Validatiedossier van een IHC onderzoeksmethode HER2 - K Zwaenepoel, klinisch wetenschappelijk medewerker, dienst pathologie, UZ Antwerpen 17 NOV 2018
HER2 IHC klinisch belang HER2 IHC als (pre)screen voor HER2 genamplifcatie bij invasieve borst- en maagkanker
Stappen van /verificatie - proces 1. Optimalisatie Protocol staat vast 1. Optimalisatie Reagentia (antilichaam ) selecteren Protocols uittesten Reagentia (antilichaam ) selecteren Kleuring implementeren Protocols uittesten 2. Validatie Plan 2. Validatie Plan Parameters bepalen Parameters bepalen Criteria bij de parameters vastleggen Criteria bij de parameters vastleggen Plan goedgekeurd krijgen Plan goedgekeurd krijgen 3. 3. Validatie Validatie Dossier Dossier 4. Continue Validatie / Verificatie Dag op dag externe controleblokken Periodiek quality assessment programs, correlatie met FISH resultaten etc
1. Optimalisatie Reagentia (antilichaam ) selecteren Protocols uittesten NORDIQC website geeft veel info voor aanmaak van IHC protocol, AB selectie, etc 2. Validatie Plan Parameters bepalen Criteria bij de parameters vastleggen Plan goedgekeurd krijgen 3. Validatie Dossier
1. Optimalisatie Reagentia (antilichaam ) selecteren Protocols uittesten Per platform worden protocols gegeven die goed scoren 2. Validatie Plan Parameters bepalen Criteria bij de parameters vastleggen Plan goedgekeurd krijgen 3. Validatie Dossier
Welke AB klonen en kits doen het in meerdere labo s goed
Parameters die uitgebreidheid van een dossier bepalen: - Diagnostische test predictieve test (farmaco-diagnostisch) 1 marker bepaalt de diagnosis markers samen bepalen de diagnose (Hoe belangrijker de klinische consequenties van het resultaat zijn, hoe uitgebreider de /verificatie moet zijn.) - Complete IVD flow in huis protocol (met RUO of IVD reagentia) (verificatie) () LET OP: zodra je een aanpassing maakt aan de IVD flow, wordt het een in huis protocol (andere HIER, incubatietijd AB veranderen, op ander apparaat, geadviseerde controles niet gebruiken) - Kwalitatieve evaluatie (semi-)kwantitatieve evaluatie Aanwezig/afwezig % aankleuring, ev. onderverdeeld in groepen
Documenten die je kan raadplegen bij het van je : - Datasheet van je AB - Geeft info over: protocol, externe controles, performance characteristics: achtergrond, correlatie met FISH gegevens, etc - Internationale guidelines voor (IHC)
Documenten die je kan raadplegen bij het van je : - Nationale guidelines voor HER2 + Richtlijnen (/brief 2018) sciensano ivm farmaco-diagnostische IHC testen
UZA: initiële van HER2 IHC in 2009 - Parameters @ UZA: predictieve test - in huis protocol - semikwantitatief (want datasheet werd een linkerstap toegevoegd aan het protocol uit Datasheet) - Plan: 1. Herhaalbaarheid 2. Reproduceerbaarheid 3. Juistheid 4. Klinische bruikbaarheid 5. Interpersonele training
UZA: initiële van HER2 IHC in 2009 - Parameters @ UZA: predictieve test - in huis protocol - semikwantitatief (want datasheet werd een linkerstap toegevoegd aan het protocol uit Datasheet) - Plan: 1. Herhaalbaarheid / intra-assay reproducibility (precisie) 2. Reproduceerbaarheid / inter-assay reproducibility (precisie) 3. Juistheid/ accuraatheid (sensitiviteit en specificiteit) 4. Klinische bruikbaarheid 5. Test interpretatie / Interpersonele training Bij elke parameter werd werkwijze, acceptatie criterium en gebruikte materiaal vastgelegd
UZA: initiële van HER2 IHC in 2009 print screen van plan voor herhaalbaarheid
UZA: initiële van HER2 IHC in 2009 1. Herhaalbaarheid / intra-assay reproducibility (precisie) 2. Reproduceerbaarheid / inter-assay reproducibility (precisie) Freq: N = 3 Materiaal: controleblok met sterk positief (3+), zwak positief (2+) en negatief (0/1+) materiaal Slechte reproduceerbaarheid Goede reproduceerbaarheid Reproduceerbaarheid vertelt iets over de robuustheid van je test, niet over de accuraatheid van je testresultaat.
UZA: initiële van HER2 IHC in 2009 1. Herhaalbaarheid / intra-assay reproducibility (precisie) 2. Reproduceerbaarheid / inter-assay reproducibility (precisie) Oorzaken van variatie:
UZA: initiële van HER2 IHC in 2009 3. Juistheid / accuraatheid EQA providers voor IHC: CAP, NORDIQC, UKNEQAS, ESP,
UZA: initiële van HER2 IHC in 2009 3. Juistheid / accuraatheid Guidelines : Wolff 2007 Sciensano 2018 farmaco-diagnostische biomerkers
4. Klinische bruikbaarheid = de kleuring kan betrouwbaar gebruikt worden voor de applicatie waarvoor het ontwikkeld is Hoe: 1/ vergelijken met een standaardmethode: HER2 IHC van geaccrediteerd labo, HER2 FISH 2/ incidentie bepalen (meer geschikt voor )
UZA: initiële van HER2 IHC in 2009 4. Klinische bruikbaarheid Guidelines : Wolff 2007
4. Klinische bruikbaarheid Voorgestelde aantallen (en guidelines hierover) HER2: 25-100 casussen ER en PR: 20/40- en 20/40+ casussen Non-predictive IHC s: 13 casussen Non-FDA-approved, predictive IHC: 25 casussen
UZA: initiële van HER2 IHC in 2009 5. Test interpretatie interpersonele tuning Initiële training: a.d.h.v. coupes v juistheid (of klin bruikbaarheid) evalueren PA s en GSO-PA s de coupes (eerst apart samen bespreken) Continue tuning nodig: e.g. telkens er geparticipeerd is aan een EQA Guideline sciensano over tuning:
FLOW: 1. Plan laten goedkeuren in document management systeem door kwaliteitsverantwoordelijke, verantw. PA 2.Testen en rapporteren in dossier 3. Indien deze geslaagd zijn: Goedkeuring dossier in document management systeem door kwaliteitsverantwoordelijke, verantw. PA 4. Alle lijsten aanpassen en kleuring implementeren Wat als je tijdens je merkt dat IHC protocol niet goed (genoeg) is: Protocol aanpassen Opnieuw alle parameters testen
Per parameter een conclusie op einde van dossier een eindconclusie Overzicht wat te doen alvorens implementatie: - Risico-analyse: per protocolstap bepalen wat kan mislopen (ernst, voorkomen, kans op detectie) en of er acties mogelijk zijn om dit te vermijden - Lijsten aanvullen - Ev. training voorzien -
Validatiedossier is een levend document! @ UZA: 2009: initiële HER2 IHC op Autostainer 2012: toevoeging klinische bruikbaarheid data HER2 IHC in maag 01/2016: HER2 IHC op Omnis = verandering van methode herhaalbaarheid, reproduceerbaarheid, juistheid, interpersonele training, klinische bruikbaarheid, correlatie (n=10) 05/2016: aanpassing IHC HER2 protocol, gezien enkele IHC 3+ stalen FISH- waren = aanpassing protocol, nl 20 min AB incubatie ipv 25 min AB incubatie reproduceerbaarheid, interpersonele training, juistheid, klinische bruikbaarheid (n=5 FISH+ en 5 FISH-), correlatie (n=10) Document updaten met: - Nieuwe data van EQA programma s waaraan je participeert - Data (jaarlijkse) interpersonele training van de (nieuwe) pathologen
Continue 1. 2x per jaar: EQA participatie 2. dagelijks: 1 e lijnscontrole nazien 3. Jaarlijkse vergelijking van IHC met ISH resultaten voor HER2 4. Jaarlijks incidentie van HER2+ bepalen bij primaire borstcarcinomen
VRAGEN