Digitaliseren FISH en automatisch scoren

Transcriptie

1 igitaliseren FH en automatisch scoren r. lise van der ogt Klinisch moleculair bioloog in de pathologie (in opleiding) Universitair Medisch Centrum roningen / Moleculaire Pathologie Pathologie Friesland / Moleculaire iagnostiek WMP 8 e Moleculaire dag Conflict of interest lise van der ogt: Meeting travel expenses reimbursed upervised digital FH H2 validation: Unrestricted grant covering reagents (no influence on study design, analysis, conclusions and writing of the paper) Company: Menarini Benelux Menarini Benelux 31 januari 2014 igitaliseren FH: hoe werkt dat? Welke systemen en analyse modulen zijn er? iet meer handmatig scoren maar automatisch: hoe werkt dat? igitalisering FH H2neu: validatie studie Vergelijken handmatige en automatische procedure igitaliseren FH: hoe werkt dat? - opstelling: o.a. digitale microscoop - scannen coupe - instellen live beeld - Z-stack acquisitie - foto s FH coupes 1

2 pstelling () pstelling () - gemotoriseerde microscoop: verplaatsing tafel switchen objectieven / filters - filters voor FH acquisitie (b.v. P / groen / rood) -objectieven (4x / 10x / 20x / 40x / 100x) - monochroom camera lichtbron digitale microscoop aansturing / analyse can FH coupe + inzoomen: geselecteerd gebied patholoog nstellen live beeld (): - P / groen / rood filter (exposure) pre-scan (4x) live beeld (100x) 2

3 nstellen live beeld (): - Vlaggen zetten foto betreffende gebied Z-stack acquisitie Combinatie beelden van verschillende niveaus overlay klein / groot gebied Z-stack acquisitie: spots op verschillende niveaus zichtbaar Z-stack overlay Z-stack acquisitie: 3 filters P (live) overlay = foto bewerking achtergrond foto pecreen pecrange overlay 3 filters 3

4 Foto geselecteerd gebied rchiveren foto s (overlay) FH coupes H2neu probe klein groot geen amplificatie amplificatie rchiveren foto s (overlay) FH coupes rchiveren foto s (overlay) FH coupes ranslocatie probe ranslocatie probe c-myc break apart c-myc/gh fusie K break apart K break apart breuk geen fusie breuk geen breuk polysomie 4

5 rchiveren foto s: training beoordelen FH patronen rchiveren foto s: vastleggen kwaliteitscontrole ormaal weefsel translocatie probe breuk patronen ormaal weefsel translocatie probe bepalen afkapwaarden = breuk = breuk cmyc b.a. = 100 kernen # positieve kernen nalist: K C B afkapwaarde = 14,7% (= gemiddelde + 3x ) igitaliseren FH coupes foto s Welke systemen en analyse modulen zijn er? -ight fluo 5 platform (5 coupes of 200 coupe-lader) - digitaliseren FH coupes foto s - automatisch scoren FH Y M -riol capture & analysis (1 coupe of 200 coupe-lader) - scanning platform (10 coupes of 120 coupe-lader) Pannoramic scanners -250 Flash (250 coupes) -can (150 coupes) -Midi (12 coupes) BioView uet-3 scanner (50 coupe-lader) ens capture & analysis (9 coupes of 81 coupe-lader) 5

6 Y M U utomatisch scoren -ight analyse module (amplificatie H2/neu / translocatie K FH) -riol (klinisch gevalideerd H2/neu FH Pathvysion / translocatie H) -CytoVision software (amplifcatie / translocatie H) FHQuant module (amplificatie / translocatie H) -uet-olo workstation (H2/neu FH / translocatie H) -ccord (1 coupe; H2/neu FH / translocatie H) -egato (microscoop uitbreidingsset) FHView / potscan (H2/neu FH / K FH / UroVysion) iet meer handmatig scoren maar automatisch: hoe werkt dat? - -ight FH analyse modules - automatische nucleus selectie - spot detectie - spot telling - checken / correctie issuetudio software (H) Klinische validatie door laboratoria verzicht -ight FH H2 module -ight FH analyse module: foto s / objectieven foto s hulpknoppen B hulpknoppen foto s (overlay) objectieven analyse foto klein of groot vergroting selectie gebied 6

7 -ight FH analyse module: hulpknoppen -ight FH analyse module: score + uitslag B preview switchen filters + nucleus B H2neu K barcode aan/uit nucleus selectie - nucleus opslaan analyse per nucleus +/- spot foto opslaan galerij nucleus selectie Z-stack B utomatische nucleus selectie + spot detectie H2neu utomatische nucleus selectie + spot detectie geen amplificatie amplificatie 7

8 B Checken en correctie: nucleus selectie 100x objectief 2x inscannen: 2 foto s 2 onafhankelijke beoordelaars Checken analyse + of - nucleus herberekening ratio -ight FH H2 module B utomatische nucleus selectie + spot detectie: FH K breuk Y M spot telling en uitslag U score richtlijn: ratio H2 en CP17 signalen ratio 2.2 amplified 8

9 Checken analyse: translocatie FH -ight FH K module B afstand tussen signalen bepalend Y spot telling en uitslag M U score richtlijn: positief = K-breuk P Validatie moleculaire diagnostiek: FH H2neu mamma tumoren igitaliseren HV pilot: FH translocaties lymfomen n samenwerking UMC: standaardiseren scoren FH translocaties V Moleculaire diagnostiek: FH H2neu mamma tumoren volledig automatisch procedure automatische FH kleuring (Bond, eica) digitale analyse/automatisch scoren (-ight, Menarini) bepalen concordantie -handmatig FH kleuring + score (bbott) -automatisch FH kleuring + score (eica + -ight) 9

10 eica FH H2 kleuring igitale analyse m.b.v. -ight platform V - Bond systeem overnacht kleuring V - eica H2 FH kit probes overeenkomstig handmatige PathVysion kit bbott H2 probe: pectrumrange (17q11.2-q12) CP17 probe: pectrumreen (centromeer regio; 17p11.1-q11.1) 1) digitale foto s 2) gesuperviseerde automatische analyse M H Paraffine coupes (4 µm) invasieve mamma tumoren technische validatie tissue microarray n = 328 (2,3) klinische validatie resecties / biopten n = 100 (1) Vergelijking - eica FH automatisch - bbott FH/K HC handmatig U echnische validatie: automatisch vs handmatig n = 328 (HC-/+/++/+++) Concordant 98.8% (κ = 0.94) Klinische validatie: automatisch vs handmatig n = 50 (HC-/+/++/+++) Concordant 100% n = 50 (HC++) Concordant 93.8% (κ = 0.88) 10

11 utomatische FH H2 procedure: kleuring + analyse FH H2 analyse: digitaliseren en beoordelen inds oktober 2012 heden 4x 10x 20x 100x ondzendingen: KM oktober 2012 / oktober 2013 ordiqc oktober 2012 / februari 2013 / oktober 2013 pre-scan pre-screen coupe 2 foto s per analist K 100% score consensus K beoordeling autorisatie KMBP autorisatie patholoog FH H2 analyse: beoordelen beoordeling autorisatie KMBP autorisatie patholoog Conclusie K 2 analisten moleculaire uitslag uitslag -nummer (bijlage M) (M-nummer M; (rubriek moleculaire P conclusie -nummer) en M conclusie) M-nummer: -nummer: autorisatie autorisatie KMBP patholoog K tandaardisatie van de H2neu bepaling kan worden bereikt met het toevoegen van gesuperviseerde automatische digitale analyse aan automatisch kleuren. e combinatie van het eica FH systeem met het -ight digitale scan platform is een geschikte methode voor het bepalen van de H2neu status in de klinische praktijk voor patiënten met borstkanker. 11

12 M V Vergelijken handmatige en automatische procedure Handmatig utomatisch ijd Kleuring coren + ++ (archief) Kosten Kleuring + (deel coupe) ++ (totale coupe) igitaliseren nalisten 2 2 Herbeoordeling lastig optimaal (zelfde gebied) Fouten ++ + tandaardisatie er overweging: FH is lastige bepaling; complexe beoordeling (meerdere analisten) tandaardiseren d.m.v. digitaliseren helpt; -herbeoordeling mogelijk op hetzelfde gebied -uitslag integreren in laboratorium management systeem Kwaliteit borgen: -validatie nieuwe methoden -deelname rondzendingen Pathologie Friesland, eeuwarden Moleculaire iagnostiek obby Kibbelaar (M patholoog) d chuuring (KMBP) M team - eborah Kuperus - Jan van etten - Jelle Conradie Marius van den Heuvel (patholoog) Universitair Medisch Centrum roningen Pathologie, Moleculair iagnostiek d chuuring (KMBP) M team Bert van der Vegt (patholoog) Bedankt voor uw aandacht! sala klinieken, Zwolle Pathologie van Boers (patholoog) Menarini Benelux e.van.der.logt@pathologiefriesland.nl e.m.j.van.der.logt01@umcg.nl 12