Resultaten EKE IHC 2018/2 De Wiest Bart 06 december 2018 OLV Ziekenhuis Aalst
EKE IHC 2018/2 Antistoffen: Panel: CK5: n=66 Ki-67: n=70 Scoring 08/11/2018 (AZ St-Maarten, Mechelen) Onafhankelijk, in consensus 4 pathologen Dr. A.M. Dierick (WIV) Dr. V. Schelfhout (AZ St-Maarten) Dr. M. Luijks (GZA) Dr. W. Buffet (ZNA)
Procedure panelbeoordeling Literatuurstudie m.b.t. antilichaam: NordiQC website, datasheets, Wat moet / kan aankleuren? Wat mag zeker niet aankleuren? Vastleggen criteria aankleuring per AS Beoordeling Consensus binnen het panel Reden voor afwijkend resultaat bij borderline/onvoldoende Evt. aanbevelingen protocol eindbeoordeling
Beoordelingscriteria Optimaal: perfecte aankleuring in elk weefsel Goed: voldoende aankleuring in elk weefsel maar wel minder goede intensiteit en/of signal-to-noise ratio actie: optimalisatie nuttig Borderline: algemeen te zwak ; onvoldoende aankleuring in één van de weefsels (vals negatieve aankleuring ; vals positieve aankleuring) actie: optimalisatie nodig Onvoldoende: slechte aankleuring in meerdere weefsels (vals negatieve/positieve aankleuring) actie: dringend optimalisatie nodig
Protocol CK5 n= 66 (excl. firma s) Conc.: n=11 Dako: clone D5/16B4: n=6 Leica/Diagomics: clone XM26: n=4 Abcam: clone SP27: n=1 RTU: n=55 Dako D5/16B4: n=29 Roche D5/16B4: n=24 Leica: clone XM26 : n=2
Protocol CK5 Clone D5/16B4 conc. Protocol: Dako AS op Roche platformen 1/50 32 ; iview of UV HIER CC1 30-60 1/100 16 +amp. ; OV HIER CC1 32 1/200 32 ; UV HIER CC1 30
Protocol CK5 Clone D5/16B4 RTU Protocol: Dako Autostainer: 15-20 RT Envision /Flex+/ linker ; HIER ph9 10-20 -30 Dako Omnis: 12 30 bij RT, 32 C (n=5/9) of 36 C Envision Flex+ ; HIER: ph 9 30 Roche Ultra: UV 8 44 bij 36 C (10/24: 16 inc. = datasheet) +amp. 4 16 (n=7) HIER: CC1 36 92 (19/24 CC1 64 = datasheet) Roche Ultra: OV (n=2) 16 32 bij 36 C HIER: CC1 64
Protocol CK5 Clone XM26 conc. Leica AS: Leica platform: Leica AS 1/100 inc. 10 15 bij 20 C HIER ph9 10 Roche Ultra: 1/50 inc. 24 bij 36 C UV HIER CC1 8 Diagomics AS Roche Ultra: 1/100 52 + amp. bij 36 C ; HIER: CC1 36 Clone SP27 conc. (Abcam) Roche GX: 1/50 inc. 24 bij 36 C ; OV HIER CC1 24
Scoringscriteria CK5 Aankleuringspatroon: cytoplasmatisch Normale slokdarm : matig tot sterke aankleuring van plaveiselcelepitheel doorheen alle cellagen (controle sensitiviteit) Prostaat hyperplasie : sterke aankleuring van de meeste basale cellen in de hyperplastische prostaatklieren (hoge expressor) Long adenocarcinoom : geen aankleuring van de neoplastische cellen (controle specificiteit) Long plaveiselcelcarcinoom (spino) : matig tot sterke aankleuring van bijna alle neoplastische cellen Borst invasief ductaal carcinoom: controle sensitiviteit+ specificiteit normaal borstklierweefsel en ducti : sterke aankleuring van het myoepitheel invasief carcinoom : geen aankleuring in de neoplastische cellen
Antistof CK5 : overzicht Optimaal
Antistof CK5 : overzicht Onvoldoende
Antistof CK5: : slokdarm/prostaat Optimaal Onvoldoende Sterke expressor
Antistof CK5 Dako D5/16B4 RTU 20 RT ; HIER ph9 20 ; Dako Autostainer Flex + Long AdCa Long plaveiselcel Ca Specificiteit Sensitiviteit???
Antistof CK5 Onvoldoende Dako D5/16B4 RTU 20 RT ; HIER ph9 20 ; Dako Autostainer Flex + Specificiteit Sensitiviteit
Antistof CK5 Optimaal Specificiteit Sensitiviteit
Antistof CK5 Borst myo epitheel Borst invasief Ca Optimaal Specificiteit Sensitiviteit
Antistof CK5 Borst myo epitheel Borst invasief Ca Specificiteit Sensitiviteit
Antistof CK5 slokdarm Specificiteit Sensitiviteit??? Plaveicel Ca prostaat OK??
Antistof CK5 slokdarm Optimaal Plaveicel Ca Sensitiviteit prostaat Sensitiviteit
Antistof CK5: effect HIER Dako D5/16B4 1/50 32 ; CC1 60 ; BMK XT UV Optimaal HIER optimaal: voldoende lang optimaal
Antistof CK5: effect HIER Dako D5/16B4 1/50 32 ; CC1 30 ; BMK Ultra UV HIER suboptimaal: verdunning OK, te korte HIER borderline
Antistof CK5 Dako D5/16B4 1/100 16 +amp; CC1 32 ; BMK Ultra OV Roche OV kit, grotere verdunning, korte AS en korte HIER goed, achtergrond (amp)
Resultaatbespreking CK5 Algemeen n=66 OLV 2013/2 NQC 2016 n % suff n=23 n=266 suff optimaal 22 33% 88% 87% 33% goed 36 55% 35% borderline 5 8 % 4% 27 % onvoldoende 3 4 % 9% 25% 68 %
Resultaatbespreking CK5 Opgesplitst per clone : conc. n=66 D5/16B4 Dako % suff XM26 Leica /Diagomics % suff SP27 Abcam % suff n=6 n=4 n=1 optimaal 2 33% 1 50% 1 - goed 2 33% 3 13% 0 - borderline 1 17% 0 31% 0 - onvoldoende 1 17% 0 6% 0 - Totaal suff 67% 100% - NQC 2016 63% 77% 3/3
Resultaatbespreking CK5 Opgesplitst per clone: RTU n=66 D5/16B4 Dako RTU % suff D5/16B4 Ventana % suff XM26 Leica /Novocastra % suff n=29 n=24 n=2 optimaal 12 41% 6 25% 0 - goed 11 38% 18 75% 2 - borderline 4 14% 0-0 - onvoldoende 2 7% 0-0 - Totaal suff 79% 100% 2/2 NQC 2016 82% Omnis (n=11) 25% Autostainer (n=36) 79% 3/3 Opmerking: Dako Omnis : 100% geslaagd Dako Autostainer: 81% geslaagd
Resultaatbespreking CK5 Besluit: Suff. 88 % Vergelijkbaar resultaat rondzending OLV 2013/2 AS: 17% conc. vs 83% RTU 53% gebruikt D5/16B4 Dako clone, 36% Ventana clone RTU scoort duidelijk beter dan conc. AS (79% vs 67%) Beide conc. AS (D5/16B4 en XM26) lijken robuust zorgvuldig gekalibreerd protocol (verdunning én HIER) met sensitieve detectiekit RTU Ventana (spreiding protocol) scoort duidelijk beter dan Dako (100% vs 79%), maar % meer optimaal resultaat met Dako clone Ventana amplifier: geen optimale resultaten Enkel HIER, enkel hoge ph (<>2013), cf. NQC Algemene score beduidend hoger NQC 2016 (68%) Extra controlecoupe: 42%
Resultaatbespreking CK5 Besluit: Suff. 88 % Suff. resultaat te behalen bij alle gebruikte clones/stainers Alle clones: reden downgrade: achtergrond AS niet geslaagd= te zwakke aankleuring 5/6 : RTU AS incubatie op RT Voldoende lange HIER noodzakelijk voor optimaal resultaat Ventana aanbevolen HIER CC1 64 : conc.: 86% niet OK : invloed op resultaat RTU: 17% niet OK, minder invloed (geen optimaal resultaat) Dako Omnis: robuust protocol: 100% geslaagd
Resultaatbespreking CK5 Besluit: Suff. 88 % Aanbevolen controle: bron NordiQC, update 2016 Esophagus can be recommended as positive tissue control for CK5. Virtually all squamous epithelial cells must show a moderate to strong cytoplasmic staining reaction in all cell layers. The most superficial cells may show a reduced staining reaction, whereas basal cells will display the strongest intensity. As a supplement to esophagus, pancreas can be used as positive tissue control. This is recommended in the new guidelines published by the International Ad Hoc Expert Committee1. In pancreas, scattered columnar epithelial cells of intercalated ducts must show a weak to moderate predominantly membranous staining reaction. Liver or appendix can be used as negative tissue control, in which no staining reaction of hepatocytes or epithelial cells should be seen. Torlakovic EE, Nielsen S, Francis G, Garratt J, Gilks B, Goldsmith JD, Hornick JL, Hyjek E, Ibrahim M, Miller K, Petcu E, Swanson PE, Zhou X, Taylor CR, Vyberg M. Standardization of positive controls in diagnostic immunohistochemistry: recommendations from the International Ad Hoc Expert Committee. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 2015 Jan;23(1):1-18. doi: 10.1097/PAI.0000000000000163. Review. PubMed PMID: 25474126.
Protocol Ki-67 n= 70 (excl. firma s) Conc.: n=16 Dako: clone MIB-1: n=13 Cell Marque/Neomarkers: clone SP6: n=2 Neomarkers: clone AB-4 (poly): n=1 RTU: n=54 Dako: clone MIB-1 : n=29 Roche: clone 30-9: n=24 Leica: clone K2 : n=1
Protocol Ki-67 Conc. AS Mib-1 Dako Dako Omnis (1) 1/200 20 bij 32 C ; ph9 30 Flex + kit Roche platformen iview: 1/100 32 bij 36 C ; CC1 30 UV: 1/50-1/600 +amp ; 24-60 ; RT of 36 C ; HIER: CC1 32 30 60 OV: 1/100 24 +amp bij 36 C ; CC1 24 Leica platformen (2) 1/100 15 bij RT ; ph9 30 Bond Refine kit SP6 Thermo: 1/200 28 +amp ; UV HIER CC1 64 Cell Marque: 1/400 60 ; UV HIER CC1 64 AB-4 Thermo: 1/200 32 ; UV HIER CC1 64
Protocol Ki-67 RTU clone 30.9 (Ventana) Protocol: Datasheet 2008: HIER 60, AS 16 UV: OV: AS 8 32 +/- amp bij 36 C ; HIER CC1 8 76 (meest mild ) AS 16 bij 36 C ; HIER CC1 36 + Enzym 8 AS 20 bij 36 C ; HIER CC1 64 AS 16 bij 36 C ; HIER CC1 32
Protocol Ki-67 RTU clone Mib-1 (Dako) Protocol: Manueel: 30 RT ; ph9 20 Autostainer (16): AS: 10-30 RT Envision Flex+ (1 linker) HIER ph9 10-20 -30 (n=11) HIER ph6 (n=5) Omnis (10): 20 bij RT, 32 C (n=6/9) of 36 C Envision Flex+ ; geen linker HIER ph 9: 30 (2) HIER ph6: 30 (8)
Protocol Ki-67 RTU clone Mib-1 (Dako) Protocol: Roche GX: UV (1) 28 36 C ; HIER: CC1 60 Roche Ultra: iview (1) 32 RT ; HIER: CC1 36 RTU clone K2 (Leica) Bond Max: 15 RT ; HIER ph9 20
Scoringscriteria Ki-67 Aankleuringspatroon: nucleair Normale lever: negatief, aankleuring in verspreide hepatocyten (<1%): controle specificiteit opm. : achtergrond in bloed en aankleuring (meestal korrelig) van pigment (lipofuscine) in hepatocyten geen downgrade Normale tonsil (fixatie 18u. en 44u) : matig tot sterke aankleuring van de B-cellen in de kiemcentra (NordiQC : 80-90%) en in de meeste suprabasale plaveiselcellen; geen aankleuring van de meeste B-cellen in de mantelzone Borst ductaal carcinoom (core 4) : matig tot sterke aankleuring van de neoplastische cellen (ongeveer 80%) Borst ductaal carcinoom (core 5) : matig tot sterke aankleuring van de neoplastische cellen (ongeveer 30%)
Antistof Ki-67 Borderline Dako Mib-1 1/600 32 +amp 8 ; CC1 64 ; UV BMK Ultra
Antistof Ki-67 Optimaal Dako Mib-1 RTU 20 RT ; ph6 30 ; Omnis
Antistof Ki-67 Optimaal
Antistof Ki-67 Borderline
Antistof Ki-67 Optimaal Borderline Borst Ca core 4-5 Borst Ca core 4-5, Dako Mib-1 RTU 20 RT ; ph6 30 ; Omnis Dako Mib-1 1/600 32 +amp 8 ; CC1 64 ; UV BMK Ultra Intensiteit en proportie lager
Antistof Ki-67 Borderline Borst Ca core 5, Intensiteit en proportie lager
Antistof Ki-67 Optimaal,
Antistof Ki-67 Goed, downgrade Lever achtergrond Ventana 30.9 RTU 16 RT +amp ; CC1 30 ; UV BMK Ultra
Resultaatbespreking Ki-67 Algemeen n=70 NQC 2016 B22 n % suff % suff optimaal 28 40% 86% 69% goed 32 46 % 24% borderline 10 14 % 6% onvoldoende 0 0 % 1% 93%
Resultaatbespreking Ki-67 Opgesplitst per clone : conc. n=16 Mib-1 Dako % suff SP6 C. Marque / Neomarkers % suff AB-4 Neomarkers % suff n=13 n=2 n=1 optimaal 4 31% 0-0 - goed 5 38% 0-0 - borderline 4 31% 2-1 - onvoldoende 0 17% 0-0 - Totaal suff 69% - - NQC 2016 88% * 96% ** Geen data * NordiQC: waarvan 60% optimaal ** NordiQC: wwarvan 74% optimaal
Resultaatbespreking Ki-67 Opgesplitst per clone: RTU n=66 Mib-1 Dako % suff 30-9 Ventana % suff K2 Leica % suff n=29 n=23 n=1 optimaal 23 41% 1 5% 0 - goed 4 38% 21 91% 1 - borderline 2 14% 1 5% 0 - onvoldoende 0 7% 0 0% 0 - Totaal suff 93% 96% 1/1 NQC 2016 97% Omnis (n=31) * 91% Autostainer (n=65)* 99% ** 4/4 * NordiQC: Autostainer 52% optimaal, Omnis 81% optimaal ** NordiQC: waarvan 93% optimaal
Resultaatbespreking Ki-67 Besluit: Suff. 86 % AS: Gebruik: 23% conc. vs 77% RTU 60% Dako clone Mib-1, 34% Ventana clone 30-9 RTU scoort duidelijk beter dan conc. AS Beide clones even robuust (93% en 96% geslaagd) maar Roche clone slechts 5% optimale resultaten Downgrade: Te zwakke aankleuring (bvb plaveiselcellen suprabasaal tonsil): Slechts 1/54 RTU (manueel) <> 19% conc. AS Reden: te grote verdunning en/of suboptimale HIER (te kort) Achtergrond (tonsil spier, lever ): 41% in 1 of meedere weefsels. Conc.: 44% ; RTU AS: 48% Meer bij Roche clone Aspecifieke aankleuring: hepatocyten +, lymfevaten tonsil + Extra controlecoupe: 40% Algemene score vergelijkbaar NQC 2016 (minder opt.)
Resultaatbespreking Ki-67 Besluit: Suff. 86 % Suff. resultaat te behalen bij alle gebruikte clones/stainers Conc. AS: RTU AS: optimale kalibratie protocol noodzakelijk: voldoende lange HIER én verdunning /incubatietijd optimaal uittesten Incubatie temp.: geen invloed op resultaat Dako: Autostainer: ph niet bepalend voor optimaal resultaat Omnis: datasheet ph6 = resultaat optimaal Ventana optimaal (n=1): AS (RTU) 12 +amp. 4 ; UV HIER 30 Aanbevolen controle: NQC Tonsil: positieve controle: B-cellen in donkere zone kiemcentra (+)++ ; B-cellen lichte zone (+)+ negatieve controle: meerderheid mantelzone B-cellen Lever: neg. weefselcontrole: <1% hepatocyten mag aankleuren
Enquête scoring Ki-67 Wie interpreteert de Ki67 kleuring? Patholoog 61 Patholoog, Kandidaat-specialist 6 Patholoog, Kandidaat-specialist, Digital image analysis 1 Patholoog, Laboratoriumtechnoloog 1 Hoe wordt het % positieve Ki67 tumorcellen ('proliferation index') bepaald? 40% Hoe wordt het % positieve Ki67 tumorcellen ('proliferation index') bepaald? Meerdere antwoorden zijn mogelijk, bijvoorbeeld als de methode verschilt naargelang de observator. Digital image analysis 1 Eye balling 28 Manueel tellen van tumorcellen 13 Manueel tellen van tumorcellen, Digital image analysis 1 Manueel tellen van tumorcellen, Eye balling 25 Manueel tellen van tumorcellen, Eye balling, Digital image analysis 1 19%
Enquête scoring Ki-67 Indien er manueel wordt geteld, hoeveel tumorcellen worden er geteld? 50 2 60 1 100 13 200 4 500 1 1000 3 1 veld 1 100 à 200 2 100 of 200 1 100, 1000, 2000 1 2 à 5 maal veld van 100 1 5 x 400 tumorcellen en dan gemiddelde nemen 1 50 indien homogene spreiding 1 50 of 100 1 500 à 2000 1 Afhankelijk van de indicatie 2 19% Borst : ten minste 100, meer indien zeer heterogeen; neuro-endocrien : ten minste 500 1 In functie van het materiaal 5x100 cellen 1 Meerdere spots van meerdere honderdtallen cellen 1 Min. 200 afhankelijk van de aard van het staal (biopsie, resectie, ) 1 Minstens 200 1 NVT 28
Enquête scoring Ki-67 Welk gebied van de tumor wordt geanalyseerd? % berekend op 100 tumorcellen 1 Afhankelijk van de indicatie : tumor hot spots voor neuro-endocriene tumoren, representatieve zone voor borsttumoren, 1 Alle tumorcellen (algemeen gemiddelde) 22 Alle tumorcellen (algemeen gemiddelde) en tumor hot spots 4 Alle tumorcellen (algemeen gemiddelde) en tumor hot spots (afhankelijk van de pathologie) 1 Alle tumorcellen (algemeen gemiddelde) en tumor hot spots voor neuro-endocriene tumoren 1 Alle tumorcellen (algemeen gemiddelde) of tumor hot spots in functie van de casus 2 Alle tumorcellen en tumor hot spots 1 Conform internationale richtlijnen : alle tumorcellen voor puncties en tumor hot spots voor resecties 1 Conform richtlijnen borstwerkgroep : alle tumorcellen voor puncties en tumor hot spots voor resecties 1 Het algemeen gemiddelde + bestaan van hot spots wordt vermeld, elk met hun % 1 Perifeer in tumor 1 Random selectie van velden, incl. hot spots indien aanwezig 1 Tumor hot spots 29 Volledige tumor 1 Tumor hot spots (borst/neuro-endocrien); 2 hot spot haarden (borst) +1 non hot spot haard indien heterogeen 1 32% 42%
Enquête scoring Ki-67 Worden er interpersonele testen uitgevoerd om standaardisatie te bevorderen? Ja 23 Neen 45 NVT 1 65% Wordt een matige nucleaire kleuring beschouwd als positief? Ja 66 Neen 2 Niet vermeld 1 Wordt een zwakke nucleaire kleuring beschouwd als positief? Ja 46 Neen 23 33%
Enquête scoring Ki-67 Worden er controles toegevoegd bij het uitvoeren van de kleuring? Ja 43 Neen 25 Niet vermeld 1 36% 1 controle/serie 1 Altijd interne controle aanwezig 1 Appendix 2 Appendix en tonsil 1 Bij elke wijziging van lot van het antilichaam 1 Controle (tonsil) op elk glaasje 2 Een positieve en negatieve controle worden toegevoegd op het glaasje 1 Er wordt per patiëntenstaal een extrinsieke of intrinsieke controle meegenomen 1 Indien noodzakelijk : geen interne controle 1 Intern ontstekingscellen, niet extern 1 Interne controle 3 Kiemcentra lymffollikels 1 Lymfeklier aaangetast door een lymfoom 1 On slide controles 1 Op vraag van de patholoog 1 Positieve controle 1 Run controle : tonsil 1 Sterk proliferatief letsel en positieve interne controle 1 Tonsil 20 Wanneer er geen interne controle is 1 Bij nieuw ingebruikname van antilichaam wordt controlecoupe meegenomen + interne controle meestal aanwezig 1 Enkel als er geen interne controle is : multiblok met lever, pancreas, tonsil en appendix 1
Resultaatbespreking besluit sufficient 2018 OLV NQC CK5 88 % 87 % 2013 68 % 2016 Ki-67 86 % - - 93 % 2016
EKE planning Externe kwaliteitsevaluatie EKE 2019/1 EKE 2019/2 ER / PR / Her2 CD34, TTF-1, P63 Rondzending coupes door WIV 11-15/02/2019 16-20/09/2019 Beoordeling panel 03/2019 10/2019 Doorsturen individueel resultaat 05/2019 11/2019 Resultaatbespreking / symposium Ma 27/05/2019??? Doorsturen globaal rapport 06/2019 12/2019