Resultaten Moleculaire Pathologie ronde Additionele moleculaire testen bij MLH1-negatieve tumoren met Lynch syndroom vraagstelling

Transcriptie

1 Resultaten Moleculaire Pathologie ronde Additionele moleculaire testen bij MLH1-negatieve tumoren met Lynch syndroom vraagstelling Albertina Dirkx-van der Velden & Ina Geurts-Giele, KMBP afdeling Pathologie Erasmus MC, Rotterdam Week van de pathologie

2 Disclosure belangen spreker (potentiële) belangenverstrengeling Voor bijeenkomst mogelijk relevante relaties met bedrijven Geen / Zie hieronder Bedrijfsnamen

3 Flowchart voor moleculaire diagnostiek van Lynch syndroom

4 Oncoline richtlijn diagnostische test LS (per ) CRC < 70 IHC MMR eiwitten MSI analyse bij twijfel IHC of sterke verdenking LS MLH1 deficiëntie bij patiënten tussen de Somatische hypermethylering MLH1 promoter (N en T testen) -BRAF mutatie-analyse heeft mindere voorspellende waarde LS MLH1 deficiëntie zonder MLH1 hypermethylering MSH2, MSH6 of PMS2 deficiëntie -> klinische genetica CRC < 40 CRC > 70 Altijd verwijzing naar klinische genetica overwegen Alleen verwijzen indien zeer belaste familie-anamnese

5 Rondzending Drie casus met een adenocarcinoom van het colon, MSI fenotype met afschakeling van MLH1 en PMS2. Leeftijd patienten tussen de jaar. ->uitvoeren standaard in de diagnostiek gebruikte additionele testen, om te bepalen of doorverwijzing naar de klinische genetica is geïndiceerd. Vragen -MLH1 promoter gemethyleerd? -BRAF V600E? -Kans op Lynch syndroom? -Verwijzing naar klinische genetica?

6 Uitslagen rondzending 10 laboratoria hebben meegedaan 6 MHL1 promoter methylering 4 MLH1 promoter methylering + BRAF mutatie analyse Scores: Bij alle vragen iets ingevuld (max 24 punten): 20 (4) Bij drie vragen iets ingevuld (max 18 punten): 17 (1), 14 (4), 11 (1)

7 Uitslag Casus C Methylering BRAF mutatie Kans op LS Verwijzing KGEN Methyleringtest MS-MLPA, MRC-Holland Methylerings specifieke PCR, LDT Anders commercieel (Pyromark) Anders, LDT (MS-HRM) BRAF Pyro sequencing Anders (PGM, MLPA)

8 Uitslag Casus B Methylering BRAF mutatie Kans op LS Verwijzing KGEN Methyleringtest MS-MLPA, MRC-Holland Methylerings specifieke PCR, LDT Anders commercieel (Pyromark) Anders, LDT (MS-HRM) BRAF Pyro sequencing Anders (PGM, MLPA)

9 Uitslag Casus A Methylering BRAF mutatie Kans op LS Verwijzing KGEN Methyleringtest MS-MLPA, MRC-Holland Methylerings specifieke PCR, LDT Anders commercieel (Pyromark) Anders, LDT (MS-HRM) BRAF Pyro sequencing Anders (PGM, MLPA)

10 Casus A - kiembaanmethylering Tumor

11 Casus A - kiembaanmethylering Normaal

12 Casus A Indien geanalyseerd wordt of afwezigheid van de kernkleuring van MLH1 en PMS2 veroorzaakt wordt door hypermethylering van de MLH1 promoter wordt er geadviseerd om DNA uit zowel tumor als normaal weefsel te analyseren. Met het testen van normaal DNA kan eventuele hypermethylering van de MLH1 promoter in de kiembaan worden aangetoond.

13 Casus A normaal weefsel Coupe 1 Coupe 23 Coupe 30

14 Uitslag Casus D, educational Methylering BRAF mutatie Kans op LS Verwijzing KGEN Methyleringtest MS-MLPA, MRC-Holland Methylerings specifieke PCR, LDT Anders commercieel (Pyromark) Anders, LDT (MS-HRM) BRAF Pyro sequencing Anders (PGM, MLPA)

15 Casus D, educational 48-jarige patiënt met adenocarcinoom van het colon MLH1 PMS2 Normaal MSH2 MSH6 Tumor

16 Casus D, educational Tumor

17 Casus D, educational Normaal

18 Casus D, educational MSH2 & MSH6 (Chr2) MLH1 (Chr3) PMS2 (Chr7) Tumor

19 Casus D, educational Tumor

20 Casus D, educational

21 Casus D, educational opmerkingen deelnemers Valt u iets op aan de resultaten? Zo ja, wat? Heeft u hiervoor een verklaring? 3/10 labs -> mogelijk een deletie van MLH1 Methyleringtest MS-MLPA, MRC-Holland Methylerings specifieke PCR, LDT Anders commercieel (Pyromark) Anders, LDT (MS-HRM)

22 Casus D, educational opmerkingen deelnemers Valt u iets op aan de resultaten? Zo ja, wat? Heeft u hiervoor een verklaring? 3/10 labs -> mogelijk een deletie van MLH1 Microdissectie nodig in verband met verschillende componenten

23 Casus D, educational MLH1 MLH1

24 Casus D, educational MLH1 FISH

25 Verslaglegging casus B en C WMDP-richtlijn verslaglegging moleculaire diagnostiek in de pathologie Standaard teksten rapportage (oncoline) De aanwezigheid van hypermethylering van de MLH1 promoter verklaart de afwezigheid van de kernkleuring van MLH1 en PMS2 en maakt de kans op Lynch syndroom (de meest voorkomende vorm van erfelijke darmkanker) klein. Desondanks kan er reden zijn verwijzing naar een klinisch geneticus te overwegen wanneer de familieanamnese hier aanleiding toe geeft of wanneer er sprake is van polyposis. De afwezigheid van hypermethylering van de MLH1 promoter in een MLH1- deficiente tumor is reden om nader onderzoek naar aanleg voor erfelijke darmkanker en daarmee verwijzing naar een klinisch geneticus te overwegen.

26 Verslaglegging casus B en C V +/- X Naam lab 9? Titel & omschrijving test 6 3 (reden test ontbreekt/ incorrect) Uitgangsmateriaal Nummer 8 1 (onvolledig) Tumorcelpercentage, door wie gecontroleerd Geteste afwijkingen 9 Soort (FFPE) 5 4 % 6 3 Patholoog 4 5 Gebruikte methode Methode 8 1 (onvolledig) Resultaat (volgens standaardnomenclatuur) Sensitiviteit 3 1 (onvolledig) (geen uitslag normaal) Opmerkingen 1 (sample B: geen normaal getest) 8 Conclusie Analytisch 9 Ondertekening/ autorisatie 9? Klinisch 7 2 (geen opmerking over verwijzing KGEN indien gemethyleerd)

27 Conclusies Alle deelnemende laboratoria testen MLH1 promoter hypermethylering Alle deelnemende laboratoria genereren de juiste uitslag Normaal weefsel wordt niet altijd getest Verslaglegging divers