PORCILIS PCV: VOOR LANGDURIGE CIRCO BESCHERMING. Porcilis PCV

Transcriptie

1 PORCILIS PCV: VOOR LANGDURIGE CIRCO BESCHERMING Porcilis PCV

2

3 Porcilis PCV beschermt van start tot finish! 3 Inhoud Deze technische brochure geeft u een overzicht van het Porcine Circovirus type, alsmede van de kenmerken en de ziektesyndromen waarmee dit virus in verband kan worden gebracht. Daarnaast treft u de meest recente ontwikkelingen aan over de samenhang tussen PCV en het effect hiervan op het immuunsysteem van varkens, waardoor u een adequaat beeld krijgt over PCV-gerelateerde ziekten en de rol die Porcilis PCV kan spelen in het voorkomen van deze ziekten. Porcine Circovirus type 4 Porcine Circovirus en andere varkensziekten 5 De immunologie van PCV-ziekten, door Artur Summerfield 6 Porcilis PCV: beschermt uitstekend 1 Porcilis PCV breekt door de maternale immuniteit 1 Porcilis PCV geeft langdurige bescherming 13 Porcilis PCV: laboratorium proeven 14 Porcilis PCV: veldproeven 18 GLP en veiligheidstests in de praktijk Samenvatting van de productkenmerken van Porcilis PCV 1

4 4 Porcine Circovirus Type Het PCV-virus behoort tot de Circoviridae, een virusfamilie die ziekten bij gewervelde dieren en vogels veroorzaakt. Het circovirus is een extreem klein virus (17 nm) met een cirkelvormig enkelstrengs DNA-genoom van 1767bp. De Circoviridae familie kent de volgende genera: a) Anellovirus, typesoort Transfusion Transmitted Virus bij mensen, ook bekend als Torque Teno Virus (TTV). b) Gyrovirus, waaronder Chicken Anemia Virus (CAV). c) Circovirus, waartoe het Porcine Circovirus Type 1 en (PCV1 en ) en het Beak and Feather Disease Virus (BFDV, bek- en vederrot) bij vogels behoren. a) Genus Anellovirus Genus Anellovirus. Het is de vraag of het Transfusion Transmitted Virus of Torque Teno Virus (TTV) pathogeen is. TTV is aangetroffen in het serum van varkens met Post-weaning Multi-systemic Wasting Syndrome (PMWS, oftewel wegkwijnziekte) in Spanje (Segales et al., 9). b) Genus Gyrovirus. Chicken Anemia Virus (CAV) veroorzaakt bloedarmoede en immunosuppressie bij kuikens en wordt gekenmerkt door aplastische anemie en gegeneraliseerde lymfoïde atrofie met immunosuppressie, vaak gecompliceerd door virale, bacteriële of schimmelinfecties (Bulow, Schat, 1997). c) Genus Circovirus. Bij dieren zijn al meerdere circovirussen aangetroffen: Porcine Circovirus Type 1 en, Kanariecircovirus, Boviencircovirus, Ganzencircovirus, Duivencircovirus, Struisvogelcircovirus en het Ravencircovirus. Ook bij mensen komt het circovirus buitengewoon vaak voor. Het Porcine Circovirus is niet de enige oorzaak van Porcine Circovirus Associated Diseases (PCVAD). Maar het PCV- virus is wel altijd aanwezig en vormt zo de belangrijkste factor bij het ontstaan van klinische symptomen van PCVAD, zoals PMWS (slijters). PCV, EM foto * * Bron: Dr. Jan van Lent, Universiteit van Wageningen

5 Porcilis PCV beschermt van start tot finish! 5 Porcine Circovirus en andere varkensziekten PCVAD werd in 1991 voor het eerst door Canadese dierenartsen waargenomen (Harding, 1997; 1998). Sindsdien wordt het over de hele wereld gemeld (Segales et al., 6). Tussen 1995 en 1997 had het met PCV geassocieerde PMWS over de hele wereld epidemische vormen aangenomen, terwijl het PCV-virus al zeker een aantal decennia in de varkenspopulatie voorkwam voordat de ziekte werd beschreven (Segales, 7). PCV komt op alle bedrijven voor en kan bij zowel gezonde als zieke dieren worden geïsoleerd (Allan en Ellis, ). De hoeveelheid PCV-virus is echter significant hoger in het weefsel van varkens met PCVAD. Geschat wordt dat in 4 de ziekte de varkenssector in de Europese Unie ongeveer 6 miljoen euro heeft gekost (Segales 7). Infecties met het PCV-virus wordt door diverse onderzoeksgroepen uitgebreid onderzocht. De immunologische aspecten van besmetting met PCV zijn fascinerend en van grote betekenis voor de veterinaire sector. Varkens kunnen op natuurlijke wijze met meerdere PCV-genotypen worden besmet (Hesse et al., 8). Deze kunnen ook voorkomen op boerderijen waar geen klinische symptomen van PCVAD worden waargenomen (de Grau et al., 8). PCV wordt in verband gebracht met PDNS (Porcine Dermatitis and Nephropathy Syndrome), verminderde vruchtbaarheid, enteritis en longontsteking, maar wordt vooral gekenmerkt door PMWS symptomen zoals wegkwijnen, vergrote lymfeklieren, geelzucht en gewichtsverlies. In de literatuur worden diverse factoren genoemd, die mogelijk samen met PCV, PCVAD veroorzaken. Het omgekeerde is echter voor de preventieve therapie nog belangrijker: Als viremie door PCV kan worden voorkomen, bijvoorbeeld door middel van vaccinatie, wordt PCVAD niet waargenomen. Varkens met PCVAD Intervet/Schering-Plough Animal Health heeft één van de onderzoekers, te weten Artur Summerfield, gevraagd om in deze technische brochure een bijdrage te leveren over PCV en immunologie en -belangrijker nog- wat het betekent voor het immuunsysteem van varkens.

6 6 De immunologie van PCV-ziekten Artur Summerfield, DVM, PhD, Instituut voor Virologie en Immunoprofylaxe, Mittelhäusern, Zwitserland Onlangs zijn een aantal wetenschappelijke publicaties verschenen over immunomodulatie door PCV. Intervet/Schering-Plough AH vroeg Artur Summerfield de huidige stand van de wetenschap omtrent dit aspect van PCVAD te beschrijven. Immunosuppressieve kenmerken van PCV-infecties PCV komt in de hele varkenspopulatie voor. 99% van de PWMS-gevallen houdt verband met coinfecties zoals PRRSV, M. hyopneumoniae, bacteriële septicemie, longontsteking, influenza en parvovirus. Dit zou verklaard kunnen worden door een door PCV veroorzaakte immunosuppressie, die weer leidt tot verhoogde vatbaarheid voor secundaire infecties. In pathologisch onderzoek bij varkens met PWMS worden inderdaad ernstige gegeneraliseerde laesies in het primaire en secundaire lymfeweefsel beschreven. De aard van deze laesies, die gepaard gaan met afbraak van lymfestructuren, vermindering van het aantal lymfocyten en infiltratie met macrofagen, zal zeker leiden tot ernstige onderdrukking van de immuunrespons. In het schema op de rechterpagina zien we hoe PCV het immuunsysteem moduleert en het delicate evenwicht tussen de voor gezondheid en welzijn benodigde immuunstimulerende en immuunonderdrukkende triggers verstoort. Immuunregulering is van groot belang bij het voorkomen van immuungemedieerde beschadiging, zoals ernstige ongecontroleerde ontsteking, allergieën en autoimmuunziekten. Varken met PDNS Subacute tot chronische PDNS in de nier

7 Porcilis PCV beschermt van start tot finish! 7 Schematische weergave van de verschillende fases van de immuunrespons en de invloed hierop van een infectie met PCV. Niet-specifiek immuunsysteem Specifiek immuunsysteem Fase 1 Fase Fase 3 Fase 4 Antiviraal Ontstekingsremmend Onstaan van humorale en celgebonden immuniteit Regulatie en memory PCV PCV PCV PCV Antilichamen T-cel respons Dagen na infectie Figuur 1 IFN-α/β cytokines chemokines Fase 1 In deze fase worden cellen van het niet-specifiek immuunsysteem aangezet om antivirale factoren zoals interferon-α, interferon-ß, en pro-inflammatoire cytokinen en chemokinen aan te maken. Hierdoor wordt, door niet specifieke cellulaire en humorale componenten, vroege replicatie van pathogenen beperkt en worden signalen afgegeven die nodig zijn om een actieve immuunrespons teweeg te brengen. PCV remt deze antivirale fase. Fase In deze fase wordt door IL-1 weefselschade, welke normaal tijdens een nietspecifieke immuunrespons ontstaat, voorkomen. PCV stimuleert macrofagen en dendritische cellen tot extra productie en afgifte van IL-1 waardoor PCV niet als lichaamsvreemd wordt herkend en getoloreerd wordt door het lichaam. Fase 3 In deze fase wordt door activering van T- en B-lymfocyten een specifieke immuunrespons opgewekt. PCV remt de activering van deze specifieke immuniteit. Fase 4 Na deze eliminatiefase komt het specifiek immuunsysteem in een stady state. Antilichamen hebben een bepaald niveau bereikt en specifieke cytotoxische T-cellen zullen langzaam verdwijnen. PCV kan, in geval van PCVAD, in deze fase zorgen voor overstimulatie van B- en T-cel immuniteit waardoor er oa. immuuncomplexen kunnen ontstaan (PDNS) of lymfo depletie door cytotoxische T-cellen (PMWS).

8 8 PCV plant zich voornamelijk voort in epitheel- en endotheelcellen, maar kan ook macrofagen (MF) en dendritische cellen (DC) infecteren, waar het virus persisteert en de functie van de cellen verandert. Dit is van kritisch belang vanwege de grote rol die DC en MF spelen bij het waarnemen van binnendringende pathogenen en het activeren van innate immuunresponsen om de replicatie van pathogenen te onderdrukken. DC s presenteren antigenen aan de afweercellen en brengen zo verkregen (actieve) immuunresponsen tot stand en reguleren de activiteit van T-cellen door middel van de productie van stimulerende en remmende cytokinen. MF zijn belangrijker vanwege fagocytische werking, inflammatoire reacties en weefselhomeostase. Tegen deze achtergrond kan worden verwacht dat de immunomodulerende effecten van PCV op deze cellen grote invloed zullen hebben op de verschillende elementen van de innate en verkregen immuunrespons zoals deze is afgebeeld in de illustratie op pagina 9. Het immuunsysteem van gezonde varkens kan dus ziektesymptomen (PCVAD) ten gevolgen van een PCV infectie voorkomen. Ook kunnen vaccinatieprogramma s tegen PCVAD met succes worden toegepast. Het is nog niet volledig duidelijk hoe deze beschermende immuunresponsen precies werken. In onderzoek is wel het belang van neutraliserende antilichamen aangetoond. Hierbij kwam ook een correlatie tussen bescherming en het gehalte aan antilichamen naar voren. Na infectie verschijnen neutraliserende antilichamen pas na 1 dagen; het is niet duidelijk of deze relatief langzame respons wordt veroorzaakt door de immuunonderdrukkende eigenschappen van PCV of door virale epitopen die niet voldoende immunogeen zijn. Het is interessant te zien dat door infectie veroorzaakte PCV- specifieke T-cel-responsen ook deze langzame kinetiek kennen en over het algemeen zwak zijn. De rol die zij bij bescherming spelen is daarom niet duidelijk. Beschermende immuunresponsen Ondanks de hierboven omschreven immunomodulatie is de morbiditeit bij de voor het onderzoek met PCV besmette gespeende biggen meestal laag. Samenvatting PCV heeft wisselende effecten op immuunfuncties, variërend van het opwekken tot het onderdrukken van immuunresponsen. Hoewel dit tegenstrijdig lijkt, is het niet verrassend gezien de werking van het immuunsysteem, dat is gebaseerd op de wisselwerking tussen zeer gespecialiseerde celtypen binnen een regulerend netwerk. Een ander uiterst belangrijk kenmerk van het immuunsysteem is dat het zowel voordelige als nadelige effecten met zich meebrengt, wat een strak geregeld evenwicht tussen stimulerende en regulerende elementen vereist. Voor zover we nu weten, heeft PCV zich ontwikkeld door dit systeem binnen te sluipen en zich te verstoppen voor immuunresponsen. PCV zelf lijkt onschadelijk te zijn, maar door de immunomodulerende werking, in combinatie met co-infecties en andere veehouderij-gerelateerde factoren, is het verantwoordelijk voor PCVAD. Verdere literatuur (overzichtsartikelen) Ramamoorthy S, Meng XJ. 8. Porcine circoviruses: a minuscule yet mammoth paradox. Anim Health Res Rev :1- Segalés J, Mateu E. 6. Immunosuppression as a feature of postweaning multisystemic wasting syndrome. Vet J 171: Opriessnig T, Meng XJ, Halbur PG. 7. Porcine circovirus type associated disease: update on current terminology, clinical manifestations, pathogenesis, diagnosis, and intervention strategies. Segalés J, Allan GM, Domingo M. 5. Porcine circovirus diseases. Anim Health Res Rev 6: Chae C. 5. A review of porcine circovirus -associated syndromes and diseases. Vet J 169: J Vet Diagn Invest 19:

9 Porcilis PCV beschermt van start tot finish! 9 Overzicht huidige kennis over immunomodulatie door PCV. Specifiek immuunsysteem NIPC PCV PCV 1 Persistentie en verstoppen PCV Macrofaag of naïeve DC PCV PCV Co-infecties! Niet specifiek immuunsysteem Verminderde afweer PCV IFN- IL-6 IL-1 Naïeve T-cel Volwassen DC presenteert antigeen aan T-cel IL-1 TNF-α IL-1β IL-8 MCP-1 4 Tolerantie 3 Cytotoxische T-cel PCV Plasma cel PCV Effector lymfocyten Ontsteking, immuun gemedieerde weefselbeschadiging PCV PCV Immuun complexen Figuur 1 - PCV besmet macrofagen en dendritische cellen (DC) en persisteert in deze cellen. Ze kunnen de cellen vervolgens gebruiken als een paard van Troje voor het transport van virussen naar het lymfeweefsel, waar het de functie van diverse celtypen kan moduleren. - PCV heeft een remmende werking op de functie van natuurlijke interferon producerende cellen (NIPC), ook wel plasmatoïde dendritische cellen genoemd. Hierdoor wordt de afgifte van interferon-α, interferon-ß, IL-6 en IL- geremd. Interferon-α en -ß spelen een belangrijke rol bij de bestrijding van virusinfecties. Naast deze directe antivirale werking bevorderen de weefselhormonen samen de inductie van de specifieke immuniteit, door dendritische cellen aan te zetten tot rijping en migratie. Deze volwassen dendritische cellen initiëren vervolgens de T- en B-cel respons. Naïeve dendritische cellen zijn ondoelmatig in het stimuleren van de T- en B-cellen en kunnen zelfs de tolerantie voor het antigeen bevorderen. 3 - PCV kan de productie van pro-inflammatoire cytokinen (TNFα en IL-1ß) en chemoattractanten (IL-8 en MCP-1) stimuleren. Deze cytokinen zijn wellicht de veroorzakers van ontstekingsreacties en de vernietiging van het lymfeweefsel bij varkens met PMWS. Chronische stimulering van het immuunsysteem door deze cytokinen kan ook bijdragen aan immuuncomplex ziekten zoals PDNS. 4 - PCV bevordert de afscheiding van IL-1, een cytokine dat tijdens de immuunrespons een anti-inflammatoire rol speelt waardoor tolerantie tegen PCV optreedt. Co-infecties kunnen interfereren met deze functieveranderingen waardoor deze een belangrijke rol spelen in het ontstaan van de ziekte PCVAD.

10 1 Porcilis PCV: beschermt uitstekend In Porcilis PCV zit als antigeen het door ORF gecodeerde eiwit van het PCV-virus. Het door ORF gecodeerde antigeen is de dominante immunogene factor voor bescherming tegen infectie met het PCV-virus. De invitro replicatie van het PCV-virus verloopt zeer moeizaam. Een vaccin moet voor een optimale immuunrespons precies de juiste hoeveelheid antigeen bevatten. Intervet/Schering-Plough Animal Health heeft vanwege zijn gevestigde reputatie en uitgebreide ervaring op het gebied van subunit-vaccins, ervoor gekozen om de beproefde Baculovirus technologie toe te passen voor de productie van ORF-antigeen voor Porcilis PCV. Dit ORF-antigeen (PCVa, genotype) in Porcilis PCV vormt spontaan na het oogsten van Virus Like Particles, die een overeenkomst vertonen met het PCV-virus; dit draagt bij aan de uitstekende immunogene eigenschappen van het vaccin. PCV-virus Virus Like Particles (VLP) van ORF na oogsten; let op de overeenkomst in vorm en grootte

11 Porcilis PCV beschermt van start tot finish! 11 Recombinant Baculovirus Infectie van insecten-cellijn met recombinant Baculovirus ORF van PCV Grootschalige fermentatie voor de productie van ORF PCV - antigeen in de vorm van Virus Like Particles (VLP) Figuur 3 In Porcilis PCV wordt als adjuvans X-solve gebruikt. De basis van X-solve bestaat uit vitamine E en minerale olie. vrije radicalen. Daarnaast zorgt vitamine E samen met de minerale olie voor chemotaxis van macrofagen en monocyten naar de injectieplaats welke gevolgd wordt door een snelle inductie van zowel de B- als de T-cel immuniteit. aantrekken monocyten opname antigenen + olie RIJPING LymfEKNOOP Antilichamen CelGEBONDEN immuniteit Antigeen Vitamine E Olie Figuur 4: Schematische opbouw van de verschillende componenten (ORF-antigeen en X-solve) in Porcilis PCV De combinatie van de juiste hoeveelheid VLP (ORF- antigeen) en X-solve resulteert in een optimaal werkzaam vaccin. Vitamine E beschermt het antigeen en cellen van het immuunsysteem tegen schadelijke enzymen en Figuur 5: Aantrekking van moncyten, opname door monocyten, migratie en inductie van B- en T-cel immuniteit door Porcilis PCV Deze unieke eigenschappen komen tot uiting in twee belangrijke claims die Porcilis PCV mag voeren: 1. Het vermogen om door de maternale immuniteit te breken.. De aanvang (binnen twee weken) en de duur van de immuniteit ( weken na vaccinatie)

12 1 Porcilis PCV breekt door de maternale immuniteit Porcilis PCV kan gegeven worden in de aanwezigheid van beschermende maternaal verkregen antilichamen (MDA) waardoor een lacune in de immuniteit doeltreffend wordt voorkomen. Eenmalige vaccinatie op drie weken leeftijd is het meest effectief Porcilis PCV breekt door de maternale immuniteit De Ludwig-Maximilians-Universiteit in München verrichte een dubbelblinde studie met Porcilis PCV waar duidelijk werd aangetoond dat de vaccinatie door hogere MDA niveaus breekt. In dit onderzoek werden op een PCV geïnfecteerd bedrijf met PMWS en PDNS klachten 67 pas geboren biggen at random verdeeld in drie groepen (9 dieren per groep) waarbij één groep een eenmalige vaccinatie met Porcilis PCV kreeg op dag 7, één groep een eenmalige vaccinatie kreeg op dag 1 en één groep niet gevaccineerd werd (controle groep). In de grafieken hier beneden zien we de serologische respons (figuur 6) en de hoeveelheid virus in het bloed (figuur 7). De maternaal verkregen antilichaam titers van de controle dieren nemen geleidelijk af tot negen weken leeftijd waarna de gemiddelde antilichaamtiter toe neemt t.g.v. circulerend PCV veldvirus. De gemiddelde titer van de op dag 7 gevaccineerde biggen daalt niet ten opzichte van de controle dieren en vertoond een lichte stijging na week 9 wanneer de dieren blootgesteld worden aan circulerend PCV (boostering door PCV veldvirus). De gemiddelde titer van de op dag 1 gevaccineerde dieren stijgt na vaccinatie tot hoge waardes en neemt daarna geleidelijk af ondanks blootstelling aan circulerend PCV veldvirus (serologische bescherming). Figuur 7 (qpcr) laat zien dat bij de controle dieren het hoogste percentage dieren met hoge virusload (>1 4 kopieën) gevonden werd tijdens de vleesvarkensperiode wat overeenkomt met de periode waarop vooral PMWS en PDNS gezien werd. Het figuur laat duidelijk zien dat het percentage dieren met een hoge virusload significant minder is bij de dieren welke op dag 7 en dag 1 gevaccineerd zijn ten opzichte van de controle dieren. Bij de op dag 1 gevaccineerde dieren werd zelfs geen enkel dier meer gevonden met een hoge virusload. De sterfte (van week drie tot slachten) zakte significant van 7.% bij de controle dieren naar.4% bij beide gevaccineerde groepen gemiddelde PCV antilichaam titer per groep 9 8 hoeveelheid PCV in het bloed (qpcr) log PCV-Elisa % dieren >1E4 copiën/ml w 3w 5w 7w 9w 11w 14w 18w w 6w leeftijd vaccinatie op dag 1 vaccinatie op dag 7 controle 1 3w 5w 7w 9w 11w 14w 18w leeftijd vaccinatie op dag 1 vaccinatie op dag 7 controle Figuur 6 Figuur 7

13 Porcilis PCV beschermt van start tot finish! 13 Porcilis PCV geeft langdurige bescherming Varkens die eenmalig op drie weken leeftijd gevaccineerd worden met Porcilis PCV zijn tot minimaal 5 weken leeftijd beschermd Gevaccineerde dieren werden weken na vaccinatie geïnfecteerd met een PCVb veldstam. Bij dit onderzoek waren drie groepen betrokken: een controlegroep die niet gevaccineerd werd, een groep die twee maal gevaccineerd werd (op drie dagen en drie weken leeftijd) en een groep die alleen op de leeftijd van drie weken werd gevaccineerd. Onderstaande grafiek (figuur 8) toont het antilichaam titerverloop na vaccinatie en challenge. Let hierbij op: de hoogte van de maternaal verkregen antilichaamtiters ten tijde van de vaccinatie de hoogte van de antilichaamtiters ten tijde van de challenge ( weken na de vaccinatie) het verschil in de reactie op de challenge tussen de gevaccineerde groepen en de controle groep Challenge weken na vaccinatie (DOI) gemiddelde PCV antilichaam titer 14 1 log PCV-Elisa weken 1 weken 5 weken 6 weken 7 weken 8 weken (challenge) leeftijd Porcilis PCV one shot Porcilis PCV two shot controle (niet gevaccineerd) Figuur 8 Challenge weken na vaccinatie (DOI) hoeveelheid PCV in lymfatisch weefsel 3 weken na challenge De antilichaamtiters bleven gedurende weken na vaccinatie boven het niveau van bescherming. De verschillen in virus load van de gevaccineerde groepen en de niet gevaccineerde controlegroep was zeer significant (figuur 9). Porcilis PCV geeft dus een beschermingsduur tegen PCV van minimaal weken. log 1 DNA copieën/µl In. Mesenteriales Inn. Inguinales Milt Tonsil aantal interferon gamma producerende cellen/1 6 PBMC Inductie va producere 3 weken (vaccinatie) 6 weke orgaan Porcilis PCV one shot Porcilis PCV two shot controle (niet gevaccineerd) vaccinatie en cha Figuur 9

14 14 Porcilis PCV: laboratorium proeven De werkzaamheid van het vaccin kan gemeten worden aan de hand van inductie van beschermende antilichamen. Deze antilichamen correleren met bescherming tegen het PCV virus zoals de volgende laboratorium experimenten laten zien. Challenge twee weken na vaccinatie Biggen werden op een leeftijd van drie weken gevaccineerd, gevolgd door een challenge proef vijf weken leeftijd, twee weken na vaccinatie. Figuur 1 toont de antilichaam respons en laat zien dat de gevaccineerde dieren hoge antilichaam titers hebben op het moment van challenge. Drie weken na de challenge met een PCVb veldstam werd een duidelijk verschil gezien in virusload na challenge (figuur 11). De verschillen in de PCV load (log 1 schaal) tussen de gevaccineerde en niet gevaccineerde dieren waren significant in zowel serum, faeces, tonsillen als de mesenteriale lymfeknopen. 1 1 Gemiddelde antilichaam titer na vaccinatie met Porcilis PCV op 3 weken en challenge op 5 weken.5 Hoeveelheid PCV in organen 3 weken na challenge log PCV-Elisa leeftijd in weken log 1 DNA kopieën per µl serum faeces tonsillen mesenteriale Inn Porcilis PCV Controle Porcilis PCV Controle Figuur 1 Figuur 11

15 Porcilis PCV beschermt van start tot finish! 15 Porcilis PCV biedt bescherming tegen zowel PCVa- en PCVb- virusisolaten van verschillende geografische oorsprong Eerste proef (twee vaccinaties) Voor de challengeproef, uitgevoerd op het CReSA (Fort M. et al., 8. Vaccine 6: ), werden biggen x gevaccineerd met Porcilis PCV en werden twee weken na de e vaccinatie geïnfecteerd met de volgende pathogene PCV isolaten (figuur 1): uit Europa: stam A = I-1/11 (genotype b) uit Noord-Amerika: stam C = STOON 11 (genotype a) stam B = Burgos (genotype a) stam D = MO/S-6 (genotype b) DQ144 AY (PCVb) (genotype 1, 31-like) AY DDQ AY /11 (stam A) 6 DQ AY AY AY9694 AY M/S-6 (stam D) AB AY Burgos (stam B) SN L15 17 AY56459 (PCVa) (genotype, 4-like) AF AY34 AY STOON 11 (stam C) AY AF11897 DQ AF6439 Figuur 1: De rode stippen in de figuur zijn de verschillende isolaten die in deze proef werden gebruikt

16 16 Viremie na challenge met verschillende PCV isolaten De onderstaande grafieken (figuur 13) tonen de PCV-viremiegehaltes na challenge met de verschillende isolaten (stam A, B, C en D). Ook hier is weer sprake van een log 1 schaal. Het gaat dus om een enorme reductie van circulerend virus bij de gevaccineerde dieren. In geen van de Porcilis PCV gevaccineerde dieren kon challenge virus teruggevonden worden. Stam A (I-11/1) Stam B (Burgos) 7 6 hoeveelheid DNA copieën /µl hoeveelheid DNA copieën /µl dagen na challenge 6 13 dagen na challenge Porcilis PCV controle (niet gevaccineerd) Porcilis PCV controle (niet gevaccineerd) Stam C (Stoon 11) Stam D (MO/S-6) 5 6 hoeveelheid DNA copieën /µl hoeveelheid DNA copieën /µl dagen na challenge 6 13 dagen na challenge Porcilis PCV controle (niet gevaccineerd) Porcilis PCV controle (niet gevaccineerd) Figuur 13 De bovenstaande grafieken laten duidelijk zien dat in de gevaccineerde en aan een challenge met een van de vier verschillende isolaten blootgestelde dieren geen viremie werd aangetroffen. Dit in tegenstelling tot de niet gevaccineerde controle dieren waar bij alle vier de groepen viremie werd aangetroffen.

17 Porcilis PCV beschermt van start tot finish! 17 Tweede proef (enkelvoudige vaccinatie) In een tweede proef (Fort et al; 9.Vaccine, 7: ) werden de biggen eenmalig op drie weken leeftijd gevaccineerd in aanwezigheid van maternaal verkregen antilichamen. De biggen werden op zes weken leeftijd geïnfecteerd met een PCV genotype b isolaat. De resultaten zijn vergelijkbaar met de vorige proef. Figuur 14 geeft de serologische respons weer (let op de hoge maternaal verkregen antilichaamtiters op drie weken leeftijd) en figuur 15 het percentage viremische dieren na challenge. De virus load in het serum (figuur 16) was bij de gevaccineerde dieren significant lager dan bij de niet gevaccineerde controle dieren. Alleen één week na challenge werd er een laag virusgehalte bij de gevaccineerde dieren gevonden. Twee en drie weken na de challenge werd er geen virus meer gevonden in de gevaccineerde dieren, terwijl de controle dieren nog volop viremisch waren. Behalve de serologische réspons heeft deze onderzoeksgroep van het CReSA in Barcelona ook gekeken naar cellulaire immuniteit veroorzaakt door Porcilis PCV. Na een enkelvoudige injectie werd een duidelijke cellulaire respons waargenomen, met een snelle en duidelijke anamnestische respons na challenge (figuur 17). 14 gemiddelde PCV antilichaam titer (IPMA) % PCV viremische dieren na challenge bij enkelvoudige vaccinatie ge log IPMA weken (vaccinatie) Figuur 14 6 weken 7 weken 8 weken 9 weken (challenge) leeftijd niet gevaccineerd - geen challenge niet gevaccineerd - challenge gevaccineerd - geen challenge gevaccineerd - challenge % positieve dieren weken (vaccinatie) 6 weken (challenge) Porcilis PCV (n=6) 7 weken 8 weken 9 weken leeftijd controle (niet gevaccineerd, n=18) % positieve dieren weken (vaccinatie) 6 (ch P 7 6 gemiddelde virusload na challenge bij enkelvoudige vaccinatie Challenge weken na vaccinatie (DOI) hoeveelheid PCV in lymfatisch weefsel 3 weken na challenge Figuur Inductie van kapsel specifieke interferon gamma producerende cellen na vaccinatie en challenge log % positieve dieren 1 DNA copieën/µl weken 6 weken 7 weken 8 weken 9 weken (vaccinatie) In. Mesenteriales(challenge) Inn. Inguinales Milt Tonsil orgaan leeftijd aantal interferon gamma producerende cellen/1 6 PBMC weken (vaccinatie) 6 weken (challenge) 7 weken 8 weken 9 weken leeftijd Porcilis PCV one shot Porcilis PCV Porcilis PCV controle two shot (niet gevaccineerd) controle (niet gevaccineerd) vaccinatie en challenge alleen vaccinatie alleen challenge Figuur 16 Figuur 17

18 18 Porcilis PCV: veldproeven Ervaringen met Porcilis PCV, gegevens uit praktijkproeven. Registratiestudie Tijdens het registratieproces in Japan zijn diverse praktijkstudies met succes uitgevoerd en werden geregistreerde labelclaims officieel goedgekeurd voor zowel het x ml vaccinatieschema op de leeftijd van drie dagen en drie weken als het 1 x ml vaccinatieschema vanaf de leeftijd van drie weken. De onderstaande figuur toont het percentage uitval van 4-4 weken leeftijd. Er is een duidelijk verschil te zien tussen de gevaccineerde groep en de controlegroep. In deze officiële veldstudie werd geen verschil gevonden tussen een enkelvoudige en een dubbele vaccinatie. Sterfte 3% 3.5% 31.6% % 1% % 3% 4% 5% Porcilis PCV x ml Porcilis PCV 1x ml Controlegroep figuur 18: Sterfte percentage van gevaccineerde biggen t.o.v. de controle groep Behalve deze opmerkelijke stijging van het aantal biggen dat een infectie met een PCV-veldvirus overleeft, werd ook een aanzienlijke verhoging van de groei waargenomen (figuur 19). Groei per dier per dag Porcilis PCV x ml Porcilis PCV 1x ml Controlegroep Figuur 19: Gemiddelde dagelijkse groei van gevaccineerde biggen t.o.v. controlegroep

19 Porcilis PCV beschermt van start tot finish! 19 Europese studie PCVAD in Europa betreft voornamelijk achterblijvende groei, verlies van uniformiteit en steiging van antibiotica gebruik. In de hierna samengevatte studie verricht door de Ludwig-Maximilians- Universiteit in München is gekeken naar de groei en de uitval op een varkensbedrijf met milde PCVAD. Het betreft een dubbelblinde studie met 14 dieren per groep, gevaccineerde en controle dieren zaten bij elkaar in 1 hok. Porcilis PCV Lichaamsgewicht 1 e week Lichaamsgewicht 3 e week Lichaamsgewicht 11 e week Lichaamsgewicht 4 e week Groei/dier/dag vleesvarken Enkelvoudige vaccinatie 3 e week. kg 5.75 kg 9.99 kg 97.8 kg* 739 gram* Controle groepniet gevaccineerd.17 kg 5.77 kg 3.65 kg 94.8 kg 75 gram *significant verschil met controlegroep (P<.5) tabel 1: Groei en uitval bij vleesvarkens, veldproef van de Universiteit van München Na deze vaccinatie studie is dit bedrijf alle biggen gaan vaccineren op drie weken leeftijd. Figuur laat het verschil in sterfte zien na de introductie van Porcilis PCV. uitval vleesvarkens in gemiddelde 95% betrouwbaarheids interval Introductie Porcilis PCV 1.5 p<,5 1.5 Jan Feb Mrt Apr Mei Juni Juli Aug Sep Okt Nov Dec Jan Feb Mrt Apr Mei Juni Juli Aug Sep Okt Nov Dec figuur Dit zijn slechts enkele van de vele voorbeelden van praktijkervaringen met Porcilis PCV. De stijging van de groei is een constant resultaat op bedrijven met milde PCVAD.

20 GLP en veiligheidstests in de praktijk De veiligheid van nieuwe vaccins wordt getest onder laboratoriumomstandigheden volgens de richtlijnen van Good Laboratory Practice (GLP) en in de praktijk volgens de richtlijnen van Good Clinical Practice (GCP). De volgende tekst komt uit de bijsluiter van Porcilis PCV: Voorbijgaande lokale reacties op de injectieplaats kunnen na vaccinatie voorkomen, voornamelijk in de vorm van een harde, warme en soms pijnlijke zwelling (diameter tot 1 cm). Deze reacties verdwijnen spontaan na een periode van 14-1 dagen zonder belangrijke gevolgen voor de algemene gezondheidsstatus van de dieren. Onmiddellijke systemische overgevoeligheidsachtige reacties kunnen na vaccinatie voorkomen, resulterend in geringe neurologische symptomen zoals trillingen en/of excitatie, die meestal binnen enkele minuten verdwijnen zonder dat behandeling noodzakelijk is. Een voorbijgaande verhoging van de lichaamstemperatuur, meestal niet meer dan 1 C, kan voorkomen tot dagen na vaccinatie. Af en toe kan een verhoging van de rectaaltemperatuur tot,5 C voorkomen die minder dan 4 uur duurt. Sommige biggen kunnen neerslachtig zijn en een verminderde voedselopname vertonen gedurende maximaal 5 dagen. Vaccinatie kan resulteren in een voorbijgaande afname van de groeisnelheid in de periode direct na toediening van het vaccin. Aan de hand van de tot nu toe opgedane ervaring met Porcilis PCV kan worden geconcludeerd dat deze bijwerkingen een lage incidentie hebben. De waargenomen reacties kunnen verschillen, afhankelijk van het bedrijf, het management en de toegepaste vaccinatietechniek. Het wordt aanbevolen het product eerst op kamertemperatuur te laten komen alvorens het te gebruiken (minimaal drie uur uit de koelkast). Verder dient het vaccin toegediend te worden met schone vaccinatiematerialen, door middel van steriele naalden met de juiste maat en door toepassing van de juiste vaccinatietechniek

21 Porcilis PCV beschermt van start tot finish! 1 Samenvatting van de productkenmerken van Porcilis PCV Elke dosis van ml bevat: Porcine circovirus type ORF subunit antigeen: ten minste 4,5 log ELISA eenheden zoals verkregen in de in vivo potency test bij kippen. Adjuvantia: 5 mg dl- α -tocoferylacetaat 346 mg licht vloeibare paraffine Farmaceutische vorm: Emulsie voor injectie Doeldier: Varkens Indicaties voor gebruik: Voor de actieve immunisatie van varkens om de virusload in bloed en lymfatisch weefsel te verminderen en om sterfte en gewichtsafname geassocieerd met PCV-infectie gedurende de vleesvarkensperiode te verminderen. Aanvang van de immuniteit: weken. Duur van de immuniteit: weken. Contra-indicaties: Geen Speciale waarschuwingen: Uit de geleverde gegevens kan geconcludeerd worden dat een enkelvoudige vaccinatie door gemiddelde niveaus en een tweevoudige vaccinatie door gemiddelde tot hoge niveaus van maternale antilichamen in biggen heen breekt. Er zijn geen gegevens beschikbaar over het gebruik van het vaccin in fokberen. Speciale voorzorgsmaatregelen voor gebruik bij dieren: Vaccineer alleen gezonde dieren. Speciale voorzorgsmaatregelen, te nemen door degene die het geneesmiddel aan de dieren toedient: Voor de gebruiker: Dit geneesmiddel bevat minerale olie. Accidentele injectie/ zelfinjectie kan ernstige pijn en zwelling tot gevolg hebben, vooral in geval van injectie in een gewricht of vinger. Zonder snel medisch ingrijpen kan dit in zeldzame gevallen leiden tot verlies van de betrokken vinger. Raadpleeg in geval van accidentele injectie onmiddellijk een arts, zelfs wanneer de geïnjecteerde hoeveelheid miniem is. Zorg ervoor dat u de bijsluiter bij u heeft. Consulteer opnieuw een arts, als de pijn meer dan 1 uur na het eerste medisch onderzoek aanhoudt. Voor de arts: Dit geneesmiddel bevat minerale olie. Accidentele injectie, zelfs met kleine hoeveelheden, kan hevige zwelling veroorzaken die bijvoorbeeld kan leiden tot ischemische necrose en zelfs tot verlies van een vinger. Onderzoek door een deskundig chirurg is met SPOED vereist. Het kan nodig zijn in een vroeg stadium een incisie te maken in het geïnjecteerde gebied en dit te irrigeren, met name wanneer de weke massa van de vinger of pezen aangetast zijn. Niet gebruiken tijdens dracht en lactatie. Er is geen informatie beschikbaar over de veiligheid en werkzaamheid van dit vaccin bij gebruik in combinatie met enig ander diergeneesmiddel. Ten aanzien van het gebruik van dit vaccin vóór of na enig ander diergeneesmiddel dient per geval een besluit te worden genomen. Niet vermengen met een ander diergeneesmiddel. Bijwerkingen: Voorbijgaande lokale reacties op de injectieplaats kunnen na vaccinatie voorkomen, voornamelijk in de vorm van een harde, warme en soms pijnlijke zwelling (diameter tot 1 cm). Deze reacties verdwijnen spontaan na een periode van 14-1 dagen zonder belangrijke gevolgen voor de algemene gezondheidsstatus van de dieren. Onmiddellijke systemische overgevoeligheidsachtige reacties kunnen na vaccinatie voorkomen, resulterend in geringe neurologische symptomen zoals trillingen en/of

22 excitatie, die meestal binnen enkele minuten verdwijnen zonder dat behandeling noodzakelijk is. Een voorbijgaande verhoging van de lichaamstemperatuur, meestal niet meer dan 1 C, kan voorkomen tot dagen na vaccinatie. Af en toe kan een verhoging van de rectaaltemperatuur tot,5 C voorkomen die minder dan 4 uur duurt. Sommige biggen kunnen neerslachtig zijn en een verminderde voedselopname vertonen gedurende maximaal 5 dagen. Vaccinatie kan resulteren in een voorbijgaande afname van de groeisnelheid in de periode direct na toediening van het vaccin. Indien u ernstige bijwerkingen of andersoortige reacties vaststelt die niet in deze bijsluiter worden vermeld, wordt u verzocht uw dierenarts hiervan in kennis te stellen. Dosering, gebruik en toedieningsweg: Dien één dosis van ml toe via intramusculaire injectie in de nek, in het gebied achter het oor, volgens het onderstaande schema: Bij lage tot gemiddelde niveaus van maternale antilichamen tegen PCV wordt een enkelvoudige vaccinatie ( ml) van varkens vanaf de leeftijd van 3 weken geadviseerd. Als hogere niveaus van maternale antilichamen te verwachten zijn wordt het volgende schema van vaccinaties geadviseerd: de eerste injectie ( ml) kan worden gegeven vanaf de leeftijd van 3-5 dagen, de tweede injectie ( ml) -3 weken later. Hoge niveaus van maternale antilichamen kunnen worden verwacht wanneer zeugen/gelten worden gevaccineerd tegen PCV virus of wanneer zeugen/gelten recent zijn blootgesteld aan hoge niveaus van PCV virus. In dergelijke gevallen wordt geadviseerd om PCV serologie met geschikte diagnostica uit te voeren om het meest geschikte vaccinatieschema vast te stellen. Pas in geval van twijfel het tweevoudige vaccinatieschema toe. Wachttijd: Nul dagen. Speciale voorzorgsmaatregelen bij bewaren: Buiten het bereik en zicht van kinderen bewaren. Bewaren in een koelkast bij C - 8 C. Niet laten bevriezen. Beschermen tegen licht. Houdbaarheid na eerste opening van de flacon: 8 uur. Speciale voorzorgsmaatregelen voor het verwijderen van niet-gebruikte diergeneesmiddelen of eventuele restanten hiervan. Ongebruikte diergeneesmiddelen of restanten hiervan dienen in overeenstemming met de lokale vereisten te worden verwijderd. Houder van de vergunning voor het in de handel brengen en fabrikant: Intervet International B.V. Wim de Körverstraat AN Boxmeer Nederland

23 Porcilis PCV het enige geregistreerde 1 SHOT circo vaccin dat weken lang beschermt 1 SHOT ML 3 WEKEN Porcilis PCV: 1 shot van ml vanaf 3 weken leeftijd De inzet van Porcilis PCV wordt ondersteund met ResPig: het diagnostisch- en monitoringssysteem van Intervet voor varkensbedrijven.

24 1 Intervet International B.V. Alle rechten voorbehouden. itemnummer: UIN 1