Hilde Vanpoucke GAB, 28 juni 2011

Maat: px

Weergave met pagina beginnen:

Download "Hilde Vanpoucke GAB, 28 juni 2011"

Peter Groen
9 jaren geleden
Aantal bezoeken:

1 Hilde Vanpoucke

2 Calciumbindende eigenschappen + Antimicrobiële werking

3 een groot calcium-en zinkbindend eiwit met een molecuulmassa van 36kD en met antimicrobiële eigenschappen is een heterotrimeer bestaande uit één 8,2 kd lichte en twee 13,3 kd zware polypeptideketens, die niet-covalent met elkaar verbonden zijn en die ieder 2 calciumionen kunnen binden, maar ook zink. behoort tot de S100-eiwitfamilie, die vnl. afkomstig is uit granulocyten, monocyten, macrofagen en mucosale epitheelcellen en een regulerende functie heeft in het ontstekingsproces.

4 Bloed: is een niet-specifieke marker; verhoogde waarden worden gemeten bij patiënten die lijden aan reumatoïde arthritis, cystische fibrose, ziekte van Crohn en acute bacteriële infecties. Speeksel: de concentratie in speeksel neemt toe bij orale ontstekingen, schimmelinfectie, maar is verlaagd bij HIVpositieve personen. Faeces: Verhoogde calprotectineconcentraties vindt men terug bij patiënten lijdend aan: - IBD - Bacteriële infecties van het maag-darmkanaal - Coloncarcinoom maar NIET bij het prikkelbaredarmsyndroom (=IBS)

5 Organic disease Functional disease IBD Gastro-intest. Bacteriële Infecties Coloncarcinoom Prikkelbaredarmsyndroom

6 Éénmalig fecesstaal (5g feces is voldoende) Calprotectine is een stabiel eiwit: tot 7 dagen op KT Transport: ongekoeld in container zonder bewaarmiddelen Pre-analyse: bewaring in koelkast tot analyse (7 dagen) NIET invriezen ( Calprotectine-waarden door vrijstelling uit de neutrofielen) Extract: is stabiel, bewaard in -20 C (max. 4 maanden ) = EENVOUDIG, NON INVASIEF staal

7 Sandwich-ELISA: PhiCal (Calpro As, Nova tec): polyclonaal AL Calprotectin ELISA, Bühlmann: monoclonaal Al Quantum Blue Quantitative POC IBD/IBS Screening, Bühlmann: monoclonaal Al Extractie: VEREIST

8 Onaangename manuele procedure Hoeveelheid faeces afwegen Dilueren + langdurig vortexen Centrifugatie Supernatans = staal voor ELISA = Arbeidsintensief

9 Smart-Prep

11 Correlatie man. extractie vs preparation kit Calproctectine uit faeces (volledig meetbereik) Conc. (µg/g) Manueel Prep. Kit Prep. kit extractie (µg/g faeces) y = 1,1099x - 5,9089 R 2 = 0, Man. extractie (µg/g faeces) Prep. kit extractie (µg/g faeces) Correlatie man. extractie vs preparation kit Calproctectine uit faeces (tot een meetbereik van 450 µg/g faeces) y = 1,0674x - 3,1137 R 2 = 0, Man. extractie (µg/g faeces)

12 Cut-off: 50 µg/g feces Cut-off voor volwassenen en kinderen ouder dan 4 jaar PhiCal (Calpro As, Nova tec): polyclonaal AL Sensitiviteit: 77% tot 97% Specificiteit: +/- 95% Calprotectin ELISA, Bühlmann: monoclonaal Al Sensitiviteit: 84,4 % Specificiteit: 94,5 %

13 Studie-populatie: 5 mannen 14 vrouwen gem. leeftijd: 34 jaar (range: 17 60) ambulante patiënten (gastro-enterologie) klachten van abdominale pijn en/of diarree Patiënten met gekende IBD als onbekende pathologie

14 Methode: PhiCal (Calpro As, Nova tec): polyclonaal AL Calprotectin ELISA, Bühlmann: monoclonaal Al Interpretatie (3 intervals): < 50 µg/g = negatief, niet suggestief voor IBD µg/g= grijze zone > 200 µg/g = positief, suggestief voor IBD

15 Correlatie met klinische diagnose (ileocolonscopie) Correlatie tussen de Calprotectine-waarde en de SES-CD score (Crohn s endoscopic index of severity) de HBI score (Harvey Bradshaw Index) Berekening van de sensitiviteit Within-run precisie (3 intervals) op basis van duplo bepalingen

16 Patient N Age Bühlman result (µg/g) Nova Tec result (µg/g) Diagnosis SES-CD score HBI ,12 418,03 infection/cd , ,01 CD / / ,01 140,43 CD / ,22 21,76 CD / ,65 25,82 CD ,4 77,24 ileal lymphoid hyperplasia 0 / ,7 1667,03 CD , ,79 UC / / ,56 523,09 CD ,95 277,86 CD / ,32 33,63 CD >upper range 1990,32 CD >10 > , ,16 CD ,81 214,73 CD / ,73 33,12 CD / ,49 16,24 no diagnosis / / ,39 95,51 CD / ,93 556,49 CD / 5

17 Sensitiviteit: 87%: PhiCal (Calpro As, Nova tec): polyclonaal AL 100%: Calprotectin ELISA, Bühlmann: monoclonaal Al Within-run CV (3 intervals): < 50 µg/g : CV= 9,87 % µg/g : CV= 4,26 % > 200 µg/g : CV = 3,24 % Duplo-bepalingen overbodig kostprijs

18 Goede correlatie tussen de Calprotectine-waarde en de SES-CD score Minder goede correlatie tussen de Calprotectine-waarde en de HBI score (Harvey Bradshaw Index) Te wijten aan subjectief karakter van deze score Onvoldoende data: om de specificiteit te berekenen om het gebruik als follow-up merker aan te tonen

20 Faeces extract

21 Extract verdunnen Vortex Centrifugeren (5 min 3000g) 80 µl van staal aanbrengen op cartridge Incuberen Cartridge aflezen

22 Staalvoorbereiding: Immunochromatografische assay (laterale flow) Scan procedure - Optische detector beweegt over cartridge uitzenden van lichtsignaal reflectie - Passage van C-/T-lijn absorptie van licht reflectie - Daling ~ intensiteit van C-/T-lijn ~ concentratie calprotectine - Vertaling naar kwantitatief resultaat m.b.v. kalibratiecurve

23 SheBo Quick Prep Smart-Prep ELISA QB Reader 1:50 1:150 Normal High range range µg/g µg/g µg/g µg/g

24 BIJSLUITER BÜHLMANN HHRM Pos > 50 µg/g Pos > 200 µg/g Twijfel µg/g Neg < 50 µg/g Neg < 50 µg/g

26 SheBo Quick Prep Smart-Prep ELISA QB Reader 1:50 1:150 Normal High range range µg/g µg/g µg/g µg/g

27 SheBo Quick Prep Smart-Prep ELISA QB Reader 1:50 1:150 Normal High range range µg/g µg/g µg/g µg/g

29 Berekend per test (incl. BTW): ELISA: 30 Euro Quantum blue: 40 Euro VRAAG voor RIZIV-terugbetaling: B2000

30 ELISA Precisie QB Kostprijs * Voordelen Staal afzonderlijk bepaald korte TAT Snel Eenvoudig Nadelen Stalen in batch bepaald lange TAT Arbeidsintensief Expertise vereist Screening vs. F/U ** Precisie Kostprijs Screening vs. F/U * Voorwaarde: analyse in batch (veelvoud van 8) ** 2 verdunningen (1:50 en 1:150)

Vergelijkbare documenten

Hilde Vanpoucke WKBWV, 28 september 2010

Hilde Vanpoucke WKBWV, 28 september 2010 Hilde Vanpoucke Calciumbindende eigenschappen + Antimicrobiële werking werd voor het eerst door Fagerhol et al. geïsoleerd uit de cytosolische fractie van polymorfonucleaire cellen en initieel L1 proteine