VALIDATIEPLAN PLAN DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Goedgekeurd door I-MET-FLVVT-016 Bepaling van vitamine E (dl-alfa-tocoferol) in dierenvoeders Détermination de vitamine E (dl-alpha-tocophérol) dans les aliments pour animaux HPLC Dierenvoeders Aliments pour animaux Totaal Totale Secundair Secondaire Mini-validatie validation minimale Mieke Vanbrabant Verantwoordelijke sectie toevoegingsmiddelen Responsable section additifs Naam Nom: Mieke Vanbrabant Functie - Fonction: Verantwoordelijke sectie toevoegingsmiddelen Datum - Date: 2013-07-01 Naam Nom: Mandy Lekens Functie - Fonction: Labomanager Datum - Date: 2013-07-03 Handtekeningen - Signatures: (get.) Handtekeningen - Signatures: (get.) LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan Modèle plan de validation v.01 2012-03-15 1/10
Stap Phase 1: Bepaling van het toepassingsgebied Déterminer le champs d application De methode moet geschikt zijn voor de kwantitatieve bepaling van vitamine E in dierenvoeders (volledige/aanvullende diervoeders en voormengsels). Het gehalte aan vitamine E in dierenvoeders bedraagt gewoonlijk 10 tot 20000 mg dl-alfa-tocoferol per kg. Het werkgebied werd zo opgesteld dat de courante concentraties probleemloos kunnen gemeten worden en kritische concentraties niet helemaal aan de uitersten van het werkgebied liggen. Stap Phase 2: Doel en statuut van de analysemethode Le but et status de la méthode d analyse Kwantitatieve bevestigingsmethode, interne (in-house) methode gebaseerd op Europese Verordening 2009/152/EG (Bemonsterings- en analysemethoden voor de officiële controle van diervoeders) Stap Phase 3: Keuze validatieparameters Choisir les paramètres à valider Voor deze methode worden de volgende prestatiekenmerken bepaald: lineariteit en werkgebied, rapporteringsgrens, specificiteit en selectiviteit, juistheid en terugvinding, precisie, herhaalbaarheid, reproduceerbaarheid (intra-) en robuustheid. Stap Phase 4: Externe eisen voor validatieparameters Des exigences externes pour les paramètres à valider EG/152/2009: Herhaalbaarheid => Het verschil tussen de resultaten van een duplobepaling mag niet meer dan 15 % van het hoogste resultaat bedragen. Stap Phase 5: Keuze van de monsters Le choix d échantillons Routinemonsters en ringtestmonsters LAB 00 P 180 F 002 Template validatieplan Modèle plan de validation v.01 2012-03-15 2/10
VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Datum laatste aanpassing / Date de la dernière adaption I-MET-FLVVT-016 Bepaling van vitamine E (dl-alfa-tocoferol) in dierenvoeders Détermination de vitamine E (dl-alpha-tocophérol) dans les aliments pour animaux HPLC Dierenvoeders Aliments pour animaux 2013/07/16 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 3/10
Overzicht van de prestatiekenmerken: o Zie paragraaf 3 De validatie voldoet aan procedure LAB 00 P180 De laboratoria die deze methode willen overnemen, moeten aantonen dat de criteria hieronder aangegeven voldaan zijn: o Zie paragraaf 3.4 en 3.5 (zowel juistheid als precisie bepaald op minstens 1 niveau) Historiek validatie Versie Herziening datum/door Reden van herziening Wijzigingen 01 01/1996, J. Phlix Opsteller initiële versie Volledige tekst 02 05/2002, J. Versnick Bepaling herhaalbaarheid Toevoeging gegevens herhaalbaarheid 02 10/2002, J. Versnick Bepaling rapporteringsgrens Toevoeging gegevens rapporteringsgrens 02 10/2002, J. Versnick Bepaling lineariteit Toevoeging gegevens lineariteit 02 09/2002, J. Versnick Bepaling reproduceerbaarheid Toevoeging gegevens reproduceerbaarheid 03 07/2013, M. Vanbrabant Voorbereiding publicatie en toevoegen nieuwe data (Juistheid, precisie en meetonzekerheid) Toevoeging validatieplan en overzicht validatierapport + historiek LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 4/10
VALIDATIERAPPORT RAPPORT DE VALIDATION Analysemethode Méthode d analyse Techniek Technique Matrix / matrixgroep Matrice / Groupe de matrices Type validatie Type de validation Verantwoordelijke (Naam en functie) Responsable (Nom et fonction) Opgesteld door Rédaction par Medewerkers (Naam en functie) Collaborateurs (Nom et fonction) Periode van validatie Période de validation Methode goedgekeurd en geschikt bevonden door Méthode approuvée et jugé convenable pour la routine par I-MET-FLVVT-016 Bepaling van vitamine E (dl-alfa-tocoferol) in dierenvoeders Détermination de vitamine E (dl-alpha-tocophérol) dans les aliments pour animaux HPLC Dierenvoeders Aliments pour animaux Totaal Totale Secundair Secondaire Mini-validatie validation minimale Mieke Vanbrabant Verantwoordelijke sectie toevoegingsmiddelen Responsable section additifs Naam Nom: Mieke Vanbrabant Handtekeningen - Signatures: Functie - Fonction: Verantwoordelijke sectie (get.) toevoegingsmiddelen Datum - Date: 2013-07-15 Jos Phlix : verantwoordelijke sectie Jan Versnick : verantwoordelijke sectie Karen Janssen : laborant Johan Vandenbempt : laborant Jean-Pierre De Lannoy : laborant Mieke Vanbrabant : verantwoordelijke sectie Start - Début: 01-1996 Einde - Fin: 07-2013 Naam Nom: Mandy Lekens Handtekeningen - Signatures: Functie - Fonction: Labomanager (get.) Datum - Date: nvt Hierna volgt een beschrijving van de resultaten van het validatieonderzoek zoals aangegeven in stap 8 van de procedure LAB 00 P 180. Ce qui suit est une description des résultats de l'étude de validation comme indiqué dans l'étape 8 de la procédure LAB P 00 180. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 5/10
Samenvatting validatiegegevens Résumé des données de validation 1. Doel en toepassingsgebied Kwantitatieve bepaling van vitamine E in dierenvoeders (volledige/aanvullende diervoeders en voormengsels) met behulp van een afgeleide HPLC-methode (2009/152/EG). Het gehalte aan vitamine E in dierenvoeders bedraagt gewoonlijk 10 tot 20000 mg dl-alfa-tocoferol per kg. Het werkgebied werd zo opgesteld dat de courante concentraties probleemloos kunnen gemeten worden en kritische concentraties niet helemaal aan de uitersten van het werkgebied liggen. 2. Analysemethode Zie bijlage. 3. Prestatiekenmerken Ruwe gegevens: Zie bijlage. 3.1 Lineariteit en werkgebied Een ijklijn in solvent werd opgesteld op basis van 7 concentratieniveaus (2-4-5-10-20-30-40 µg/ml) (07/10/2002, J. Versnick). De geschiktheid van het lineair model voor de ijklijn werd bewezen aan de hand van het statistisch verwerkingsprogramma Statgraphics (Regressie-analyse, Lack-of-fit test). In routine wordt er gewerkt met een ijklijn op basis van 3 punten (5 20 40 µg/ml). Het werkgebied wordt gekozen in functie van de meest voorkomende doseringsgehaltes en ligt tussen 5 en 40 µg/ml met 20 µg/ml als referentiewaarde (verdunning afhankelijk van het verwachte/gemeten gehalte). Het werkgebied beperkt zich tot 0,25X 2X met X = concentratie van STD2 (= 20 µg/ml). Er moet voor gezorgd worden dat de concentratie van het analyt in de monsteroplossing of een verdunning van deze oplossing binnen de grenzen van dit werkgebied valt. 3.2 Rapporteringsgrens De rapporteringsgrens werd berekend op basis van een routinemonster met een gehalte van 50 mg/kg (7058/02) dat 10 en 20 maal verdund werd (respectievelijk tot 5 en 2,5 mg/kg) (21/10/2002, J. Versnick). Op basis van de bekomen analyseresultaten werd de rapporteringsgrens ingesteld op 3 mg/kg. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 6/10
3.3 Specificiteit en selectiviteit De piekidentificatie gebeurt aan de hand van de retentietijd. De piekkwantificatie gebeurt aan de hand van de piekoppervlakte. 3.4 Juistheid Bij herhaalde analyses van een monster moet het resultaat liggen tussen 75 en 125% van het belaste gehalte. De juistheid werd bepaald aan de hand van controlekaartgegevens tijdens de periode juni 2010 december 2012. Er werden geen resultaten bekomen die niet voldeden aan de recovery-aanvaardingscriteria en het terugvindingspercentage bedraagt 103,5 %, wat voldoet aan de vooropgestelde voorwaarde (15/07/2013, M. Vanbrabant). 3.5 Precisie 3.5.1 Herhaalbaarheid (%RSD r ) en intralaboratoriumreproduceerbaarheid (%RSD Rw ) Voor deze bepaling werd er volgens de validatieprocedure gebruik gemaakt van Excel-template LAB 00 P 180 F 004. De bekomen %RSD r en %RSD Rw moeten lager zijn dan of gelijk aan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van Horwitz (15/07/2013, M. Vanbrabant). 3.5.1.1 Diervoeder - Laag gehalte (10-1000 mg/kg) Monster met verwacht gehalte van 100 mg/kg FLVVT Horwitz %RSD r 3,48 %RSD r max = 5,33 %RSD Rw 4,13 %RSD Rw max = 8,00 Herhaalbaarheid r (mg/kg) 9,73 Reproduceerbaarheid R (mg/kg) 11,54 Evaluatie: Voor de matrix dierenvoeder (laag gehalte) is zowel herhaalbaarheid (%RSD r ) als intralaboratoriumreproduceerbaarheid (%RSD Rw ) kleiner dan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van Horwitz. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 7/10
3.5.1.2 Diervoeder Midden gehalte (1000-5000 mg/kg) Monster met verwacht gehalte van 2500 mg/kg FLVVT Horwitz %RSD r 1,75 %RSD r max = 3,29 %RSD Rw 2,09 %RSD Rw max = 4,93 Herhaalbaarheid r (mg/kg) 125,84 Reproduceerbaarheid R (mg/kg) 150,19 Evaluatie: Voor de matrix dierenvoeder ( midden gehalte) is zowel herhaalbaarheid (%RSD r ) als intralaboratoriumreproduceerbaarheid (%RSD Rw ) kleiner dan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van Horwitz. 3.5.1.3 Diervoeder - Hoog gehalte (5000-20000 mg/kg) Monster met verwacht gehalte van 5060 mg/kg FLVVT Horwitz %RSD r 2,89 %RSD r max = 2,95 %RSD Rw 3,99 %RSD Rw max = 4,43 Herhaalbaarheid r (mg/kg) 376,78 Reproduceerbaarheid R (mg/kg) 520,20 Evaluatie: Voor de matrix dierenvoeder (hoog gehalte) is zowel herhaalbaarheid (%RSD r ) als intralaboratoriumreproduceerbaarheid (%RSD Rw ) kleiner dan de maximaal toegelaten waarde volgens de vergelijking van Horwitz. 3.6 Reproduceerbaarheid (Inter) In 2010-2012 werd 15 maal deelgenomen aan een ringtesten (matrices diervoeder en voormengsel). De z- scores lagen 12 maal tussen -2,0 en 2,0 en 3 maal tussen -3,0 en 3,0. Er wordt jaarlijks deelgenomen aan meerdere ringtesten op basis van voeders met een uiteenlopende samenstelling om de betrouwbaarheid van de resultaten te toetsen. Bij afwijkende resultaten wordt er een outlieronderzoek ingesteld. LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 8/10
3.7 Robuustheid Langetermijnsvalidatie wordt uitgevoerd op basis van Shewart-controlekaarten (trendanalyse). 3.8 Meetonzekerheid De meetonzekerheid van de methode wordt berekend, rekening houdend met de juistheid en precisie. Op basis van ringtestresultaten en omwille van de gevoeligheid van vitamine E voor omgevingscondities wordt de meetonzekerheid voor alle niveaus vastgelegd op 20% (22/07/2013, M. Vanbrabant). Niveau Concentratie Uitgebreide relatieve (mg/kg) meetonzekerheid U (%) Laag < 1000 20,1 Midden 1000 5000 14,9 Hoog > 5000 20,1 LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 9/10
LAB 00 P 180 F 003 Template validatierapport Modèle rapport de validation v.01 2012-03-15 10/10