WETENSCHAPPELIJK INSTITUUT VOLKSGEZONDHEID COMMISSIE VOOR KLINISCHE BIOLOGIE DIENST VOOR LABORATORIA VAN KLINISCHE BIOLOGIE COMITE VAN DESKUNDIGEN JAARRAPPORT 2010 EXTERNE KWALITEITSEVALUATIE VOOR ANALYSEN KLINISCHE BIOLOGIE MOLECULAIRE BIOLOGIE Artikel 33 bis Hemato-oncologie WIV-10/Moleculaire Biologie: Hem-oncologie/3 Dienst Klinische Biologie J. Wytsmanstraat, 14 1050 Brussel België www.wiv-isp.be
ISSN: 0778-8363 COMITE VAN EXPERTEN Naam Instelling Email Marie-Paule Emonds Bloed transfusie- Rode Kruis Marie-Paule.emonds@rodekruis.be P. Heimann Hôpital Erasme pheimann@ulb.ac.be P. In tveld VUB, UZ Brussel intveld@vub.ac.be P. Vandenberghe UZ Leuven Peter.vandenberghe@uzleuven.be B. Maes VJZ Hasselt Brigitte.maes@virgajesse.be A. Criel AZ Brugge Arnold.criel@azbrugge.be Bernard China (Coördinator) M. Van Blerk (vervanger coördinator) ISP-WIV ISP-WIV b.china@wiv-isp.be mvanblerk@wiv-isp.be Vergadering expertencomité: 09/12/2011 Toestemming verspreiding rapport: 23/12/2011 Door Bernard China: Enquêtecoördinator Alle rapporten zijn tevens te raadplegen op onze website: http://www.wiv-isp.be/clinbiol/bckb33/activities/external_quality/rapports/_nl/rapports_annee.htm Institut Scientifique de Santé Publique Wetenschappelijk Instituut Volksgezondheid, Brussel 2010. Dit rapport mag niet gereproduceerd, gepubliceerd of verdeeld worden zonder akkoord van het WIV-ISP. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 2/20
INHOUDSTAFEL 1. Inleiding 4 2. OPSPOREN VAN DE JAK2 V617F MUTATIE 5 2.1. Jak2 1001 5 2.2. Jak2 0902 5 2.3. Details 6 2.4. KWANTIFICATIE 7 2.5. Methoden 7 3. IgH/TCR 8 3.1. IgH 1001 8 3.2. IGH 1002 9 4. BCR-ABL KWANTITATIEF 10 4.1. Enquête BCRQ 1001 10 4.2. Enquête BCRQ 1002 10 4.3. Resultaten 10 5. Chimerisme 13 5.1. CHIM 1001 13 5.2. CHIM 1002 13 5.3. Resultaten 13 6. ACUTE MYELOIDE LEUKEMIE (AML) 15 6.1. BCR-ABL 15 6.2. Inv (16) 16 6.3. t(8;21) 17 6.4. t(15 ;17) (PML-Rar) 18 7. Her2 19 7.1. CYH-A 19 7.2. CYH-B 20 Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 3/20
1. INLEIDING Voor de enquêtes moleculaire biologie sector hemato oncologie van het artikel 33 bis van de RIZIV nomenclatuur hebben wij in 2010 samengewerkt met het programma «Molecular diagnosis of haematological malignancies programme» van UK NEQAS. De levering van de stalen, het inbrengen van de resultaten en de productie van de individuele en globale rapporten vielen onder de verantwoordelijkheid van Dr. Jane Holden van de Universiteit van Sheffield in het Verenigd Koninkrijk. En 2010, werden er 10 enquêtes georganiseerd: Enquête 1 : Jak2 1001 afgesloten op 05/02/2010 Enquête 2 : IgH 1001 afgesloten op 19/02/2010 Enquête 3 : BCRQ 1001 afgesloten op 05/03/2010 Enquête 4 : Chem 1001 afgesloten op 14/04/2010 Enquête 5 : AML 1002 afgesloten op 16/04/2010 Enquête 6 : BCRQ 1002 afgesloten op 23/07/2010 Enquête 7 : AML 1002 afgesloten op 30/07/2010 Enquête 8 : Jak2 1002 afgesloten op 17/09/2010 Enquête 9 : IgH 1002 afgesloten op 29/10/2010 Enquête 10 : Chem 1002 afgesloten op 10/12/2010 Dit rapport is een samenvatting van de resultaten van de Belgische laboratoria tijdens het jaar 2010. Het is gebaseerd op de gegevens die wij ontvingen op het WIV. Het is dus mogelijk dat er bepaalde informatie ontbreekt. Anderzijds, voor het opsporen van de amplificatie van het Her2-gen door FISH in het kader van borsttumoren die ook deel uitmaken van het artikel 33 bis, hebben we samengewerkt met CAP in de Verenigde Staten die de stalen leveren en de rapporten aanmaken. Twee enquêtes werden georganiseerd in 2010: Enquête 1 : CYH-A afgesloten op 30/06/2010 Enquête 2 : CYH-B afgesloten op 21/12/2010 Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 4/20
2. OPSPOREN VAN DE JAK2 V617F MUTATIE In 2010 werden er 2 enquêtes georganiseerd voor het opsporen van de JAK2 V617F mutatie. 2.1. JAK2 1001 Totaal aantal deelnemers : 117 Aantal Belgische deelnemers : 17 (14,5%) Tijdens deze enquête moesten er twee gelyofiliseerde stalen geanalyseerd worden: - het staal 106 dat positief was voor de mutatie V617F (37,2%) - het staal 107 dat positief was voor de mutatie V617F (9,2%). Voor de stalen 106 en 107, hebben de 17 Belgische laboratoria een correct antwoord gegeven. 2.2. JAK2 0902 Totaal aantal deelnemers: 123 Aantal Belgische deelnemers: 15 (12,2%) Tijdens deze enquête moesten er twee gelyofiliseerde stalen geanalyseerd worden: - het staal 108 dat ongeveer 26,2% cellen met de mutatie bevatte - het staal 109 dat 6,6% cellen met de mutatie bevatte. De 15 Belgische laboratoria hebben in de twee stalen de mutatie opgespoord. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 5/20
2.3. DETAILS Tabel 1. Resultaten van de Belgische laboratoria voor het opsporen van de JAK2 V617F mutatie. LAB 106 107 108 109 METHOD MUT WT MUT WT MUT WT MUT 41276 Y Y Y Y Y Y Y Y RFLP + SEQUENCING 41279 Y Y Y y Y Y Y Y ALLELE SPECIFIC real time PCR IPSOGEN 41283 Y Y Y Y Y Y Y Y pyrosequencing + in house real time PCR 41412 Y Y Y Y Y Y Y Y RFLP 41415 Y Y Y Y Y Y Y Y RFLP 41414 Y Y Y Y Y Y Y Y allele specific real time PCR mutascreen Ipsogen 41416 Y Y Y Y Y Y Y Y Melting curve analysis 41417 Y ND Y ND Y ND Y ND Allele specific real time PCR mutascreen Ipsogen 41420 Y ND Y ND Y ND Y ND LNA PCR Sidon et al., 2006, Clin Chem, 52, 1436 41423 Y Y Y Y Y Y Y Y real time PCR. Blood, 2006, 108: 1865-1867 41425 Y Y Y Y Y Y Y Y real time PCR Blood, 2006, 107, 3676 41426 Y ND Y ND ND ND ND ND LNA PCR Clin Chem,2006, 52, 1436 41427 Y Y Y Y Y Y Y Y Allele specific real time PCR IPSOGEN Mutaquant 41428 Y Y Y Y ND ND ND ND LNA PCR Clin Chem,2006, 52, 1436 41437 Y Y Y Y Y Y Y Y allele specific PCR Lancet,2005, 365: 1054-1061 41438 Y Y Y Y Y Y Y Y Allele specific real time PCR IPSOGEN Mutaquant 41470 Y ND Y ND Y ND Y ND LNA PCR Clin Chem,2006, 52, 1436 ND : not determinated MUT : mutatie WT : wild type WT Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 6/20
2.4. KWANTIFICATIE Voor de stalen 106 en 107 hebben we kwantitatieve resultaten ontvangen van 5 Belgische laboratoria terwijl er 36 laboratoria kwantitatieve resultaten terugstuurden. Voor de stalen 108 en 109 hebben we de kwantitatieve resultaten ontvangen van 2 Belgische laboratoria terwijl er 37 laboratoria kwantitatieve resultaten terugstuurden. Tabel 2. Evaluatie van de kwantitatieve resultaten. Lab sample res Median P75 P25 H SD LOF LIF UIF UOF Z 41414 106 40 37,2 43,7 25 18,7 14,0 0 9,2 65,3 93,3 0,2 41428 106 22,2 37,2 43,7 25 18,7 14,0 0 9,2 65,3 93,3-1,1 41438 106 23,75 37,2 43,7 25 18,7 14,0 0 9,2 65,3 93,3-1,0 41283 106 34,4 37,2 43,7 25 18,7 14,0 0 9,2 65,3 93,3-0,2 41427 106 41 37,2 43,7 25 18,7 14,0 0 9,2 65,3 93,3 0,3 41414 107 8,75 9,2 14 7,25 6,75 5,0 0 0 19,3 29,5-0,1 41428 107 5,1 9,2 14 7,25 6,75 5,0 0 0 19,3 29,5-0,8 41438 107 2,45 9,2 14 7,25 6,75 5,0 0 0 19,3 29,5-1,4 41283 107 7,5 9,2 14 7,25 6,75 5,0 0 0 19,3 29,5-0,3 41427 107 13 9,2 14 7,25 6,75 5,0 0 0 19,3 29,5 0,8 41437 108 26,5 26,2 34 18,3 15,7 11,7 0 0 49,8 73,3 0,0 41279 108 14 26,2 34 18,3 15,7 11,7 0 0 49,8 73,3-1,0 41437 109 7 6,6 8,9 4 4,9 3,7 0 0 14,0 21,3 0,1 41279 109 4 6,6 8,9 4 4,9 3,7 0 0 14,0 21,3-1 Res : resultaat ; P75=percentiel 75, P25=percentiel 25 ; H=P75-P25 ; SD=standaarddeviatie=H/1,3399 ; LOF=lower outer fence ; LIF=lower inner fence : UIF=Upper inner fence ; UOF=upper outer fence Opmerking: De bepaling van het aanwezige mutatiepercentage is niet per se relevant vanuit een klinisch standpunt. 2.5. METHODEN Tabel 3. De methoden die voornamelijk gebruikt werden door de laboratoria. Method Total Belgian labs allele specific PCR 58 (40,3%) 5 (21,7%) ARMS PCR 15 (10,4%) 0 Real time PCR 47 (32,6%) 12 (52,2%) Metling curve analysis 12 (8,3%) 1 (4,3%) RFLP 5 (3,5%) 3 (13,0%) Pyrosequencing 2 (1,4%) 1 (4,3%) Direct sequencing 2 (1,4%) 1 (4,3%) Total 144 23 De real time PCR methode werd het meest gebruikt door de Belgische laboratoria (52,2%). Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 7/20
3. IGH/TCR Het doel van deze enquête is het controleren of de B of T lymfocytenpopulatie aanwezig in het staal een klonaal karakter vertonen of niet. Twee enquêtes werden georganiseerd 2010: IgH 1001 en IgH 1002. 3.1. IGH 1001 Staal: 1 ml vers bloed van een patiënt met een chronische lymfoïde leukemie (CLL). Verwacht resultaat: klonaal staal Het totaal aantal deelnemers bedroeg 80 waarvan 15 Belgen (18,75%). Tabel 4. Resultaten bekomen door de Belgische laboratoria. LAB METHOD IgH FR1 IgH FR2 IgH FR3 Overall IgH result 41276 PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal 41279 PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal 41283 PCR SIMPLEX Oligoclonal Not tested Oligoclonal Oligoclonal 41412 PCR MULTIPEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal 41414 KIT IDENTITYCLONE IGH Clonal Clonal Clonal Clonal GENE CLONALITY ASSAY OF INVIVOSCRIBE 41415 MULTIPLEX PCR FOR FR1 Clonal Clonal Clonal Clonal AND FR2 PCR SIMPLEX FOR FR3 41416 KIT IDENTITYCLONE IGH Clonal Clonal Clonal Clonal GENE CLONALITY ASSAY OF INVIVOSCRIBE 41417 PCR MULTIPLEX Clonal Not tested Polyclonal Clonal 41420 PCR MULTIPLEX Clonal Clonal Clonal Clonal 41423 PCR MULTIPLEX Clonal Clonal Clonal Clonal 41425 PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal 41426 KIT IDENTITYCLONE IGH Clonal Clonal clonal Clonal GENE CLONALITY ASSAY OF INVIVOSCRIBE 41428 PCR SIMPLEX Not Not amplified No amplified No amplified amplified 41437 PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal 41438 PCR MULTIPLEX BIOMED Not returned Not returned Not returned Not returned Consensus Clonal Clonal Clonal Clonal Eén laboratorium heeft geen resultaten teruggestuurd, één laboratorium kon het DNA niet amplificeren, 12 laboratoria hebben «Clonal» en één laboratorium heeft Oligoclonal geantwoord. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 8/20
3.2. IGH 1002 De enquête bestond uit 1 ml vers bloed van een patiënt met B-CLL. Het verwachte resultaat was: Clonal Het aantal deelnemende laboratoria bedroeg 87 waarvan 15 Belgen (17,2%). Tabel 5. Resultaten bekomen door de Belgische laboratoria. LABS METHOD IgH FR1 IgH FR2 Overall IgH IgH FR3 result 41276 PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal 41279 PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal 41283 PCR SIMPLEX Clonal Not tested Clonal Clonal 41412 PCR MULTIPEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal 41414 KIT IDENTITYCLONE IGH GENE Clonal Clonal Clonal Clonal CLONALITY ASSAY OF INVIVOSCRIBE 41415 MULTIPLEX PCR FOR FR1 AND FR2 Clonal Clonal Clonal Clonal AND PCR SIMPLEX FOR FR3 41416 KIT IDENTITYCLONE IGH GENE Clonal Clonal Clonal Clonal CLONALITY ASSAY OF INVIVOSCRIBE 41417 PCR MULTIPLEX 41420 PCR MULTIPLEX Clonal Clonal Clonal Clonal 41423 PCR MULTIPLEX Clonal Clonal Clonal Clonal 41425 PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal 41426 KIT IDENTITYCLONE IGH GENE Clonal Clonal clonal Clonal CLONALITY ASSAY OF INVIVOSCRIBE 41428 PCR SIMPLEX clonal Not tested Clonal clonal 41437 PCR MULTIPLEX BIOMED polyclo Clonal Clonal Clonal nal 41438 PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal Consensus Clonal Clonal Clonal Clonal Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 9/20
4. BCR-ABL KWANTITATIEF Het doel is om de t(9;22)(q34;q11) translocatie van het Philadelphia chromosoom op te sporen en te kwantificeren door het hybride BCR ABL gen te kwantificeren. Twee enquêtes vonden plaats in 2010 : BCRQ 1001 en BCRQ 1002. 4.1. ENQUÊTE BCRQ 1001 Deze enquête bevatte 2 stalen. Het staal 106 bestond uit (negatieve) HL60 cellen met ongeveer 0,17% (positieve) K562 cellen. Het staal 107 bestond uit (negatieve) HL60 cellen met 23,34% (positieve) K562 cellen. Het totaal aantal deelnemers bedroeg 102. Het aantal Belgische deelnemers bedroeg 16 (15,7%). 4.2. ENQUÊTE BCRQ 1002 Deze enquête bevatte 2 stalen. Het staal 108 bestond uit (negatieve) HL60cellen met ongeveer 12% (positieve) K562 cellen. Het staal 109 bestond uit (negatieve) HL60cellen met 0,25% (positieve) K562 cellen. Het totaal aantal deelnemers bedroeg 107. Het aantal Belgische deelnemers bedroeg 16 (17,39%). 4.3. RESULTATEN Tabel 6. Resultaten van de Belgische deelnemers voor de stalen 106, 107, 108 en 109. LAB 106 107 108 109 METHOD % % % % Control gene mutation mutation mutation mutation 41276 ABL 0.14 23.84 7.44% 0.19% Real time PCR in house 41279 ABL 1.21 121 25.57% 0.91% Real time PCR in house 41283 b2-microglobuline 0.01 2.5 1.1% 0.07% Real time PCR ABSQUANT 41412 ABL 0.07 11 7.6% 0.2% Real time PCR in house 41414 ABL Not detected 37,3 12.43% Not detected Real time PCR Ipsogen 41415 ABL 0.2 21.5 8.44% 0.1% Real time PCR in house EAC 41416 ABL 0.25 45.8 20% 0.35% Real time PCR in house EAC 41420 ABL 0.17 24 14.3% 0.25% Real time PCR in house EAC 41423 ABL 0.33 25 40% 0.62% Real time PCR in house 41425 ABL 0.14 26.4 4.4% 0.6% Real time PCR in house EAC 41426 MGUS 0.086 29.7 11% 0.15% Real time PCR in house 41427 ABL 0.21 42.1 19.6% 0.64% Real time PCR Ipsogen 41428 ABL 0.27 33 16% 0.21% Real time PCR in house EAC 41437 b2-microglobuline 0.1 15.5 7.7% 0.07% Real time PCR in house Not Not 41438 ABL returned returned 71.6% 0.09% Real time PCR in house EAC 41470 ABL 0.1 27.9 27.2% 0.37% Real time PCR in house EAC Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 10/20
Tabel 7. Evaluatie van de kwantitatieve resultaten van de Belgische laboratoria. Lab Sple IQC res Median P75 P25 H SD LOF LIF UIF UOF Z 41276 106 ABL 0,14 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785-0,2 41279 106 ABL 1,21 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785 6,9 41412 106 ABL 0,07 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785-0,7 41414 106 ABL 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785 41415 106 ABL 0,2 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785 0,2 41416 106 ABL 0,25 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785 0,5 41420 106 ABL 0,17 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785 0,0 41423 106 ABL 0,33 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785 1,1 41425 106 ABL 0,14 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785-0,2 41426 106 ABL 0,086 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785-0,6 41427 106 ABL 0,21 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785 0,3 41428 106 ABL 0,27 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785 0,7 41438 106 ABL 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785-1,1 41470 106 ABL 0,1 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785-0,5 41283 106 B2M 0,01 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0 0 0,375 0,785-1,1 41437 106 B2M 0,1 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0,375 0,785-0,5 Lab Sple IQC res Median P75 P25 H SD LOF LIF UIF UOF Z 41276 107 ABL 23,84 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6 0,0 41279 107 ABL 121 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6 6,1 41412 107 ABL 11 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6-0,8 41414 107 ABL 37,3 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6 0,9 41415 107 ABL 21,5 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6-0,1 41416 107 ABL 45,8 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6 1,4 41420 107 ABL 24 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6 0,0 41423 107 ABL 25 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6 0,1 41425 107 ABL 26,4 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6 0,2 41426 107 ABL 29,7 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6 0,4 41427 107 ABL 42,1 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6 1,2 41428 107 ABL 33 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6 0,6 41438 107 ABL 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6 41470 107 ABL 27,9 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6 0,3 41283 107 B2M 2,5 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6-1,3 41437 107 B2M 15,5 23,34 36,28 14,86 21,42 15,986 0 0 55,47 87,6-0,5 Sple: Sample; IQC: gen gebruikt als controle; res : resultaat ; P75 : percentiel 75 ; percentiel 25 ; H=P75-P25 ; SD : standaarddeviatie=h/1,3399 ; LOF=lower outer fence ; LIF=lower inner fence : UIF=Upper inner fence ; UOF=upper outer fence. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 11/20
Tabel 7. vervolg Lab Sple IQC res Median P75 P25 H SD LOF LIF UIF UOF Z 41276 108 ABL 7,44 12,43 19,1 8,2 10,9 8,135 0 0 28,78 45,13-0,6 41279 108 ABL 25,57 12,43 19,1 8,2 10,9 8,135 0 0 28,78 45,13 1,6 41412 108 ABL 7,6 12,43 19,1 8,2 10,9 8,135 0 0 28,78 45,13-0,6 41414 108 ABL 12,43 12,43 19,1 8,2 10,9 8,135 0 0 28,78 45,13 0,0 41415 108 ABL 8,44 12,43 19,1 8,2 10,9 8,135 0 0 28,78 45,13-0,5 41416 108 ABL 20 12,43 19,1 8,2 10,9 8,135 0 0 28,78 45,13 0,9 41420 108 ABL 14,3 12,43 19,1 8,2 10,9 8,135 0 0 28,78 45,13 0,2 41423 108 ABL 40 12,43 19,1 8,2 10,9 8,135 0 0 28,78 45,13 3,4 41425 108 ABL 4,4 12,43 19,1 8,2 10,9 8,135 0 0 28,78 45,13-1,0 41426 108 ABL 11 12,43 19,1 8,2 10,9 8,135 0 0 28,78 45,13-0,2 41427 108 ABL 19,6 12,43 19,1 8,2 10,9 8,135 0 0 28,78 45,13 0,9 41428 108 ABL 16 12,43 19,1 8,2 10,9 8,135 0 0 28,78 45,13 0,4 41438 108 ABL 71,6 12,43 19,1 8,2 10,9 8,135 0 0 28,78 45,13 7,3 41470 108 ABL 27,2 12,43 19,1 8,2 10,9 8,135 0 0 28,78 45,13 1,8 41283 108 B2M 1,1 2,15 6,58 1,03 5,55 4,142 0 0 10,475 18,8-0,3 41437 108 B2M 7,7 2,15 6,58 1,03 5,55 4,142 0 0 10,475 18,8 1,4 Lab Sple IQC res Median P75 P25 H SD LOF LIF UIF UOF Z 41276 109 ABL 0,19 0,25 0,38 0,17 0,21 0,157 0 0 0,565 0,88-0,38 41279 109 ABL 0,91 0,25 0,38 0,17 0,21 0,157 0 0 0,565 0,88 4,21 41412 109 ABL 0,2 0,25 0,38 0,17 0,21 0,157 0 0 0,565 0,88-0,3 41414 109 ABL 0,25 0,38 0,17 0,21 0,157 0 0 0,565 0,88 41415 109 ABL 0,1 0,25 0,38 0,17 0,21 0,157 0 0 0,565 0,88-0,96 41416 109 ABL 0,35 0,25 0,38 0,17 0,21 0,157 0 0 0,565 0,88 0,64 41420 109 ABL 0,25 0,25 0,38 0,17 0,21 0,157 0 0 0,565 0,88 0 41423 109 ABL 0,62 0,25 0,38 0,17 0,21 0,157 0 0 0,565 0,88 2,36 41425 109 ABL 0,6 0,25 0,38 0,17 0,21 0,157 0 0 0,565 0,88 2,23 41426 109 ABL 0,15 0,25 0,38 0,17 0,21 0,157 0 0 0,565 0,88-0,64 41427 109 ABL 0,64 0,25 0,38 0,17 0,21 0,157 0 0 0,565 0,88 2,49 41428 109 ABL 0,21 0,25 0,38 0,17 0,21 0,157 0 0 0,565 0,88-0,25 41438 109 ABL 0,039 0,25 0,38 0,17 0,21 0,157 0 0 0,565 0,88-1,35 41470 109 ABL 0,37 0,25 0,38 0,17 0,21 0,157 0 0 0,565 0,88 0,76 41283 109 B2M 0,07 0,061 0,07 0,046 0,024 0,018 0 0,025 0,097 0,133 0,5 41437 109 B2M 0,07 0,061 0,07 0,046 0,024 0,018 0 0,025 0,097 0,133 0,5 5 Z scores op 61 of 8,2% waren groter dan 3 waarvan 3 komende van hetzelfde laboratorium. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 12/20
5. CHIMERISME Het doel is het genetisch chimerisme na een beenmergtransplantatie op te sporen en te kwantificeren. Twee enquêtes werden georganiseerd in 2010 (CHIM 1001 en CHIM 1002). Het doel is het percentage van de donorcellen te bepalen in de post-transplantatie stalen. 5.1. CHIM 1001 De enquête bevatte 3 stalen van 1 ml perifeer bloed van respectievelijk : de donor, de receptor en een post-transplantatie staal (112). Het percentage van de donorcellen bedraagt ongeveer 90%. Totaal aantal deelnemers: 64 Aantal Belgische deelnemers: 9 (14,7%) 5.2. CHIM 1002 De enquête bevatte 4 stalen van 1 ml perifeer bloed van respectievelijk : de donor, de receptor en 2 post-transplantatie stalen (115 en 116). Het percentage van de donorcellen bedraagt ongeveer 78 en 61voor respectievelijk de stalen 115 en 116. Totaal aantal deelnemers: 68 Aantal Belgische deelnemers: 9 (14,5%) 5.3. RESULTATEN Tabel 8. Resultaten van de Belgische laboratoria voor de bepaling van het chimerisme. Lab Sample Result (%) Mean± SD Z Method 41279 112 88 88.8±2.14-0.37 41283 112 89.7 88.8±2.14 0.42 41412 112 90.3 88.8±2.14 0.7 AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI3100 Powerplex 16 (Promega) Powerplex 16 (Promega) Fragments analysis ABI3100 41414 112 87.7 88.8±2.14-0.51 AMpFlSTR profiler plus 41423 112 87.5 88.8±2.14-0.61 XY-FISH (Abbott-probes) 41426 112 Not returned 88.8±2.14 AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI 41428 112 88.8 88.8±2.14 0 Powerplex 16 (Promega) 41437 112 87.8 88.8±2.14-0.47 AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI310 41438 112 92,5 88.8±2.14 1.73 Powerplex 16 (Promega) Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 13/20
Tabel 8. Vervolg Lab Sample Result (%) M± SD Z Method 41279 115 82 78,7±3.7 0.89 AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI3100 41283 115 78.4 78,7±3.7-0.08 Powerplex 16 (Promega) 41412 115 78.7 78,7±3.7 0 Powerplex 16 (Promega) Fragments analysis ABI3100 41414 115 79.9 78,7±3.7 0.32 AMpFlSTR profiler plus 41415 115 78.2 78,7±3.7-0.13 AMpFlSTR profiler plus XL 41423 115 0 78,7±3.7 21.2 XY-FISH (Abbott-probes) 41426 115 84.4 78,7±3.7 1.54 AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI 41428 115 79.9 78,7±3.7 0.32 Powerplex 16 (Promega) 41437 115 78 78,7±3.7-0.19 AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI310 41438 115 81.9 78,7±3.7 0.86 Powerplex 16 (Promega) Tabel 8. Vervolg Labs Sample Result (%) M± SD Z Method 41279 116 66.6 61.00±3.7 1.5 AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI3100 41283 116 63.6 61.00±3.7 0.7 Powerplex 16 (Promega) 41412 116 62.5 61.00±3.7 0.4 Powerplex 16 (Promega) Fragments analysis ABI3100 41414 116 61.7 61.00±3.7 0.19 AMpFlSTR profiler plus 41415 116 60 61.00±3.7 0.27 AMpFlSTR profiler plus XL 41423 116 0 61.00±3.7-18.1 XY-FISH (Abbott-probes) 41426 116 67.2 61.00±3.7 1.67 AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI 41428 116 62.5 61.00±3.7 0.4 Powerplex 16 (Promega) 41437 116 59.8 61.00±3.7 0.32 AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI310 41438 116 60.8 61.00±3.7 0.05 Powerplex 16 (Promega) Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 14/20
6. ACUTE MYELOIDE LEUKEMIE (AML) Het doel is de belangrijkste mutaties, die voorkomen bij acute myeloïde leukemie (AML) op te sporen, met inbegrip van de BCR ABL mutatie, die reeds het onderwerp is van een aparte enquête. Twee enquêtes werden georganiseerd in 2010: AML 1001 en AML 1002. De stalen 106 en 108 bestonden uit 100% K562 cellen en men vroeg of de BCR-ABL mutatie aanwezig was. Het verwachte antwoord was: ja. De stalen 107 en 109 bestonden uit cellen in cultuur (niet gespecificeerd). De deelnemers dienden de aanwezigheid van de volgende mutaties te testen : inv(16) ; t(8 ;21) en t(5 ;17). De verwachte resultaten waren: Voor het staal 107 : inv(16) negatief; t(8 ;21) negatief en t(15 ;17) positief Voor het staal 109 : inv(16) negatief; t(8 ;21) positief en t(15 ;17) negatief a) Resultaten 6.1. BCR-ABL Tabel 9. Resultaten bekomen door de Belgische laboratoria voor het opsporen van de BCR ABL mutatie in de stalen 106 en 108. Labs parameter Sample result Sample Res Method comments 41276 BCR-ABL 106 Y 108 Y single PCR Ok 41279 BCR-ABL 106 Y 108 Y single PCR Ok 41283 BCR-ABL 106 Y 108 Y real time quantitative PCR Ok 41412 BCR-ABL 106 Y 108 Y Hemavision screen Ok 41414 BCR-ABL 106 Y 108 Y Nested+multiplex Ok 41415 BCR-ABL 106 Y 108 Y Ok 41416 BCR-ABL 106 Y 108 Y Ok 41417 BCR-ABL 106 Y 108 Y multiplex PCR Ok 41420 BCR-ABL 106 Y 108 Y real time quantitative PCR Ok 41423 BCR-ABL 106 Y 108 Y real time quantitative PCR Ok 41426 BCR-ABL 106 Y 108 Y real time quantitative PCR Ok 41427 BCR-ABL 106 Y 108 Y real time quantitative PCR Ok 41428 BCR-ABL 106 Y 108 Y Multiplex PCR Ok 41437 BCR-ABL 106 Y 108 Y real time quantitative PCR Ok 41438 BCR-ABL 106 Y 108 Y Nested PCR Ok 41470 BCR-ABL 106 Y 108 Y multiplex PCR Ok b) Evaluatie De 16 laboratoria hebben correct geantwoord. Hiervan hebben er 2 hun methode niet doorgegeven aan het WIV. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 15/20
6.2. INV (16) a) Resultaten Tabel 10. Resultaten bekomen door de Belgische laboratoria voor het opsporen van de inversie van het chromosoom 16 in de stalen 107 en 109. Labs parameter 107 109 method comments 41276 Inv(16) not tested not tested does not perform this test 41279 Inv(16) N N single PCR ok 41283 Inv(16) N N real time PCR ok 41412 Inv(16) N N multiplex PCRHemavison ok 41414 Inv(16) N N multiplex PCRHemavison Ok 41415 Inv(16) not tested not tested does not perform this test 41416 Inv(16) not tested not tested does not perform this test 41417 Inv(16) not tested not tested does not perform this test 41420 Inv(16) N N real time PCR ok 41423 Inv(16) N N multiplex nested PCR ok 41426 Inv(16) N N real time PCR ok 41427 Inv(16) not tested not tested does not perform this test 41428 Inv(16) N N nested PCR Ok 41437 Inv(16) N N multiplex PCR: Hemavison ok 41438 Inv(16) N N single PCR ok 41470 Inv(16) N N multiplex PCR ok b) Commentaar 11 laboratoria (68,75%) hebben resultaten doorgestuurd. Alle resultaten waren correct. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 16/20
6.3. T(8;21) a) Resultaten Tabel 11. Resultaten bekomen door de Belgische laboratoria voor het opsporen van de translocatie van de chromosomen 8 en 21 in de stalen 107 en 109. Labs parameter 107 109 method comments not 41276 t(8;21) tested not tested does not perform this test 41279 t(8;21) N Y single PCR Ok 41283 t(8;21) N Y real time PCR Ok 41412 t(8;21) N Y multiplex PCR: Hemavison Ok 41414 t(8;21) N Y multiplex PCR: Hemavison Ok not 41415 t(8;21) tested not tested does not perform this test 41416 t(8;21) not tested not tested does not perform this test 41417 t(8;21) not tested not tested does not perform this test 41420 t(8;21) N Y real time PCR Ok 41423 t(8;21) N Y nested multiplex RT-PCR Ok 41426 t(8;21) N Y PCR en temps réel Ok not 41427 t(8;21) tested not tested does not perform this test 41428 t(8;21) N Y multiplex PCR: Hemavison Ok 41437 t(8;21) N Y multiplex PCR: Hemavison Ok 41438 t(8;21) N Y single PCR Ok 41470 t(8;21) N Y multiplex PCR Ok b) Commentaar 11 laboratoria hebben resultaten doorgestuurd. Alle resultaten waren correct.. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 17/20
a) Resultaten 6.4. T(15 ;17) (PML-RAR) Tabel 12. Resultaten bekomen door de Belgische laboratoria voor het opsporen van de translocatie t(15 ;17) in de stalen 107 en 109. Labs Parameter 107 109 method comments 41276 t(15 ;17) not tested not tested does not perform this test 41279 t(15 ;17) Y N single PCR Ok 41283 t(15 ;17) Y N real time PCR Ok 41412 t(15 ;17) Y N multiplex PCR: Hemavison Ok 41414 t(15 ;17) Y N multiplex PCR: Hemavison Ok 41415 t(15 ;17) Y N Ok 41416 t(15 ;17) Not tested Not tested 41417 t(15 ;17) Not tested Not tested does not perform this test 41420 t(15 ;17) Y N real time PCR Ok 41423 t(15 ;17) Y N nested PCR Ok 41426 t(15 ;17) Y N real time PCR Ok 41427 t(15 ;17) not tested not tested does not perform this test 41428 t(15 ;17) Y N multiplex PCR: Hemavison Ok 41437 t(15 ;17) Y N multiplex PCR: Hemavison Ok 41438 t(15 ;17) Y N single Ok 41470 t(15 ;17) Y N multiplex PCR Ok b) Evaluatie Onder de 16 laboratoria voeren 4 laboratoria deze test niet uit en 12 laboratoria hebben voor beide stalen een correct antwoord doorgestuurd. 3 laboratoria hebben hun methode niet doorgegeven aan het WIV. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 18/20
7. HER2 In het artikel 33 bis bevindt zich ook de opsporing door FISH van de amplificatie van het gen her2 op borst biopsiën. De EKE-stalen zijn afkomstig van de Amerikaanse CAP en bestaan uit 2 uitstrijkjes met 10 Wells die 10 verschillende biopsiën bevatten. Het eerste uitstrijkje was gekleurd en het andere niet. In 2010 werden er 2 enquêtes georganiseerd: CYH-A en CYH-B. 7.1. CYH-A 20 Belgische laboratoria hebben deelgenomen aan deze enquête. Ze werden verdeeld in 2 groepen op basis van de ontvangen monsters. 16 laboratoria werden opgenomen in groep D (n=90) en 4 werden opgenomen in groep A (n=89). Tabel 13. Resultaten van de Belgische laboratoria (n=16) die deel uitmaken van het panel D van de enquête CYH-A. Sample Intended Observed result Comment result CYH-01-01 Not amplified 15/16 1 unable to analyze CYH-01-02 Not amplifed 15/16 1 unbale to analyze CYH-01-03 Not amplified 2/16 14 unable to analyze CYH-01-04 Not amplified 16/16 Ok CYH-01-05 Amplified 16/16 Ok CYH-02-01 Not amplified 15/16 1 Unable to analyze CYH-02-02 Not amplified 16/16 Ok CYH-02-03 Not amplified 13/16 3 unable to analyze CYH-02-04 Not amplified 16/16 Ok CYH-02-05 Amplified 15/16 1 clinically relevant fault Total1 139/160 (86,9%) Men stelt vast dat er slechts één vals negatief resultaat werd geregistreerd, dit wordt beschouwd als een klinisch belangrijke fout daar dit betekent dat de patiënt de gepaste behandeling niet zal krijgen. Tabel 14. Resultaten van de Belgische laboratoria (n=4) deel uit makend van het panel A van de enquête CYH-A. Sample Intended Observed result Comment result CYH-01-01 Not amplified 4/4 Ok CYH-01-02 Amplifed 4/4 Ok CYH-01-03 Not amplified 1/4 3 unable to analyze CYH-01-04 Not amplified 4/4 ok CYH-01-05 Not amplified 4/4 Ok CYH-02-01 Not amplified 4/4 Ok CYH-02-02 Not amplified 4/4 Ok CYH-02-03 Amplified 4/4 Ok CYH-02-04 Not amplified 1/ 4 3 unable to analyze CYH-02-05 Not Amplified 3 / 4 1 result equivocal Total2 33/40 (82,5%) Total1+2 172/200 (86,0%) Voor deze reeks werd er geen enkel onaanvaardbaar resultaat geregistreerd. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 19/20
In de enquête CYH-A werden er in totaal 86% correcte resultaten ingevoerd door de Belgische laboratoria. Het staal CYH-01-03 van panel D was van slechte kwaliteit wat blijkt uit het hoge percentage van de resultaten «unable to analyze». Voor het staal CYH 02-05 werd een resultaat equivocal geantwoord om aan te geven dat het resultaat niet kon geïnterpreteerd worden. 7.2. CYH-B Voor de enquêtes CYH-B werden alle Belgische laboratoria (n=19) ondergebracht in groep A (n=89). Tabel 15. De resultaten van de Belgische laboratoria voor de EKE-stalen voor het opsporen van de amplificatie van het Her2-gen door FISH. Sample Intended result Observed result Comment CYH-01-01 Not amplified 18/19 1 unable to analyze CYH-01-02 Not amplifed 19/19 Ok CYH-01-03 Not amplified 17/19 2 unable to analyze CYH-01-04 Amplified 18/19 1 unable to analyze CYH-01-05 Not amplified 19/19 Ok CYH-02-01 Not amplified 19/19 Ok CYH-02-02 Amplified 19/19 Ok CYH-02-03 Not amplified 18/19 1 result equivocal CYH-02-04 Not amplified 18/19 1 unable to analyze CYH-02-05 Not amplified 18/19 1 unable to analyze Total 183/190 (96,3%) Voor de enquête CYH-B werden er 183 correcte resultaten geregistreerd en 6 resultaten «unable to analyze» en één resultaat «equivocal». Tabel 16. Samenvatting van de enquêtes Her2. Resultaten Aantal % Correct antwoord 355 91,0 Klinisch belangrijke fout 1 0,3 «Equivocal» 2 0.5 «Unable to analyze» 32 8,2 Totaal 390 100 Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport 2010. Printdatum: 23/12/11 20/20