NEW De HematoFlow oplossing

Transcriptie

1 Artikel vertaald uit «Beckman Coulter à la une» November na goedkeuring van de auteurs. NEW De HematoFlow oplossing In 2010 lanceerde Beckman Coulter het HematoFlow concept, een unieke oplossing voor celanalyse die flowcytometrie combineert met de hematologieanalyser om abnormale populaties van witte bloedcellen (WBC) te karakteriseren. Het CytoDiff -reagens biedt fluorocytometrische differentiatie van de WBC in 17 populaties. Naast de vijf klassieke populaties, is er ook differentiatie van immature granulocyten, blasten, B-lymfocyten en T/NK-lymfocyten. De blasten worden onderverdeeld in B-blasten, T-blasten, monoblasten en niet-b-, niet-tblasten. Antilichamen CD36-FITC CD2-PE CD294-PE CD19-ECD CD16-PC5 CD45-PC7 Geïdentificeerde cellen Monocyten T-lymfocyten, T-, NK-precursoren Eosinofielen, basofielen, T-cellen B-lymfocyten, B-precursoren Mature en immature granulocyten, cytotoxische T-lymfocyten Leucocyten Het CytoDiffCXPalgoritme identificeert automatisch leukocytaire populaties. Scan this QR code with your Smartphone to watch a video about our HematoFlow Cellular Analysis Solution. Free QR Code Scanner software can be downloaded at sites such as Het HematoFlow -proces De stalen worden routinematig gemeten op de hematologieanalyser UniCel DxH 800 of het gamma LH 700. De normale resultaten worden automatisch doorgestuurd naar het LIS (laboratoriuminformaticasysteem) via Remisol Advance. Abnormale RBC-resultaten worden microscopisch onderzocht Bij afwijkingen van de WBC vraagt Remisol Advance automatisch een CytoDiff-reflextest aan, met voorbereiding van het staal voor de CytoDiff-analyse. Het voorbereide staal wordt vervolgens geanalyseerd op de flowcytometer FC500 van Beckman Coulter. Het resultaat wordt doorgestuurd naar Remisol Advance en gekoppeld aan de/het eerste resulta(a)t(en) van de hematologische analyse van de patiënt. De eindresultaten worden doorgestuurd naar het LIS-databeheersysteem van het lab. & Niki Claes - ncs@analis.be - Tel

2 Artikel vertaald uit «Beckman Coulter à la une» - November na goedkeuring van de auteurs. Vroegtijdige detectie van een geval van leukemie in een privélaboratorium met de HematoFlow Dr Floret Sébastien, Rey Emmanuelle, Duverneuil Patrick - LBM Novabio, Périgueux Mevr. D., 35 jaar, 6 maanden zwanger Anamnese: hepatitis B niet-behandelde, niet-replicatieve chronische Bij gebrek aan vorig onderzoek wordt er een uitstrijkje gemaakt. Hierin wordt slechts 3% verdachte cellen met immatuur gedrag geïdentificeerd. Bloedceltelling met differentiatie voorgeschreven door een gastro-enteroloog in het kader van een hepatitis B-controle. Het hemogram werd uitgevoerd met de UniCel DxH 800analyser. WBC: 3,8 BC/L RBC: 3,93 BC/L Hb: 12,3 g/dl Plt: 439 BC/L Ne : 1,1 BC/L Ly: 2,4 BC/L Mo: 0,4 BC/L Eo: 0,0 BC/L Ba: 0,0 BC/L Op de analyser verschijnt het alarm : atypische Ly, neutropenie Er wordt een CytoDiff-analyse uitgevoerd Deze CytoDiff toont het volgende: 26% blasten 21% van myeloïde origine (Xn) 5 % van monocytaire origine (Xm) De patiënte vertoont geen anemie, noch trombopenie, maar wel een neutropenie van 1100/mm3. Het lab heeft de bloedafname voor diagnose van de immature cellen doorgestuurd naar het CHU de Haut-Lévêque te Bordeaux, hematologisch laboratorium, afd. flowcytometrie. De immunofenotypering laat 35% van de abnormale cellen zien waarvan 91% CD34+CD13+. Besluit De immunofenotypering brengt acute myeloïde leukemie aan het licht. Met dank aan Dr Lacombe Francis, Laboratoire d hématologie, Hôpital haut Lévêque, Pessac 22 & Niki Claes - ncs@analis.be - Tel

3 De formule met 16 populaties d.m.v. immunofenotypering NEW Mature & immature granulocyten Niet-B-/niet-T-blasten B-lymfocyten T-lymfocyten Eosinofielen Monocyt B-blasten T-blasten Basofielen Polynucleaire neutrofielen De HematoFlow oplossing CytoDiff is een gebruiksklaar mengsel van zes monoklonale antilichamen (5 fluorescentiekanalen) Scan this QR code with your Smartphone to watch a video about our HematoFlow Cellular Analysis Solution. Free QR Code Scanner software can be downloaded at sites such as CD36-FITC CD2 + CD294-PE CD19-ECD CD16-PC5 CD45-PC7 24

4 Artikel vertaald uit «Beckman Coulter à la une» November na goedkeuring van de auteurs NEW CytoDiff : de doeltreffende gatingstrategie voor HematoFlow Mounia Yadini Foucart, Projectleider Celanalyses Als aanvulling op zijn aanbod HematoFlow, heeft Beckman Coulter de software CytoDiff CXP ontwikkeld. Met deze software kunnen de 17 leukocytaire subpopulaties die CytoDiff markeert, automatisch, zonder manuele interventie van de operator, geïdentificeerd en berekend worden. De leukocytaire populaties worden volledig automatisch geïdentificeerd. Elk gebied kent vooraf de verwachte locatie van de doelpopulatie (bijv. CD19+ B-lymfocyten). De software past de gates voor elk staal dynamisch aan dankzij een geautomatiseerde analyse op basis van de digitale beeldbewerkingstechnieken. Afbeelding 2: Classificatie van de B-lymfocyten of de immature B-lymfocyten met behulp van cytogram CD19-SS De cellen CD19 worden geanalyseerd in cytogram CD45 en CD36. Het doel van deze stap bestaat in het scheiden van de witte bloedcellen die overeenstemmen met CD45+ van de overblijfselen van de rode bloedcellen en de bloedplaatjes. Afbeelding 3: Scheiding van de witte bloedcellen van de overblijfselen en de bloedplaatjes met behulp van cytogram CD45-CD36 De cellen CD45+ worden vervolgens geanalyseerd in cytogram CD16 en SS. De cellen die buiten het gebied CD45+ liggen, worden verworpen. In cytogram CD16-SS (afbeelding 4) kunnen de mature neutrofielen geïsoleerd worden. De software CytoDiff CXP heeft een sequentiële algemene gatinglogica. Elke geïdentificeerde populatie wordt weggelaten in de volgende stap, zodat uiteindelijk enkele abnormale en/of zeldzame gevallen overblijven. Onderstaand organigram (afbeelding 1) bevat de belangrijkste classificatieprincipes van de verschillende cellen. Afbeelding 1: De gatinglogica De gatingstrategie Zodra het staal gemeten is, worden de gebieden die de populaties scheiden dynamisch aangepast. De percentages van de verschillende populaties worden automatisch berekend. Het eerste cytogram stemt overeen met de combinatie van de parameters CD19-SS (Side Scatter: structuur). De cellen CD19 + worden geïsoleerd en stemmen over het algemeen overeen met de B-lymfocyten of de immature B-lymfocyten. De gatinglogica maakt het vervolgens mogelijk om een bijkomend onderscheid te maken tussen beide categorieën. Afbeelding 4: Identificatie van de mature neutrofielen met behulp van cytogram CD16-SS De cellen die niet van type CD16+ zijn, worden weergegeven in cytogram CD36-CD2+CRTH2. In gebied CD36+ kunnen de monocyten en de immature monocyten geïdentificeerd worden. De gatingstrategie maakt het mogelijk om later een onderscheid te maken tussen deze beide categorieën. 25

5 CytoDiff : de doeltreffende gatingstrategie voor HematoFlow De cellen die niet binnen gebied Xn liggen, zijn samengevoegd in cytogram SS en FS (Forward Scatter: grootte) om de basofielen van de immature T-lymfocyten te scheiden. Afbeelding 5: Classificatie van de monocyten en/of de immature monocyten met behulp van cytogram CD36-CD2+CRTH2 De cellen van type CD36- worden bestudeerd in cytogram CD16-SS. Cytogram CD16 en SS wordt gebruikt om een onderscheid te maken tussen de eosinofielen (EO s) en de immature granulocyten (IG s) van de resterende witte bloedcellen. Hiertoe wordt een gemarkeerd gebied EO en IG gemaakt. In een volgende stap worden deze beide populaties gescheiden. Afbeelding 9: Classificatie van de basofielen en de immature T-lymfocyten met behulp van cytogram SS-FS De cellen met markering CD19+ (afbeelding 2) worden bestudeerd in cytogram CD45-SS. In deze stap worden de mature B-lymfocyten van de immature B-lymfocyten gescheiden. Afbeelding 6: Classificatie van de eosinofielen en/of de immature granulocyten met behulp van cytogram CD16-SS De cellen die niet binnen het gebied EO en IG liggen, worden bestudeerd in cytogram CD45-SS. In het gebied LY.T en NK kunnen de T-lymfocyten en de NK-cellen geïdentificeerd worden. Afbeelding 10: Classificatie van de immature B-lymfocyten en de B-lymfocyten met behulp van cytogram CD45-SS (acute lymfoïde leukemie B) De populatie binnen gebied EO en IG (afbeelding 6) wordt weergegeven in cytogram CD45-CD2+CRTH2 om de EO s van de IG s te scheiden. Afbeelding 7: Classificatie van de T-lymfocyten en/of de NK-cellen met behulp van cytogram CD45-SS De resterende witte bloedcellen zijn basofielen en immature cellen en worden geanalyseerd in cytogram CD45-CD2-CDTH2. De cellen met een negatieve waarde voor CD2+CRTH2 worden geclassificeerd als onderdeel van de immature niet-t- en niet-bcellen. Deze categorie wordt gedefinieerd door het gemarkeerde gebied Xn. Afbeelding 11: Scheiding van de eosinofielen en de immature granulocyten met behulp van cytogram CD45-CD2+CRTH2 (myelemie) In cytogram CD45-SS met de cellen van type CD36+, kunnen de immature monocyten van de mature monocyten gescheiden worden. 26 Afbeelding 8: Classificatie van de immature niet-t- en niet-b-cellen met behulp van cytogram CD45-CD2+CRTH2 (acute myeloïde leukemie) Afbeelding 12: Identificatie van de immature monocyten en de monocyten met behulp van cytogram CD45-SS (monoblasten) De gevallen met de markering monocyten op afbeelding 12 worden vervolgens verdeeld over de positieve monocyten

6 CD16 en de negatieve monocyten CD16 op afbeelding 13. De gebieden met de negatieve en de positieve monocyten CD 16, hebben respectievelijk de markering {M-} en M+. De gebieden die overeenstemmen met de negatieve lymfocyten T en NK CD16 en de positieve lymfocyten T en NK CD16 hebben respectievelijk de markering {T-} en T+. Afbeelding 13: Classificatie van de monocyten CD16- of CD16+ met behulp van cytogram CD16-SS Ten slotte worden de gevallen die behoren tot gebied LY.T en NK bestudeerd in cytogram CD16-SS om de negatieve lymfocyten T en NK CD16 en de positieve lymfocyten T en NK CD16 te scheiden. Afbeelding 14: Classificatie van de T-lymfocyten en de cellen NK CD16- of CD16+ met behulp van cytogram CD16-SS Scan this QR code with your Smartphone to watch a video about our HematoFlow Cellular Analysis Solution. Free QR Code Scanner software can be downloaded at sites such as Referenties Faucher JL, Lacronique-Gazaille C, Frébet E, Trimoreau F, Donnard M, Bordessoule D, Lacombe F, Feuillard J. «6 markers/5 colors» extended white blood cell differential by flow cytometry. Cytometry A Nov;71(11): Roussel M, Benard C, Ly-Sunnaram B, Fest T. Refining the white blood cell differential: the first flow cytometry routine application. Cytometry A Jun;77(6): Gezien voor u Reliable, Accurate Determination of the Leukocyte Differential of Leukopenic Samples by Using Hematoflow Method Korean J Lab Med July; 31(3): Yongjun Jo, M.D., Soo Hwa Kim, M.S., Kwangsang Koh, M.T., Jongmoon Park, M.T., Yang Bo Shim, M.T., Jihyang Lim, M.D., Yonggoo Kim, M.D., Yeon-Joon Park, M.D., and Kyung Background analyzers may ineffectively recognize abnormal cells, and manual differential counts may be imprecise for leukopenic samples. We evaluated the efficacy of the Hematoflow method for determining the leukocyte differential in leukopenic samples and compared this method with the manual differential method. Methods We selected 249 blood samples from 167 patients with leukopenia (WBC counts, 500-2,000/µL) for analysis in this study. The EDTAanticoagulated blood samples were analyzed using an automatic blood cell counter (DxH800; Beckman Coulter, USA) and flow cytometry (FC 500; Beckman Coulter) by using Cytodiff reagent and analysis software (Beckman Coulter). Hematoflow results were selected or calculated from DxH800 and Cytodiff results. Two trained pathologists performed a manual differential count by counting cells. Results The precision of the Hematoflow method was superior to that of the manual method in counting 5 leukocyte subpopulations, immature granulocytes (IGs), and blasts. Blasts were detected in all 45 cases (100%) by Hematoflow. The correlation of the Cytodiff blast count to the reference count was high (r = ). For all other cell populations, the correlation of the Hematoflow results with the reference count was stronger than that of the other manual counts with the reference count. Conclusions The Hematoflow differential counting method is more reproducible and sensitive than manual counting, and is relatively easy to perform. In particular, this method detected leukemic blasts more sensitively than manual differential counts. The Hematoflow method is a very useful supplement to automated cell counting. Web link : Keywords : Hematoflow, Cytodiff, Leukopenia, Flow cytometry, cell analyzer 27