: n=7/19) OV: 16 CC1 ; 1 niet gekend ander V9 clone: Leica/NCL Leica Bond Max: HIER ph6 30 Ventana XT: HIER 46 CC1 RTU en verder verdund 1/3: Dako clone (n=1) op Ventana XT: CC1 30

43 Protocol Vimentine voorbehandeling Clone V9 conc. Clone V9 RTU andere clones : 3B4 (Dako conc.) Ventana XT/Ultra: CC1 SP20 (Thermo RTU): Dako Autostainer: HIER 50 ph6 SRL33 (Leica RTU): Leica Bond Max: 10 ph6

44 Scoringscriteria Vimentine Aankleuringspatroon: cytoplasmatisch tonsil: matig-sterk positief alle perifere T en B cellen minstens matig positief macrofagen kiemcentra (hoge expressor), foll. dendr. netwerk squameus epitheel negatief cave indien enkel endotheel en macrofagen positief: protocol is niet gevoelig genoeg voor lage expressor neoplasies nier normaal: proximale tubuli negatief nierca heldercellig: zwak tot matig positief, cytoplasmatisch en voornamelijk membranair (lage expressor) nierca papillair(core 5) : wisselend, minstens zwak tot matig positief, cytoplasmatisch en voornamelijk membranair melanoom: matig-sterk positief van bijna alle neoplastische cellen (hoge expressor) alle weefsels: endotheel en fibroblasten matig-sterk positief (hoge expressor)

45 Resultaatbespreking Vimentine Labo VIMENTINE / EINDBEOORDELING Labo VIMENTINE / EINDBEOORDELING Labo VIMENTINE / EINDBEOORDELING QML004 Optimaal QML100 Optimaal QML213 Goed QML006 Optimaal QML102 Optimaal QML214 Optimaal QML007 Optimaal QML113 Optimaal QML217 Optimaal QML010 Optimaal QML120 Optimaal QML220 Onvoldoende QML014 Optimaal QML124 Optimaal QML227 Optimaal QML015 Optimaal QML129 Onvoldoende QML230 Optimaal QML017 Optimaal QML133 Optimaal QML241 Optimaal QML020 Optimaal QML135 Onvoldoende/Geen beoordeling mogelijk? QML244 Optimaal QML028 Optimaal QML142 Optimaal QML245 Borderline QML032 Borderline QML145 Optimaal QML252 Optimaal QML037 Optimaal QML149 Optimaal QML255 Optimaal QML044 Optimaal QML152 Optimaal QML260 Optimaal QML051 Optimaal QML155 Optimaal QML261 Optimaal QML058 Optimaal QML160 Optimaal QML263 Borderline QML062 Optimaal QML163 Optimaal QML264 Optimaal QML066 Optimaal QML164 Optimaal QML269 Optimaal QML072 Optimaal QML168 Optimaal QML270 Optimaal QML080 Optimaal QML175 Goed QML275 Optimaal QML081 Optimal QML185 Optimaal QML286 Optimaal QML083 Optimaal QML188 Optimaal QML293 Optimaal QML089 Optimaal QML191 Optimaal QML298 Optimaal QML090 Goed QML201 Optimaal QML300 Optimaal QML098 Optimaal QML207 Optimaal QML099 Optimaal QML212 Optimaal

46 Antistof Vimentine Optimaal Onvoldoende Melanoom Nier Tonsil Nier heldercellig Ca Nier papillair Ca Dako V9 1/ CC1 30 UV Ventana XT BioSB V9 1/ amp ; geen pretreat ; UV Ventana XT

47 Antistof Vimentine Optimaal Dako V9 1/ ; CC1 30 ; UV BMK XT Onvoldoende BioSB V9 1/ amp ; geen pretreat ; UV Ventana XT Hoge expressor: kiemcentrum macrofagen, endotheel Lagere expressor: foll. dendritisch netwerk, lymfocyten

48 Antistof Vimentine Optimaal Dako V9 1/ CC1 30 UV BMK XT heldercellig- en papillair nierca Onvoldoende BioSB V9 1/ amp ; geen pretreat UV Ventana XT

49 Antistof Vimentine Optimaal Dako V9 1/ CC1 30 UV BMK XT Onvoldoende BioSB V9 1/ amp ; geen pretreat ; UV Ventana XT

50 Antistof Vimentine Sterke expressor OK, Ventana V9 RTU 8 ; CC1 16 ; OV BMK Ultra Optimaal Borderline Nier Ca te zwak Ventana V9 RTU 4 ; CC1 16 ; OV BMK Ultra

51 Antistof Vimentine SRL33 Borderline Leica SRL33 RTU 15 RT ; ph6 10 ; Leica Bond Max, Optimaal

52 Resultaatbespreking Vimentine Algemeen n=68 NQC 2010 n % suff % suff optimaal % 48% 91% goed 3 4 % 35% Borderline 3 4 % 13% Onvoldoende 3 4 % 4% 83%

53 Resultaatbespreking Vimentine Opgesplitst per clone /format: RTU RTU: suff. 96 % Dako V9 RTU % suff Ventana V9 RTU % suff Leica V9 % suff Leica SRL33 % suff Thermo SP20 % suff n=28 n=20 n=3 optimaal 26 93% 18 90% goed 1 3,5% 1 5% borderline 0-1 5% onvoldoende 1 3,5% Totaal suff 96,5% 95% - NQC % 100% Geen data n=1: onvoldoende Geen data (20% suff. conc. AS)

54 Resultaatbespreking Vimentine Opgesplitst per clone / format: conc. - Concentrated: suff. 87 % Thermo SP20 Dako 3B4 Dako V9 BioSB V9 Thermo V9 Biogenex V9 Leica V9 n=1 n=2 n=9 n=1 n=1 n=2 n=1 optimaal goed borderline onvoldoende Totaal suff % NQC % (n=5) 73% 86% Opmerking: 1 deelnemer RTU 1/3 verdund: optimaal resultaat

55 Resultaatbespreking Vimentine Verdeling optimale resultaten conc AS per stainer Ventana Benchmark GX / XT / Ultra Leica Bond III / Max Buffer Geen pretreat Protease 1-3 ph 6,0 (CC2) ph 8,5 (CC1) Combinatie enzym/hier Geen pretreat ph 6,0 (ER1) ph 9,0 (ER2) Totaal aantal Optimaal V Geen Dako stainers met conc. AS

56 Resultaatbespreking Vimentine Invloed AS / incubatietijd / HIER Clone V9 Dako RTU: AS RT/32 C na ph9 of ph6 met 10 heating time geeft optimale resultaten Omnis: ook optimaal mogelijk met korte AS inc.tijd (5 ) Optimale resultaten te bereiken onafhankelijk van HIER en AS incubatietijd en stainer platform RTU 1/3 verdund (BMK XT): optimaal resultaat mogelijk Ventana RTU: UV kit: AS 16 bij 36 C na HIER mild-standaard CC1 geeft optimale resultaten (standaard CC1=datasheet) UV kit: optimaal resultaat met korte AS inc.tijd indien voldoende lange HIER OV kit: te korte HIER met een korte AS inc.tijd (4 ) geeft borderline resultaat<> idem HIER met 8 AS inc.tijd = optimaal resultaat Leica V9: AS 15 RT na 30 HIER ph6 geeft optimaal resultaat Op Ventana stainer ook optimaal indien voldoende lange HIER

57 Resultaatbespreking Vimentine Invloed AS / incubatietijd / HIER Andere RTU clones Thermo SP20 clone: 1 deelnemer: onvoldoende wegens te zwak in alle weefsels oorzaak: verkeerd keuze HIER (hoge ph is nodig) NQC 2010 (conc. AS): suff. 20% Leica SRL33 clone: 1 deelnemer: borderline wegens te zwak in hoge én lage expressors oorzaak: te korte HIER en / of verkeerde keuze HIER correlatie met NQC: 1 deelnemer -> onvoldoende Conc. AS V9 Geen HIER geeft onvoldoende resultaat Indien lage ph HIER: optimale protocol settings nodig Grote variatie verdunning (1/100 tot 1/600): optimaal mogelijk indien voldoende lange HIER. Gemiddelde verdunning: 1/250. Leica: een meer verdunde AS, korte HIER (tijd?) geeft optimaal resultaat dankzij versterker

58 Resultaatbespreking Vimentine Besluit: Suff. 91 % (2014: 78%) Algemene score beduidend hoger NQC 2010 Vorige rondzending: RTU 91% suff. ; conc. 29% suff. RTU presteert beter dan conc. AS (suff. ~96% <> 87%), resultaat ~NQC 92% gebruikt clone V9 81% gebruikt RTU format Suff. resultaat te behalen met V9 clone onafhankelijk van stainerplatform en type HIER Controlecoupe bij 40% deelnemers Voorbehandeling: Geen pretreat = onvoldoende, te zwakke lage expressors (cf NQC) RTU V9: type HIER heeft geen invloed op resultaat

59 Resultaatbespreking Vimentine Besluit: Hoge expressors (endotheelcellen, tonsil kiemcentrum macrofagen, melanoma): OK voor meeste deelnemers Lage expressors (nierca): te zwakke aankleuring door suboptimale HIER (geen/te kort/verkeerd type (3/6)) evt in combinatie met te korte AS inc.tijd optimalisatie nodig - Aanbevolen controle * : tonsil Bijna alle T-B lymfocyten moeten sterk aankleuren, zonder aankleuring van het squameus epitheel) * NQC: HIER is mandatory to obtain an optimal result, irrespective of the applied clone

60 Resultaatbespreking Vimentine CSQI (critical stain quality indicators) NQC: hoog sensitief protocol Vimentin icapc. A, Appendix: dispersed intraepithelial T cells must show an at least weak to moderate cytoplasmic reaction. Endothelial cells of large vessels, stromal cells, macrophages, and lymphocytes in lamina propria must show a moderate to strong cytoplasmic staining reaction. B, Liver: all endothelial cells and Kupffer cells of the sinusoids must show a weak to moderate cytoplasmic staining reaction (LLOD). C, Pancreas: the vast majority of epithelial cells of the exocrine acini must show a weak to strong predominantly cytoplasmic staining reaction. icapc indicates immunohistochemistry critical assay performance controls; LLOD, low limit of detection. Standardization of Positive Controls in Diagnostic Immunohistochemistry: Recommendations From the International Ad Hoc Expert Committee Torlakovic, Emina E.; Nielsen, Søren; Francis, Glenn; Garratt, John; Gilks, Blake; Goldsmith, Jeffrey D.; Hornick, Jason L.; Hyjek, Elizabeth; Ibrahim, Merdol; Miller, Keith; Petcu, Eugen; Swanson, Paul E.; Zhou, Xiaoge; Taylor, Clive R.; Vyberg, Mogens Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology. 23(1):1-18, January doi: /PAI

61 Resultaatbespreking besluit SUFFICIENT 2016 NQC CK7 92 % 80 % 2014 Vimentin 91 % 83 % 2010

62 Couperondzending vervolg Planning 2016 Externe kwaliteitsevaluatie EKE 2016/1 EKE 2016/2 CK7 ; VIM p16 ; p53 Rondzending coupes naar deelnemende labo s 15/02/ /09/2016 Deadline terugkeer gekleurde coupes 11/03/ /10/2016 Beoordeling panel 21-25/04/ /10/2016 Doorsturen individueel resultaat 09/05/ /11/2016 Resultaatbespreking / symposium / globaal rapport 31/05/ /12/2016

63