VALIDATIEPLAN PLAN DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par I-MET-FLVVT-033 Bepaling van flubendazol in dierenvoeders Détermination de flubendazole dans les aliments pour animaux HPLC HPLC Dierenvoeders Aliments pour animaux Totaal Totale Secundair Secondaire Mini-validatie validation minimale Mieke Vanbrabant Verantwoordelijke sectie toevoegingsmiddelen Responsable section additifs Naam Nom: Mieke Vanbrabant Handtekeningen Signatures: Functie - Fonction: Verantwoordelijke sectie (get.) toevoegingsmiddelen Datum - Date: Nvt Handtekeningen - Signatures: Naam Nom: G. De Poorter (get.) Functie - Fonction: Kwaliteitsverantwoordelijke Datum - Date: 1996-03 LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan Modèle plan de validation v.01 2012-03-15 1/13
Stap Phase 1: Bepaling van het toepassingsgebied Déterminer le champs d application De methode moet geschikt zijn voor de kwantitatieve bepaling van flubendazol in dierenvoeders (volledige/aanvullende diervoeders). Het gehalte aan flubendazol in dierenvoeders bedraagt gewoonlijk 15 à 60 mg/kg, met een meest voorkomend doseringsgehalte van 30 mg/kg. Het werkgebied wordt zo opgesteld dat de courante concentraties probleemloos kunnen gemeten worden en kritische concentraties niet helemaal aan de uitersten van het werkgebied liggen. Stap Phase 2: Doel en statuut van de analysemethode Le but et status de la méthode d analyse Kwantitatieve bevestigingsmethode, afgeleide interne (in-house) methode gebaseerd op een methode van Janssen Pharmaceutica (specification report A165 (860424) R 17889). Stap Phase 3: Keuze validatieparameters Choisir les paramètres à valider Voor deze methode worden de volgende prestatiekenmerken bepaald: lineariteit en werkgebied, bepaalbaarheidsgrens (rapporteringsgrens) en aantoonbaarheidsgrens, specificiteit en selectiviteit, juistheid en terugvinding, precisie, herhaalbaarheid, reproduceerbaarheid (intra-) en robuustheid. Stap Phase 4: Externe eisen voor validatieparameters Des exigences externes pour les paramètres à valider Nvt. Stap Phase 5: Keuze van de monsters Le choix d échantillons De geschiktheid van de methode zal getest worden op (gedopeerde) routinemonsters die een grote gelijkenis met de meest voorkomende praktijkmonsters vertonen. LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan Modèle plan de validation v.01 2012-03-15 2/13
VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / Date de la dernière adaption I-MET-FLVVT-033 Bepaling van flubendazol in dierenvoeders Détermination de flubendazole dans les aliments pour animaux HPLC HPLC Dierenvoeders Aliments pour animaux 2013/11/29 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 3/13
Overzicht van de prestatiekenmerken: o Zie paragraaf 3 De validatie voldoet aan procedure LAB 00 P180 De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn: o Zie paragraaf 3.2 en 3.3 (zowel juistheid als precisie bepaald op minstens 1 niveau) Historiek validatie Versie Herziening door/datum Reden van herziening Wijzigingen 01 01/03/1996, A. Fontaine Opsteller initiële versie Volledige tekst 01 05/1998, A. Fontaine Bepaling reproduceerbaarheid Toevoeging validatiegegevens 01 05/1999, A. Fontaine Bepaling lineariteit, parallellisme Toevoeging validatiegegevens standaardcurve/matrixcurve 02 11/2013, M. Vanbrabant Voorbereiding publicatie en toevoegen nieuwe data (Juistheid, precisie en meetonzekerheid) Toevoeging validatieplan en overzicht validatierapport + historiek LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 4/13
VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par I-MET-FLVVT-033 Bepaling van flubendazol in dierenvoeders Détermination de flubendazole dans les aliments pour animaux HPLC HPLC Dierenvoeders Aliments pour animaux Totaal Totale Secundair Secondaire Mini-validatie validation minimale Mieke Vanbrabant Verantwoordelijke sectie toevoegingsmiddelen Responsable section additifs Naam Nom: Mieke Vanbrabant Handtekeningen Signatures: Functie - Fonction: Verantwoordelijke sectie (get.) toevoegingsmiddelen Datum - Date: 2013-11-29 Raymond Van Sandt: laborant Martine Bral: laborant Annemie Voets: laborant Nele Maris : laborant Start - Début: 1993 Einde - Fin: 2012-12 Handtekeningen - Signatures: Naam Nom: Mandy Lekens (get.) Functie - Fonction: Labomanager Datum - Date: 2013-12-06 Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P 00 180. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 5/13
Samenvatting validatiegegevens Résumé des données de validation... 7 1 Doel en toepassingsgebied... 7 2 Analysemethode en analisten... 7 3 Prestatiekenmerken... 7 3.1 Lineariteit en werkgebied... 7 3.2 Precisie... 8 3.2.1 Intralaboratoriumreproduceerbaarheid (%RSDRw) (M. Vanbrabant, 2013)... 8 3.2.1.1 Controlekaartgegevens (30 mg/kg)... 8 3.2.2 Herhaalbaarheid (%RSDr ) (A. Fontaine, 1996)... 9 3.2.2.1 Diervoeder (spike, 10 mg/kg)... 9 3.2.2.2 Diervoeder (gemedicineerd, 20 mg/kg)... 9 3.2.2.3 Diervoeder (spike, 30 mg/kg)... 10 3.3 Juistheid en/of terugvinding... 10 3.4 Aantoonbaarheidsgrens (LOD) en bepaalbaarheidsgrens (LOQ) of rapporteringsgrens... 10 3.5 Selectiviteit en specificiteit... 11 3.6 Reproduceerbaarheid (Inter)... 11 3.7 Robuustheid... 11 3.8 Standaarden houdbaarheid... 12 3.9 Meetonzekerheid... 12 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 6/13
Samenvatting validatiegegevens Résumé des données de validation 1 Doel en toepassingsgebied Kwantitatieve bepaling van flubendazol in dierenvoeders (volledige/aanvullende diervoeders) met behulp van een afgeleide HPLC-methode (Janssen Pharmaceutica). Het gehalte aan flubendazol in dierenvoeders bedraagt gewoonlijk 15 à 60 mg/kg, met een meest voorkomend doseringsgehalte van 30 mg/kg. Het werkgebied werd zo opgesteld dat de courante concentraties probleemloos kunnen gemeten worden en kritische concentraties niet helemaal aan de uitersten van het werkgebied liggen. 2 Analysemethode en analisten I-MET-FLVVT-033: zie bijlage. Het validatieonderzoek werd uitgevoerd onder toezicht van sectieverantwoordelijke A. Fontaine (1993-1996) en Mieke Vanbrabant (2011-2013) door de volgende analisten: Martine Bral (MB) Annemie Voets (AV) Raymond Van Sandt (RVS) Nele Maris (NM) 3 Prestatiekenmerken 3.1 Lineariteit en werkgebied Een ijklijn in solvent en een ijklijn in matrix werden opgesteld op basis van 5 concentratieniveaus (1-5-10-15- 20 µg/ml of 5-25-50-75-100 mg/kg) (juni 1993, RVS). De geschiktheid van het lineair model voor beide ijklijnen werd bewezen aan de hand van het statistisch verwerkingsprogramma Statgraphics (Regressieanalyse, Lack-of-fit test). Een Statgraphics vergelijking tussen de ijklijn in solvent en de ijklijn in matrix werd uitgevoerd om aan te tonen dat er geen significant verschil bestaat tussen de ijklijn in solvent en de ijklijn in matrix (Comparison of regression lines). In dit geval wordt er bijgevolg verder gewerkt met een ijklijn in solvent op basis van 3 concentratieniveaus. Het werkgebied wordt gekozen in functie van de meest voorkomende doseringsgehaltes en ligt tussen 12,5 en 50 mg/kg. Er moet voor gezorgd worden dat de concentratie van het analyt in de monsteroplossing of een verdunning van deze oplossing binnen de grenzen van dit werkgebied valt. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 7/13
3.2 Precisie Voor de bepaling van de precisie dient de intralaboratoriumreproduceerbaarheid (= intermediate precision) bepaald te worden en indien relevant of vereist, ook de herhaalbaarheid. 3.2.1 Intralaboratoriumreproduceerbaarheid (%RSDRw) (M. Vanbrabant, 2013) Voor de bepaling van de intralaboratoriumreproduceerbaarheid werd er volgens de validatieprocedure gebruik gemaakt van controlekaartgegevens. De bekomen %RSD Rw moet lager zijn dan of gelijk aan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van Horwitz (%RSD Rw max ). 3.2.1.1 Controlekaartgegevens (30 mg/kg) De intralaboratoriumreproduceerbaarheid werd bepaald aan de hand van controlekaartgegevens (spike 30 mg/kg) tijdens de periode 2011 2012. Aantal metingen = 60 Gemiddelde = 30,22 STDEV = 0,83 %RSD Rw = 2,74 %RSD Rw max = 9,59 HorRat = 0,29 Evaluatie: Voor de matrix dierenvoeder (doseringsniveau) is de intralaboratorium-reproduceerbaarheid (%RSD Rw ) kleiner dan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van Horwitz (%RSD Rw max ). De intralaboratorium-reproduceerbaarheid voldoet bijgevolg aan de criteria vermeld in de validatieprocedure. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 8/13
3.2.2 Herhaalbaarheid (%RSDr ) (A. Fontaine, 1996) Voor de bepaling van de herhaalbaarheid werd er volgens de validatieprocedure gebruik gemaakt van 6 deelmonsters. De bekomen %RSD r moet lager zijn dan of gelijk aan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van Horwitz (%RSD r max = %RSD Rw max x 2/3). 3.2.2.1 Diervoeder (spike, 10 mg/kg) 3.2.2.2 Diervoeder (gemedicineerd, 20 mg/kg) Datum 25/06/1993 Uitvoerder RVS Waarborg (mg/kg) 10 Spike in diervoeder Evaluatie: Monster Resultaat (mg/kg) Terugvinding (%) 1 9,92 99 2 8,56 86 3 8,55 86 4 8,51 85 5 8,69 87 6 8,55 86 Gemiddelde = 8,80 88,0 STDEV = 0,55 5,54 RSD r = 6,29 %RSD r max = 7,54 %RSD Rw max = 11,31 Voor de matrix dierenvoeder (lager dan doseringsniveau) is de herhaalbaarheid (%RSD r ) kleiner dan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van Horwitz (%RSD r max ). De herhaalbaarheid voldoet bijgevolg aan de criteria vermeld in de validatieprocedure. Datum 24/06/1993 Uitvoerder RVS Waarborg (mg/kg) 20 Spike in diervoeder Evaluatie: Monster Resultaat (mg/kg) Terugvinding (%) 1 22,10 111 2 21,76 109 3 21,90 110 4 21,90 110 5 21,01 105 6 21,20 106 7 21,32 107 8 21,53 108 Gemiddelde = 21,59 107,95 STDEV = 0,39 1,93 %RSD r = 1,79 %RSD r max = 6,80 %RSD Rw max = 10,19 Voor de matrix dierenvoeder (doseringsniveau) is de herhaalbaarheid (%RSD r ) kleiner dan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van Horwitz (%RSD r max ). De herhaalbaarheid voldoet bijgevolg aan de criteria vermeld in de validatieprocedure. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 9/13
3.2.2.3 Diervoeder (spike, 30 mg/kg) Datum 21/06/1993 Uitvoerder RVS Waarborg (mg/kg) 30 Spike in diervoeder Monster Resultaat Terugvinding (mg/kg) (%) 1 26,20 87 2 25,00 83 3 26,90 90 4 28,80 96 5 27,00 90 6 28,70 96 Gemiddelde = 27,10 90,33 STDEV = 1,46 4,88 RSD r = 5,40 RSD Rw (%) = 6,39 %RSD Rw max = 9,59 Evaluatie: Voor de matrix dierenvoeder (doseringsniveau) is de herhaalbaarheid (%RSD r ) kleiner dan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van Horwitz (%RSD r max ). De herhaalbaarheid voldoet bijgevolg aan de criteria vermeld in de validatieprocedure. 3.3 Juistheid en/of terugvinding Bij herhaalde analyses van een monster moet het resultaat liggen tussen 80 en 110% van het belaste gehalte. De terugvinding werd bepaald aan de hand van controlekaartgegevens (spike 30 mg/kg) tijdens de periode 2011 2012. Er werden geen resultaten bekomen die niet voldeden aan de recovery-aanvaardingscriteria en het terugvindingspercentage bedraagt 100,7 %, wat voldoet aan de vooropgestelde voorwaarde. 3.4 Aantoonbaarheidsgrens (LOD) en bepaalbaarheidsgrens (LOQ) of rapporteringsgrens De LOD en LOQ worden berekend op basis van de signaal-ruisverhouding (S/N). Voor de LOD dient S/N 3 te zijn; voor de LOQ is S/N 6. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 10/13
Voor de bepaling van de LOQ werden 6 gespiked met een gehalte van 5 mg/kg. De signaal/ruis-verhouding (S/N) bedroeg gemiddeld meer dan 30 en de concentratie bedroeg gemiddeld 5,28 mg/kg. De recoverywaarde bedroeg 105,6 % en de RSD 9,24 %. Aangezien de verhouding tussen het signaal en de ruis groter dan of gelijk is aan 30 (S/N 30), dienen de bepaalbaarheidsgrens en aantoonbaarheidsgrens niet bepaald te worden (De Ware(n) Chemicus). Dit is geen probleem omdat het gehalte in routinemonsters meestal hoger ligt. We spreken dan ook niet van een bepaalbaarheidsgrens, maar wel van een rapporteringsgrens van 5 mg/kg. Datum 25/06/1993 Uitvoerder RVS Waarborg (mg/kg) 5 0,000005 Spike in diervoeder Monster Resultaat (mg/kg) Terugvinding (%) 1 5,48 110 2 5,21 104 3 6,06 121 4 5,35 107 5 4,97 99 6 4,62 92 Gemiddelde = 5,28 105,6 STDEV = 0,49 9,76 RSD r = 9,24 3.5 Selectiviteit en specificiteit De piekidentificatie gebeurt aan de hand van de retentietijd. De piekkwantificatie gebeurt aan de hand van de piekoppervlakte. 3.6 Reproduceerbaarheid (Inter) Er werd nog niet deelgenomen aan ringtesten. In afwachting hiervan werden er intern tweedelijnscontroles uitgevoerd, welke voldeden aan de aanvaardingscriteria. 3.7 Robuustheid Langetermijnsvalidatie wordt uitgevoerd op basis van Shewart-controlekaarten (trendanalyse). LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 11/13
3.8 Standaarden houdbaarheid Ter controle worden de piekoppervlakken van standaard 2-injectie genoteerd: Aanmaak 14/06/2011 22/08/2011 24/10/2011 Datum Area Datum Area Datum Area 14/06/2011 603384 22/08/2011 658000 24/10/2011 591605 24/06/2011 671209 23/08/2011 625640 04/11/2011 605740 07/07/2011 599783 26/08/2011 606391 08/11/2011 676966 19/07/2011 610802 16/09/2011 590693 18/11/2011 601470 04/08/2011 616195 29/09/2011 597400 06/12/2011 607364 10/06/2011 597680 13/12/2011 596993 22/12/2011 603665 Gemiddelde 620275 612634 611972 STDEV 29180 25311 29163 RSD (%) 4,70 4,13 4,77 De relatieve standaarddeviatie van deze oppervlakken is gering binnen de houdbaarheidstermijn van 3 maanden. De afwijking ten opzichte van de vorige STD2-injectie mag maximaal 20% bedragen, maar een dalende trend moet vermeden worden. 3.9 Meetonzekerheid De meetonzekerheid van de methode wordt berekend op 2 niveaus, rekening houdend met de juistheid en precisie. Niveau Concentratie Uitgebreide relatieve (mg/kg) meetonzekerheid U (%) Laag 5 10 27,8 Midden 11-60 13,3 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 12/13
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 13/13