WETENSCHAPPELIJK INSTITUUT VOLKSGEZONDHEID COMMISSIE VOOR KLINISCHE BIOLOGIE DIENST VOOR LABORATORIA VAN KLINISCHE BIOLOGIE COMITE VAN DESKUNDIGEN

Transcriptie

1 WETENSCHAPPELIJK INSTITUUT VOLKSGEZONDHEID COMMISSIE VOOR KLINISCHE BIOLOGIE DIENST VOOR LABORATORIA VAN KLINISCHE BIOLOGIE COMITE VAN DESKUNDIGEN JAARRAPPORT 2010 EXTERNE KWALITEITSEVALUATIE VOOR ANALYSEN KLINISCHE BIOLOGIE MOLECULAIRE BIOLOGIE Artikel 33 bis Hemato-oncologie WIV-10/Moleculaire Biologie: Hem-oncologie/3 Dienst Klinische Biologie J. Wytsmanstraat, Brussel België

2 ISSN: COMITE VAN EXPERTEN Naam Instelling Marie-Paule Emonds Bloed transfusie- Rode Kruis P. Heimann Hôpital Erasme P. In tveld VUB, UZ Brussel P. Vandenberghe UZ Leuven B. Maes VJZ Hasselt A. Criel AZ Brugge Bernard China (Coördinator) M. Van Blerk (vervanger coördinator) ISP-WIV ISP-WIV Vergadering expertencomité: 09/12/2011 Toestemming verspreiding rapport: 23/12/2011 Door Bernard China: Enquêtecoördinator Alle rapporten zijn tevens te raadplegen op onze website: Institut Scientifique de Santé Publique Wetenschappelijk Instituut Volksgezondheid, Brussel Dit rapport mag niet gereproduceerd, gepubliceerd of verdeeld worden zonder akkoord van het WIV-ISP. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 2/20

3 INHOUDSTAFEL 1. Inleiding 4 2. OPSPOREN VAN DE JAK2 V617F MUTATIE Jak Jak Details KWANTIFICATIE Methoden 7 3. IgH/TCR IgH IGH BCR-ABL KWANTITATIEF Enquête BCRQ Enquête BCRQ Resultaten Chimerisme CHIM CHIM Resultaten ACUTE MYELOIDE LEUKEMIE (AML) BCR-ABL Inv (16) t(8;21) t(15 ;17) (PML-Rar) Her CYH-A CYH-B 20 Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 3/20

4 1. INLEIDING Voor de enquêtes moleculaire biologie sector hemato oncologie van het artikel 33 bis van de RIZIV nomenclatuur hebben wij in 2010 samengewerkt met het programma «Molecular diagnosis of haematological malignancies programme» van UK NEQAS. De levering van de stalen, het inbrengen van de resultaten en de productie van de individuele en globale rapporten vielen onder de verantwoordelijkheid van Dr. Jane Holden van de Universiteit van Sheffield in het Verenigd Koninkrijk. En 2010, werden er 10 enquêtes georganiseerd: Enquête 1 : Jak afgesloten op 05/02/2010 Enquête 2 : IgH 1001 afgesloten op 19/02/2010 Enquête 3 : BCRQ 1001 afgesloten op 05/03/2010 Enquête 4 : Chem 1001 afgesloten op 14/04/2010 Enquête 5 : AML 1002 afgesloten op 16/04/2010 Enquête 6 : BCRQ 1002 afgesloten op 23/07/2010 Enquête 7 : AML 1002 afgesloten op 30/07/2010 Enquête 8 : Jak afgesloten op 17/09/2010 Enquête 9 : IgH 1002 afgesloten op 29/10/2010 Enquête 10 : Chem 1002 afgesloten op 10/12/2010 Dit rapport is een samenvatting van de resultaten van de Belgische laboratoria tijdens het jaar Het is gebaseerd op de gegevens die wij ontvingen op het WIV. Het is dus mogelijk dat er bepaalde informatie ontbreekt. Anderzijds, voor het opsporen van de amplificatie van het Her2-gen door FISH in het kader van borsttumoren die ook deel uitmaken van het artikel 33 bis, hebben we samengewerkt met CAP in de Verenigde Staten die de stalen leveren en de rapporten aanmaken. Twee enquêtes werden georganiseerd in 2010: Enquête 1 : CYH-A afgesloten op 30/06/2010 Enquête 2 : CYH-B afgesloten op 21/12/2010 Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 4/20

5 2. OPSPOREN VAN DE JAK2 V617F MUTATIE In 2010 werden er 2 enquêtes georganiseerd voor het opsporen van de JAK2 V617F mutatie JAK Totaal aantal deelnemers : 117 Aantal Belgische deelnemers : 17 (14,5%) Tijdens deze enquête moesten er twee gelyofiliseerde stalen geanalyseerd worden: - het staal 106 dat positief was voor de mutatie V617F (37,2%) - het staal 107 dat positief was voor de mutatie V617F (9,2%). Voor de stalen 106 en 107, hebben de 17 Belgische laboratoria een correct antwoord gegeven JAK Totaal aantal deelnemers: 123 Aantal Belgische deelnemers: 15 (12,2%) Tijdens deze enquête moesten er twee gelyofiliseerde stalen geanalyseerd worden: - het staal 108 dat ongeveer 26,2% cellen met de mutatie bevatte - het staal 109 dat 6,6% cellen met de mutatie bevatte. De 15 Belgische laboratoria hebben in de twee stalen de mutatie opgespoord. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 5/20

6 2.3. DETAILS Tabel 1. Resultaten van de Belgische laboratoria voor het opsporen van de JAK2 V617F mutatie. LAB METHOD MUT WT MUT WT MUT WT MUT Y Y Y Y Y Y Y Y RFLP + SEQUENCING Y Y Y y Y Y Y Y ALLELE SPECIFIC real time PCR IPSOGEN Y Y Y Y Y Y Y Y pyrosequencing + in house real time PCR Y Y Y Y Y Y Y Y RFLP Y Y Y Y Y Y Y Y RFLP Y Y Y Y Y Y Y Y allele specific real time PCR mutascreen Ipsogen Y Y Y Y Y Y Y Y Melting curve analysis Y ND Y ND Y ND Y ND Allele specific real time PCR mutascreen Ipsogen Y ND Y ND Y ND Y ND LNA PCR Sidon et al., 2006, Clin Chem, 52, Y Y Y Y Y Y Y Y real time PCR. Blood, 2006, 108: Y Y Y Y Y Y Y Y real time PCR Blood, 2006, 107, Y ND Y ND ND ND ND ND LNA PCR Clin Chem,2006, 52, Y Y Y Y Y Y Y Y Allele specific real time PCR IPSOGEN Mutaquant Y Y Y Y ND ND ND ND LNA PCR Clin Chem,2006, 52, Y Y Y Y Y Y Y Y allele specific PCR Lancet,2005, 365: Y Y Y Y Y Y Y Y Allele specific real time PCR IPSOGEN Mutaquant Y ND Y ND Y ND Y ND LNA PCR Clin Chem,2006, 52, 1436 ND : not determinated MUT : mutatie WT : wild type WT Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 6/20

7 2.4. KWANTIFICATIE Voor de stalen 106 en 107 hebben we kwantitatieve resultaten ontvangen van 5 Belgische laboratoria terwijl er 36 laboratoria kwantitatieve resultaten terugstuurden. Voor de stalen 108 en 109 hebben we de kwantitatieve resultaten ontvangen van 2 Belgische laboratoria terwijl er 37 laboratoria kwantitatieve resultaten terugstuurden. Tabel 2. Evaluatie van de kwantitatieve resultaten. Lab sample res Median P75 P25 H SD LOF LIF UIF UOF Z ,2 43, ,7 14,0 0 9,2 65,3 93,3 0, ,2 37,2 43, ,7 14,0 0 9,2 65,3 93,3-1, ,75 37,2 43, ,7 14,0 0 9,2 65,3 93,3-1, ,4 37,2 43, ,7 14,0 0 9,2 65,3 93,3-0, ,2 43, ,7 14,0 0 9,2 65,3 93,3 0, ,75 9,2 14 7,25 6,75 5, ,3 29,5-0, ,1 9,2 14 7,25 6,75 5, ,3 29,5-0, ,45 9,2 14 7,25 6,75 5, ,3 29,5-1, ,5 9,2 14 7,25 6,75 5, ,3 29,5-0, ,2 14 7,25 6,75 5, ,3 29,5 0, ,5 26, ,3 15,7 11, ,8 73,3 0, , ,3 15,7 11, ,8 73,3-1, ,6 8,9 4 4,9 3, ,0 21,3 0, ,6 8,9 4 4,9 3, ,0 21,3-1 Res : resultaat ; P75=percentiel 75, P25=percentiel 25 ; H=P75-P25 ; SD=standaarddeviatie=H/1,3399 ; LOF=lower outer fence ; LIF=lower inner fence : UIF=Upper inner fence ; UOF=upper outer fence Opmerking: De bepaling van het aanwezige mutatiepercentage is niet per se relevant vanuit een klinisch standpunt METHODEN Tabel 3. De methoden die voornamelijk gebruikt werden door de laboratoria. Method Total Belgian labs allele specific PCR 58 (40,3%) 5 (21,7%) ARMS PCR 15 (10,4%) 0 Real time PCR 47 (32,6%) 12 (52,2%) Metling curve analysis 12 (8,3%) 1 (4,3%) RFLP 5 (3,5%) 3 (13,0%) Pyrosequencing 2 (1,4%) 1 (4,3%) Direct sequencing 2 (1,4%) 1 (4,3%) Total De real time PCR methode werd het meest gebruikt door de Belgische laboratoria (52,2%). Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 7/20

8 3. IGH/TCR Het doel van deze enquête is het controleren of de B of T lymfocytenpopulatie aanwezig in het staal een klonaal karakter vertonen of niet. Twee enquêtes werden georganiseerd 2010: IgH 1001 en IgH IGH 1001 Staal: 1 ml vers bloed van een patiënt met een chronische lymfoïde leukemie (CLL). Verwacht resultaat: klonaal staal Het totaal aantal deelnemers bedroeg 80 waarvan 15 Belgen (18,75%). Tabel 4. Resultaten bekomen door de Belgische laboratoria. LAB METHOD IgH FR1 IgH FR2 IgH FR3 Overall IgH result PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal PCR SIMPLEX Oligoclonal Not tested Oligoclonal Oligoclonal PCR MULTIPEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal KIT IDENTITYCLONE IGH Clonal Clonal Clonal Clonal GENE CLONALITY ASSAY OF INVIVOSCRIBE MULTIPLEX PCR FOR FR1 Clonal Clonal Clonal Clonal AND FR2 PCR SIMPLEX FOR FR KIT IDENTITYCLONE IGH Clonal Clonal Clonal Clonal GENE CLONALITY ASSAY OF INVIVOSCRIBE PCR MULTIPLEX Clonal Not tested Polyclonal Clonal PCR MULTIPLEX Clonal Clonal Clonal Clonal PCR MULTIPLEX Clonal Clonal Clonal Clonal PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal KIT IDENTITYCLONE IGH Clonal Clonal clonal Clonal GENE CLONALITY ASSAY OF INVIVOSCRIBE PCR SIMPLEX Not Not amplified No amplified No amplified amplified PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal PCR MULTIPLEX BIOMED Not returned Not returned Not returned Not returned Consensus Clonal Clonal Clonal Clonal Eén laboratorium heeft geen resultaten teruggestuurd, één laboratorium kon het DNA niet amplificeren, 12 laboratoria hebben «Clonal» en één laboratorium heeft Oligoclonal geantwoord. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 8/20

9 3.2. IGH 1002 De enquête bestond uit 1 ml vers bloed van een patiënt met B-CLL. Het verwachte resultaat was: Clonal Het aantal deelnemende laboratoria bedroeg 87 waarvan 15 Belgen (17,2%). Tabel 5. Resultaten bekomen door de Belgische laboratoria. LABS METHOD IgH FR1 IgH FR2 Overall IgH IgH FR3 result PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal PCR SIMPLEX Clonal Not tested Clonal Clonal PCR MULTIPEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal KIT IDENTITYCLONE IGH GENE Clonal Clonal Clonal Clonal CLONALITY ASSAY OF INVIVOSCRIBE MULTIPLEX PCR FOR FR1 AND FR2 Clonal Clonal Clonal Clonal AND PCR SIMPLEX FOR FR KIT IDENTITYCLONE IGH GENE Clonal Clonal Clonal Clonal CLONALITY ASSAY OF INVIVOSCRIBE PCR MULTIPLEX PCR MULTIPLEX Clonal Clonal Clonal Clonal PCR MULTIPLEX Clonal Clonal Clonal Clonal PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal KIT IDENTITYCLONE IGH GENE Clonal Clonal clonal Clonal CLONALITY ASSAY OF INVIVOSCRIBE PCR SIMPLEX clonal Not tested Clonal clonal PCR MULTIPLEX BIOMED polyclo Clonal Clonal Clonal nal PCR MULTIPLEX BIOMED Clonal Clonal Clonal Clonal Consensus Clonal Clonal Clonal Clonal Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 9/20

10 4. BCR-ABL KWANTITATIEF Het doel is om de t(9;22)(q34;q11) translocatie van het Philadelphia chromosoom op te sporen en te kwantificeren door het hybride BCR ABL gen te kwantificeren. Twee enquêtes vonden plaats in 2010 : BCRQ 1001 en BCRQ ENQUÊTE BCRQ 1001 Deze enquête bevatte 2 stalen. Het staal 106 bestond uit (negatieve) HL60 cellen met ongeveer 0,17% (positieve) K562 cellen. Het staal 107 bestond uit (negatieve) HL60 cellen met 23,34% (positieve) K562 cellen. Het totaal aantal deelnemers bedroeg 102. Het aantal Belgische deelnemers bedroeg 16 (15,7%) ENQUÊTE BCRQ 1002 Deze enquête bevatte 2 stalen. Het staal 108 bestond uit (negatieve) HL60cellen met ongeveer 12% (positieve) K562 cellen. Het staal 109 bestond uit (negatieve) HL60cellen met 0,25% (positieve) K562 cellen. Het totaal aantal deelnemers bedroeg 107. Het aantal Belgische deelnemers bedroeg 16 (17,39%) RESULTATEN Tabel 6. Resultaten van de Belgische deelnemers voor de stalen 106, 107, 108 en 109. LAB METHOD % % % % Control gene mutation mutation mutation mutation ABL % 0.19% Real time PCR in house ABL % 0.91% Real time PCR in house b2-microglobuline % 0.07% Real time PCR ABSQUANT ABL % 0.2% Real time PCR in house ABL Not detected 37, % Not detected Real time PCR Ipsogen ABL % 0.1% Real time PCR in house EAC ABL % 0.35% Real time PCR in house EAC ABL % 0.25% Real time PCR in house EAC ABL % 0.62% Real time PCR in house ABL % 0.6% Real time PCR in house EAC MGUS % 0.15% Real time PCR in house ABL % 0.64% Real time PCR Ipsogen ABL % 0.21% Real time PCR in house EAC b2-microglobuline % 0.07% Real time PCR in house Not Not ABL returned returned 71.6% 0.09% Real time PCR in house EAC ABL % 0.37% Real time PCR in house EAC Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 10/20

11 Tabel 7. Evaluatie van de kwantitatieve resultaten van de Belgische laboratoria. Lab Sple IQC res Median P75 P25 H SD LOF LIF UIF UOF Z ABL 0,14 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0,785-0, ABL 1,21 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0,785 6, ABL 0,07 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0,785-0, ABL 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0, ABL 0,2 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0,785 0, ABL 0,25 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0,785 0, ABL 0,17 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0,785 0, ABL 0,33 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0,785 1, ABL 0,14 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0,785-0, ABL 0,086 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0,785-0, ABL 0,21 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0,785 0, ABL 0,27 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0,785 0, ABL 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0,785-1, ABL 0,1 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0,785-0, B2M 0,01 0,17 0,3 0,095 0,205 0, ,375 0,785-1, B2M 0,1 0,17 0,3 0,095 0,205 0,153 0,375 0,785-0,5 Lab Sple IQC res Median P75 P25 H SD LOF LIF UIF UOF Z ABL 23,84 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6 0, ABL ,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6 6, ABL 11 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6-0, ABL 37,3 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6 0, ABL 21,5 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6-0, ABL 45,8 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6 1, ABL 24 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6 0, ABL 25 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6 0, ABL 26,4 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6 0, ABL 29,7 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6 0, ABL 42,1 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6 1, ABL 33 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6 0, ABL 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87, ABL 27,9 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6 0, B2M 2,5 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6-1, B2M 15,5 23,34 36,28 14,86 21,42 15, ,47 87,6-0,5 Sple: Sample; IQC: gen gebruikt als controle; res : resultaat ; P75 : percentiel 75 ; percentiel 25 ; H=P75-P25 ; SD : standaarddeviatie=h/1,3399 ; LOF=lower outer fence ; LIF=lower inner fence : UIF=Upper inner fence ; UOF=upper outer fence. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 11/20

12 Tabel 7. vervolg Lab Sple IQC res Median P75 P25 H SD LOF LIF UIF UOF Z ABL 7,44 12,43 19,1 8,2 10,9 8, ,78 45,13-0, ABL 25,57 12,43 19,1 8,2 10,9 8, ,78 45,13 1, ABL 7,6 12,43 19,1 8,2 10,9 8, ,78 45,13-0, ABL 12,43 12,43 19,1 8,2 10,9 8, ,78 45,13 0, ABL 8,44 12,43 19,1 8,2 10,9 8, ,78 45,13-0, ABL 20 12,43 19,1 8,2 10,9 8, ,78 45,13 0, ABL 14,3 12,43 19,1 8,2 10,9 8, ,78 45,13 0, ABL 40 12,43 19,1 8,2 10,9 8, ,78 45,13 3, ABL 4,4 12,43 19,1 8,2 10,9 8, ,78 45,13-1, ABL 11 12,43 19,1 8,2 10,9 8, ,78 45,13-0, ABL 19,6 12,43 19,1 8,2 10,9 8, ,78 45,13 0, ABL 16 12,43 19,1 8,2 10,9 8, ,78 45,13 0, ABL 71,6 12,43 19,1 8,2 10,9 8, ,78 45,13 7, ABL 27,2 12,43 19,1 8,2 10,9 8, ,78 45,13 1, B2M 1,1 2,15 6,58 1,03 5,55 4, ,475 18,8-0, B2M 7,7 2,15 6,58 1,03 5,55 4, ,475 18,8 1,4 Lab Sple IQC res Median P75 P25 H SD LOF LIF UIF UOF Z ABL 0,19 0,25 0,38 0,17 0,21 0, ,565 0,88-0, ABL 0,91 0,25 0,38 0,17 0,21 0, ,565 0,88 4, ABL 0,2 0,25 0,38 0,17 0,21 0, ,565 0,88-0, ABL 0,25 0,38 0,17 0,21 0, ,565 0, ABL 0,1 0,25 0,38 0,17 0,21 0, ,565 0,88-0, ABL 0,35 0,25 0,38 0,17 0,21 0, ,565 0,88 0, ABL 0,25 0,25 0,38 0,17 0,21 0, ,565 0, ABL 0,62 0,25 0,38 0,17 0,21 0, ,565 0,88 2, ABL 0,6 0,25 0,38 0,17 0,21 0, ,565 0,88 2, ABL 0,15 0,25 0,38 0,17 0,21 0, ,565 0,88-0, ABL 0,64 0,25 0,38 0,17 0,21 0, ,565 0,88 2, ABL 0,21 0,25 0,38 0,17 0,21 0, ,565 0,88-0, ABL 0,039 0,25 0,38 0,17 0,21 0, ,565 0,88-1, ABL 0,37 0,25 0,38 0,17 0,21 0, ,565 0,88 0, B2M 0,07 0,061 0,07 0,046 0,024 0, ,025 0,097 0,133 0, B2M 0,07 0,061 0,07 0,046 0,024 0, ,025 0,097 0,133 0,5 5 Z scores op 61 of 8,2% waren groter dan 3 waarvan 3 komende van hetzelfde laboratorium. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 12/20

13 5. CHIMERISME Het doel is het genetisch chimerisme na een beenmergtransplantatie op te sporen en te kwantificeren. Twee enquêtes werden georganiseerd in 2010 (CHIM 1001 en CHIM 1002). Het doel is het percentage van de donorcellen te bepalen in de post-transplantatie stalen CHIM 1001 De enquête bevatte 3 stalen van 1 ml perifeer bloed van respectievelijk : de donor, de receptor en een post-transplantatie staal (112). Het percentage van de donorcellen bedraagt ongeveer 90%. Totaal aantal deelnemers: 64 Aantal Belgische deelnemers: 9 (14,7%) 5.2. CHIM 1002 De enquête bevatte 4 stalen van 1 ml perifeer bloed van respectievelijk : de donor, de receptor en 2 post-transplantatie stalen (115 en 116). Het percentage van de donorcellen bedraagt ongeveer 78 en 61voor respectievelijk de stalen 115 en 116. Totaal aantal deelnemers: 68 Aantal Belgische deelnemers: 9 (14,5%) 5.3. RESULTATEN Tabel 8. Resultaten van de Belgische laboratoria voor de bepaling van het chimerisme. Lab Sample Result (%) Mean± SD Z Method ± ± ± AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI3100 Powerplex 16 (Promega) Powerplex 16 (Promega) Fragments analysis ABI ± AMpFlSTR profiler plus ± XY-FISH (Abbott-probes) Not returned 88.8±2.14 AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI ± Powerplex 16 (Promega) ± AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI ,5 88.8± Powerplex 16 (Promega) Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 13/20

14 Tabel 8. Vervolg Lab Sample Result (%) M± SD Z Method ,7± AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI ,7± Powerplex 16 (Promega) ,7±3.7 0 Powerplex 16 (Promega) Fragments analysis ABI ,7± AMpFlSTR profiler plus ,7± AMpFlSTR profiler plus XL ,7± XY-FISH (Abbott-probes) ,7± AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI ,7± Powerplex 16 (Promega) ,7± AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI ,7± Powerplex 16 (Promega) Tabel 8. Vervolg Labs Sample Result (%) M± SD Z Method ± AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI ± Powerplex 16 (Promega) ± Powerplex 16 (Promega) Fragments analysis ABI ± AMpFlSTR profiler plus ± AMpFlSTR profiler plus XL ± XY-FISH (Abbott-probes) ± AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI ± Powerplex 16 (Promega) ± AMpFlSTR profiler plus Fragments analysis ABI ± Powerplex 16 (Promega) Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 14/20

15 6. ACUTE MYELOIDE LEUKEMIE (AML) Het doel is de belangrijkste mutaties, die voorkomen bij acute myeloïde leukemie (AML) op te sporen, met inbegrip van de BCR ABL mutatie, die reeds het onderwerp is van een aparte enquête. Twee enquêtes werden georganiseerd in 2010: AML 1001 en AML De stalen 106 en 108 bestonden uit 100% K562 cellen en men vroeg of de BCR-ABL mutatie aanwezig was. Het verwachte antwoord was: ja. De stalen 107 en 109 bestonden uit cellen in cultuur (niet gespecificeerd). De deelnemers dienden de aanwezigheid van de volgende mutaties te testen : inv(16) ; t(8 ;21) en t(5 ;17). De verwachte resultaten waren: Voor het staal 107 : inv(16) negatief; t(8 ;21) negatief en t(15 ;17) positief Voor het staal 109 : inv(16) negatief; t(8 ;21) positief en t(15 ;17) negatief a) Resultaten 6.1. BCR-ABL Tabel 9. Resultaten bekomen door de Belgische laboratoria voor het opsporen van de BCR ABL mutatie in de stalen 106 en 108. Labs parameter Sample result Sample Res Method comments BCR-ABL 106 Y 108 Y single PCR Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y single PCR Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y real time quantitative PCR Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y Hemavision screen Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y Nested+multiplex Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y multiplex PCR Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y real time quantitative PCR Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y real time quantitative PCR Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y real time quantitative PCR Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y real time quantitative PCR Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y Multiplex PCR Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y real time quantitative PCR Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y Nested PCR Ok BCR-ABL 106 Y 108 Y multiplex PCR Ok b) Evaluatie De 16 laboratoria hebben correct geantwoord. Hiervan hebben er 2 hun methode niet doorgegeven aan het WIV. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 15/20

16 6.2. INV (16) a) Resultaten Tabel 10. Resultaten bekomen door de Belgische laboratoria voor het opsporen van de inversie van het chromosoom 16 in de stalen 107 en 109. Labs parameter method comments Inv(16) not tested not tested does not perform this test Inv(16) N N single PCR ok Inv(16) N N real time PCR ok Inv(16) N N multiplex PCRHemavison ok Inv(16) N N multiplex PCRHemavison Ok Inv(16) not tested not tested does not perform this test Inv(16) not tested not tested does not perform this test Inv(16) not tested not tested does not perform this test Inv(16) N N real time PCR ok Inv(16) N N multiplex nested PCR ok Inv(16) N N real time PCR ok Inv(16) not tested not tested does not perform this test Inv(16) N N nested PCR Ok Inv(16) N N multiplex PCR: Hemavison ok Inv(16) N N single PCR ok Inv(16) N N multiplex PCR ok b) Commentaar 11 laboratoria (68,75%) hebben resultaten doorgestuurd. Alle resultaten waren correct. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 16/20

17 6.3. T(8;21) a) Resultaten Tabel 11. Resultaten bekomen door de Belgische laboratoria voor het opsporen van de translocatie van de chromosomen 8 en 21 in de stalen 107 en 109. Labs parameter method comments not t(8;21) tested not tested does not perform this test t(8;21) N Y single PCR Ok t(8;21) N Y real time PCR Ok t(8;21) N Y multiplex PCR: Hemavison Ok t(8;21) N Y multiplex PCR: Hemavison Ok not t(8;21) tested not tested does not perform this test t(8;21) not tested not tested does not perform this test t(8;21) not tested not tested does not perform this test t(8;21) N Y real time PCR Ok t(8;21) N Y nested multiplex RT-PCR Ok t(8;21) N Y PCR en temps réel Ok not t(8;21) tested not tested does not perform this test t(8;21) N Y multiplex PCR: Hemavison Ok t(8;21) N Y multiplex PCR: Hemavison Ok t(8;21) N Y single PCR Ok t(8;21) N Y multiplex PCR Ok b) Commentaar 11 laboratoria hebben resultaten doorgestuurd. Alle resultaten waren correct.. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 17/20

18 a) Resultaten 6.4. T(15 ;17) (PML-RAR) Tabel 12. Resultaten bekomen door de Belgische laboratoria voor het opsporen van de translocatie t(15 ;17) in de stalen 107 en 109. Labs Parameter method comments t(15 ;17) not tested not tested does not perform this test t(15 ;17) Y N single PCR Ok t(15 ;17) Y N real time PCR Ok t(15 ;17) Y N multiplex PCR: Hemavison Ok t(15 ;17) Y N multiplex PCR: Hemavison Ok t(15 ;17) Y N Ok t(15 ;17) Not tested Not tested t(15 ;17) Not tested Not tested does not perform this test t(15 ;17) Y N real time PCR Ok t(15 ;17) Y N nested PCR Ok t(15 ;17) Y N real time PCR Ok t(15 ;17) not tested not tested does not perform this test t(15 ;17) Y N multiplex PCR: Hemavison Ok t(15 ;17) Y N multiplex PCR: Hemavison Ok t(15 ;17) Y N single Ok t(15 ;17) Y N multiplex PCR Ok b) Evaluatie Onder de 16 laboratoria voeren 4 laboratoria deze test niet uit en 12 laboratoria hebben voor beide stalen een correct antwoord doorgestuurd. 3 laboratoria hebben hun methode niet doorgegeven aan het WIV. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 18/20

19 7. HER2 In het artikel 33 bis bevindt zich ook de opsporing door FISH van de amplificatie van het gen her2 op borst biopsiën. De EKE-stalen zijn afkomstig van de Amerikaanse CAP en bestaan uit 2 uitstrijkjes met 10 Wells die 10 verschillende biopsiën bevatten. Het eerste uitstrijkje was gekleurd en het andere niet. In 2010 werden er 2 enquêtes georganiseerd: CYH-A en CYH-B CYH-A 20 Belgische laboratoria hebben deelgenomen aan deze enquête. Ze werden verdeeld in 2 groepen op basis van de ontvangen monsters. 16 laboratoria werden opgenomen in groep D (n=90) en 4 werden opgenomen in groep A (n=89). Tabel 13. Resultaten van de Belgische laboratoria (n=16) die deel uitmaken van het panel D van de enquête CYH-A. Sample Intended Observed result Comment result CYH Not amplified 15/16 1 unable to analyze CYH Not amplifed 15/16 1 unbale to analyze CYH Not amplified 2/16 14 unable to analyze CYH Not amplified 16/16 Ok CYH Amplified 16/16 Ok CYH Not amplified 15/16 1 Unable to analyze CYH Not amplified 16/16 Ok CYH Not amplified 13/16 3 unable to analyze CYH Not amplified 16/16 Ok CYH Amplified 15/16 1 clinically relevant fault Total1 139/160 (86,9%) Men stelt vast dat er slechts één vals negatief resultaat werd geregistreerd, dit wordt beschouwd als een klinisch belangrijke fout daar dit betekent dat de patiënt de gepaste behandeling niet zal krijgen. Tabel 14. Resultaten van de Belgische laboratoria (n=4) deel uit makend van het panel A van de enquête CYH-A. Sample Intended Observed result Comment result CYH Not amplified 4/4 Ok CYH Amplifed 4/4 Ok CYH Not amplified 1/4 3 unable to analyze CYH Not amplified 4/4 ok CYH Not amplified 4/4 Ok CYH Not amplified 4/4 Ok CYH Not amplified 4/4 Ok CYH Amplified 4/4 Ok CYH Not amplified 1/ 4 3 unable to analyze CYH Not Amplified 3 / 4 1 result equivocal Total2 33/40 (82,5%) Total /200 (86,0%) Voor deze reeks werd er geen enkel onaanvaardbaar resultaat geregistreerd. Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 19/20

20 In de enquête CYH-A werden er in totaal 86% correcte resultaten ingevoerd door de Belgische laboratoria. Het staal CYH van panel D was van slechte kwaliteit wat blijkt uit het hoge percentage van de resultaten «unable to analyze». Voor het staal CYH werd een resultaat equivocal geantwoord om aan te geven dat het resultaat niet kon geïnterpreteerd worden CYH-B Voor de enquêtes CYH-B werden alle Belgische laboratoria (n=19) ondergebracht in groep A (n=89). Tabel 15. De resultaten van de Belgische laboratoria voor de EKE-stalen voor het opsporen van de amplificatie van het Her2-gen door FISH. Sample Intended result Observed result Comment CYH Not amplified 18/19 1 unable to analyze CYH Not amplifed 19/19 Ok CYH Not amplified 17/19 2 unable to analyze CYH Amplified 18/19 1 unable to analyze CYH Not amplified 19/19 Ok CYH Not amplified 19/19 Ok CYH Amplified 19/19 Ok CYH Not amplified 18/19 1 result equivocal CYH Not amplified 18/19 1 unable to analyze CYH Not amplified 18/19 1 unable to analyze Total 183/190 (96,3%) Voor de enquête CYH-B werden er 183 correcte resultaten geregistreerd en 6 resultaten «unable to analyze» en één resultaat «equivocal». Tabel 16. Samenvatting van de enquêtes Her2. Resultaten Aantal % Correct antwoord ,0 Klinisch belangrijke fout 1 0,3 «Equivocal» «Unable to analyze» 32 8,2 Totaal Moleculaire biologie: Hemato-oncologie, jaarrapport Printdatum: 23/12/11 20/20