Molculair iagnostik intstinal parasitn Tho Schuurs, molculair bioloog Li namns WMDI / NVMM Ronzningn SKML-parasitologi - x pr ar ronzning t.b.v. tcti arm n bloparasitn - fcs- n blomonstrs (gfixr matriaal) - 9 participrn laboratoria () > 9 bi panls > 9 alln blo-, alln fcs-panl, Cntrum Infctiziktn Frislan, Luwarn - matriaal nit gschikt voor molculair iagnostik (Mx) - -: pilotfas fcsmonstrs (E n F) voor Mx Aanbirs kwalititsronzningn (tot voor kort) parasitn gfixr -UK NEQAS -QCMD n - - Instan n - - SKML-para.: Introucti fcspanl gschikt voor Mx Dol: tstn kwalitit molculair iagnostik armparasitn Voorwaarn: - pathogn in fcs > gn gvrisroog matriaal > gn DNA > nit gfixr - kwalitatif hoogwaarig: rproucrbaar, homogn n stabil fcs-monstrs - uitagn loas - rsultatn lnmrs koppln aan gbruikt mthon
Polymras Chain Raction (PCR) PCR PCR A B A B Ct= Ct=. Lag Ct = vl targt aanwzig = hog loa Hog Ct = winig targt aanwzig = lag loa
Workflow monstrs molculair panl (SKML-parasitologi) Routin monstr afkomstig rf. lab (t=- tot -9) Vrvaarign ronzning (t=-9) Ronsturn panl (t=) Kwalititscontrol: Documntati Ronzning fcs PCR SKML n ronzning Nummr FMB- FMB- FMB- Matriaal : Hovlhi Aanglvr oor HZH/Erasmus Klinisch ggvns Datum briing -- -- -- Vris ooi cyclus Vrzonn naar rf. lab -- -- -- PIN Datum bvining -- Uitslag Microscopi CR EH Uitslag PCR GL CR CR EH CT-waar 9,, onb onb Uitgvor oor: Datum -plo -jul Uitslag -plo,,,,,,,,,9,,,,,,,9,,,, FMB- Haarlm -- -- Tst rf. labs (t=-) Tst -plo (t=-) Gm.,,,,9 SD.,,,,9 Uitslag PCR GL Uitslag rf. lab GL CR CR EH Gm.,9,,, SD.,,,, CT-waar max.,,,, CT-waar min.,,,, Gschikt voor ronzning Opmrking Nummr ronzning -F -E..E..F Datum ronzning -- -- Casus.. Vripingsvragn.. Aantal lnmrs 9 9 Aantal inzningn op targt % % % % 9% Aantal corrct 9 %,%,9% % 9,% CT-waar gm,, 9,, SD.,,,9,9 CT-waar max. CT-waar min. Ovrig bviningn, al an nit in combinati CR GL ng Kwalititscontrol: Documntati Nummr Matriaal Hovlhi Aanglvr oor Klinisch ggvns Datum briing Vris ooi cyclus Vrzonn naar rf. lab PIN Datum bvining Uitslag Microscopi CR EH Uitslag PCR GL CR CR EH CT-waar 9,, onb onb Uitgvor oor: Datum -plo FMB- : -- -- -- -jul Ronzning fcs PCR SKML n ronzning FMB- -- -- -- -- Uitslag -plo,,,,,,,,,9,,,,,,,9,,,, Gm.,,,,9 SD.,,,,9 Uitslag PCR GL Uitslag rf. lab GL CR CR EH Gm.,9,,, SD.,,,, CT-waar max.,,,, CT-waar min.,,,, FMB- HZH/Erasmus FMBfcs P Haarl -- -- HZH/E Ovrzicht (pilot ar) parasit n (corrct) n (totaal) Ct/Cp opmrkingn.e G. lamblia -.F E. histolytica - G. lamblia -.E - - B.hominis (n=9).f D. fragilis - B.hominis (n=9) S. strcoralis (n=).e Crypto. spp. 9 ng (n=); Giaria (n=).f G. lamblia Crypto. spp. (n=).e Crypto. spp. 9 ng (n=).f E. histolytica ng (n=) Gschikt voor ronzning Opmrking Nummr ronzning -F -E..E.
lnmrs -E Cryptosporiium spp. lnmrs -E Cryptosporiium spp. 9 9 c b a 9 9 lnmrs -E Cryptosporiium spp. lnmrs -E Cryptosporiium spp. c b a 9 9 c b a 9 9 -E Cryptosporiium spp. -F Entamoba histolytica c c b a 9 Ct/Cp-waar b a 9
Vripingsvragn: Gbruikt apparatuur/mthon Vripingsvragn: Gbruikt apparatuur/mthon Gbruikt apparatuur:. Biomriux (asymag) + Appli Biosystm (ABI ) (x). Biomriux (asymag) + Roch (Lightcyclr). Biomriux (asymag) + Stratagn (MX). Biomriux (asymag) + Biora (CFX) (x). Qiagn (QIA symphony) + RotrGn (x). Qiagn (man. Stool kit) + Cphi (Smartcyclr). Roch (Magnapur) + Roch (Lightcyclr) (x). Roch (Magnapur) + Appli Biosystm (ABI) (x) 9. Roch (Magnapur) + Qiagn (Rotorgn) Wat btrft targts: Giaria lamblia - Small SubUnit ribosomaal RNA gn (volgns Vrwij t al J. Clin.Microbiol, -) - S ribosomaal RNA gn (in hous tst) - Light Mix Kit Parasital Gastrontritis, (TIB MOLBIOL) Cryptosporiium spp. - Small SubUnit ribosomaal RNA gn (volgns Fontain & Guillot. FEMS Microbiol. Ltt. :-). - Cryptosporiium -spcifik fragmnt van s RNA gn (volgns Vrwij t al J. Clin.Microbiol, -) - DNAJ-lik iwit (volgns Bruijnstijn t al. Clin Microbiol Infct 9::9) - Cryptosporiium oocyst wall gn (COWP) volgns Guy t al. Appl Env Microbiol 9:- - Light Mix Kit Parasital Gastrontritis, (TIB MOLBIOL) Vripingsvragn (-): Gbruikt apparatuur/mthon Qbas: Invor uitslagn Wat btrft targts: Dintamoba fragilis - intrnal transcrib spacr van,s ribosomaal RNA gn (volgns Vrwij t al. Mol Cll Probs ::) - Light Mix Kit Parasital Gastrontritis, TIB, MOLBIOL Entamoba histolytica - Small SubUnit ribosomaal RNA gn (volgns Vrwij, JJ t al J. Clin.Microbiol, -) - Small SubUnit ribosomaal RNA gn (volgns Vrwij, t al, J. Clin.Microbiol, -, aangpast oor Brgmans) - Small SubUnit ribosomaal RNA gn (volgns Vrwij, t al., Tropical Micin an Intrnational Halth :-) - S rrna gn (in hous tst) - Light Mix Kit Parasital Gastrontritis, (TIB MOLBIOL) - Galactos spcific ahsin gn (in hous tst)
Qbas: Invor uitslagn Samnvattn molculair ronzningn SKML-parasitologi Vanaf. officil gstart mt molculair ronzning - klinisch fcsmonstrs, als apart ronzning (x/ar) - gïnvstr in monitoring/borging kwalitit ronzning - Q-bas goptimalisr (invor alswl rapportag: MUSE) Rapportag MUSE Samnvattn molculair ronzningn SKML-parasitologi Vanaf. officil gstart mt molculair ronzning - klinisch fcsmonstrs, als apart ronzning (x/ar) - gïnvstr in monitoring/borging kwalitit ronzning - Q-bas goptimalisr (invor alswl rapportag: MUSE) Nabij tokomst: - koppln rsultatn aan mthon (rapportag) - vrr optimalisati stabilitit fcsmonstrs (stui)