Maxwell CSC RNA Blood Kit

Transcriptie

1 TECHNISCHE HANDLEIDING Maxwell CSC RNA Blood Kit Gebruiksaanwijzing van product AS1410 Voorzichtig: Behandel cartridges voorzichtig; randen van de afdichting kunnen scherp zijn. GEBRUIKSAANWIJZING VAN PRODUCT AS Woods Hollow Rd. Madison, WI USA MDSS GmbH Schiffgraben Hannover, Germany Herzien op 18-5 TM434

2 Maxwell CSC RNA Blood Kit Alle technische beschrijvingen kunnen ook worden geraadpleegd op: Controleer op de website of u de meest recente versie van deze technische handleiding gebruikt. Stuur een naar de technische dienst van Promega als u vragen hebt over het gebruik van dit systeem: techserv@promega.com 1. Beschrijving Productonderdelen, opslagomstandigheden en verklaring van symbolen Beoogd gebruik van product Beperkingen voor gebruik van product Voordat u begint: Oplossingen bereiden Zuivering van RNA uit vers volbloed in EDTA-afnamebuizen A. Voorbewerking van volbloedmonsters B. Maxwell CSC Cartridge voorbereiden Instrumentcyclus Na zuivering Problemen oplossen Een ribonucleasevrije omgeving tot stand brengen Literatuurverwijzingen Gerelateerde producten Samenvatting van wijzigingen De Maxwell CSC RNA Blood Kit is alleen leverbaar in bepaalde landen. Dit product voldoet aan de essentiële vereisten van EU-richtlijn 98/79/EG betreffende medische hulpmiddelen voor in-vitrodiagnostiek. 1. Beschrijving De Maxwell CSC RNA Blood Kit (a,b) wordt gebruikt in combinatie met het Maxwell CSC Instrument als eenvoudige methode voor efficiënte, geautomatiseerde zuivering van RNA uit vers (niet ingevroren) humaan volbloed dat is afgenomen in EDTA-buizen. Het Maxwell CSC Instrument wordt geleverd met voorgeprogrammeerde zuiveringsmethoden. Het instrument is ontworpen voor gebruik met de vooraf gevulde reagenscartridges en aanvullende reagentia die in de kit zijn meegeleverd, voor zoveel mogelijk eenvoud en gemak. Het instrument kan maximaal 16 monsters in ongeveer 60 minuten verwerken en het gezuiverde RNA kan rechtstreeks worden gebruikt in verschillende verdere amplificatietoepassingen, zoals RT-PCR. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op 18-5

3 1. Beschrijving (vervolg) De Maxwell CSC RNA Blood Kit zuivert RNA met behulp van paramagnetische deeltjes die een mobiele, solide fase bieden voor de optimalisatie van het uit monsters verkrijgen, wassen en zuiveren van RNA. Het Maxwell CSC Instrument is een instrument voor het hanteren van magnetische deeltjes. Dit systeem maakt efficiënte binding van RNA met de paramagnetische deeltjes mogelijk in de eerste kamer van een vooraf gevulde cartridge en verplaatst het monster door de kamers van de cartridge. Dankzij deze aanpak voor het op magnetische wijze verkrijgen van RNA worden problemen vermeden die doorgaans verband houden met systemen voor het hanteren van vloeistoffen, zoals verstopte tips of de gedeeltelijke overdracht van reagens, die leiden tot suboptimale zuiveringsprocessen door andere veelgebruikte systemen. 2. Productonderdelen, opslagomstandigheden en verklaring van symbolen PRODUCT INHOUD CATALOGUSNR. Maxwell CSC RNA Blood Kit 48 isolaties AS1410 Voor gebruik bij in-vitrodiagnostiek. Uitsluitend bestemd voor professioneel gebruik. Voldoende voor 48 geautomatiseerde isolaties uit bloedmonsters. De Maxwell CSC Cartridges zijn uitsluitend bestemd voor eenmalig gebruik. 15 C 30 C 6010TB 48 Onderdelen van de kit: 48 Maxwell CSC RNA Blood Cartridges 4 100ml Solution A 30ml Solution B 20ml Lysis Buffer 2 vials DNase I (lyophilized) 900µl 1-Thioglycerol 100µl Blue Dye 2 1ml Proteinase K (PK) Solution 25ml Nuclease-Free Water 50 CSC/RSC Plungers 50 Elution Tubes (0.5ml) Opslagomstandigheden: Verwijder direct na ontvangst de 1-thioglycerol en sla deze op bij 2 C 10 C. Sla de overige onderdelen van de kit op bij kamertemperatuur (15 C 30 C). 1-thioglycerol kan worden opgeslagen bij kamertemperatuur (15 C 30 C) en blijft dan maximaal 9 maanden stabiel. Sla opnieuw gehydrateerd DNase I op bij 30 C tot 10 C. Herhaal de cyclus van bevriezing en ontdooiing maximaal 10 keer. 2 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op

4 Veiligheidsinformatie: De reagenscartridges bevatten ethanol, wat ontvlambaar is. 1-thioglycerol is giftig. Guanidinethiocyanaat en guanidine-hydrochloride (bestanddelen van oplossing B en lysisbuffer) zijn schadelijke en irriterende stoffen. De lysisbuffer is mogelijk ook schadelijk voor een ongeboren kind. Draag handschoenen en volg standaard veiligheidsprocedures wanneer u met deze stoffen werkt. De onderdelen van de Maxwell CSC RNA Blood Kit zijn ontworpen voor gebruik met mogelijk infectieuze stoffen. Gebruikers dienen passende persoonlijke beschermingsmiddelen te dragen (bijvoorbeeld handschoenen, een laboratoriumjas en een veiligheidsbril) bij het hanteren van infectieuze stoffen. Gebruikers dienen de richtlijnen van de instelling te volgen met betrekking tot het hanteren en afvoeren van alle infectieuze stoffen die bij dit systeem worden gebruikt. Opmerking: Bleekmiddel reageert met ammoniumchloride en guanidinethiocyanaat en produceert daarbij giftige dampen. Guanidinethiocyanaat en ammoniumchloride zijn aanwezig in respectievelijk oplossing B en oplossing A. Ontsmet afval van deze kit niet met bleek. Voorzichtig: Behandel cartridges en geopende flacons gevriesdroogde DNase I voorzichtig; randen kunnen scherp zijn. Aanvullende informatie: De onderdelen van de Maxwell CSC RNA Blood Kit zijn geschikt voor onderlinge interactie en hebben hiervoor kwaliteitscontroles ondergaan. Het wordt afgeraden onderdelen van kits uit verschillende kitpartijen door elkaar te gebruiken. Gebruik alleen onderdelen uit de kit. Zie het blad met materiaalveiligheidsgegevens voor aanvullende veiligheidsinformatie. Dit blad is beschikbaar op: Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op 18-5

5 2. Productonderdelen, opslagomstandigheden en verklaring van symbolen (vervolg) Verklaring van symbolen Symbool Uitleg Symbool Uitleg Medisch hulpmiddel voor in-vitrodiagnostiek Gemachtigde in de 15 C 30 C Opbevares ved C Woods Hollow Rd. Madison, WI USA Fabrikant Voorzichtig Irriterende stof Kankerverwekkende stof Gifstof Bijtende stof Voldoende voor 'n' tests Conformité Européenne Waarschuwing. Biologisch gevaarlijk materiaal. Waarschuwing. Gevaar voor beknelling. Catalogus nummer Code van de part i j Niet opnieuw gebruiken 4 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op

6 3. Beoogd gebruik van product De Maxwell CSC RNA Blood Kit is bestemd voor gebruik in combinatie met het Maxwell CSC Instrument en de Maxwell CSC RNA bloedzuiveringsmethode, als medisch hulpmiddel voor in-vitrodiagnostiek (IVD) voor het uitvoeren van geautomatiseerde isolatie van RNA uit 2,5 ml humaan volbloed dat is afgenomen in EDTAafnamebuizen, met een aantal witte bloedcellen (WBC) van tot WBC per milliliter. Het gezuiverde RNA is geschikt voor gebruik bij in-vitrodiagnostische amplificatieproeven. De Maxwell CSC RNA Blood Kit is bestemd voor gebruik met 2,5 ml humaan volbloed. De Maxwell CSC RNA Blood Kit is bestemd voor gebruik bij temperaturen tussen 15 C en 30 C. Gebruik bij temperaturen buiten dit bereik kan leiden tot suboptimale resultaten. De Maxwell CSC RNA Blood Kit is niet bestemd voor gebruik als onderdeel van een specifieke diagnostische test. De Maxwell CSC RNA Blood Kit is uitsluitend bestemd voor professioneel gebruik. Diagnostische resultaten die zijn verkregen met gebruik van het RNA dat met dit systeem is gezuiverd, moeten in combinatie met andere klinische gegevens of laboratoriumgegevens worden geïnterpreteerd. 4. Beperkingen voor gebruik van product De Maxwell CSC RNA Blood Kit is uitsluitend bestemd voor gebruik met monsters van humaan volbloed die zijn afgenomen in EDTA-buizen. De kit is niet bestemd voor gebruik met niet-volbloedmonsters, zoals beenmerg of buffy-coat, monsters die zijn opgeslagen in andere afnamebuizen of monsters die zijn opgeslagen buiten de productclaims. De Maxwell CSC RNA Blood Kit is niet bestemd voor gebruik met niet-humane monsters of voor de zuivering van DNA. De prestaties van de Maxwell CSC RNA Blood Kit zijn geëvalueerd voor de isolatie van RNA uit 2,5 ml humaan volbloed in EDTA-afnamebuizen. De kit is niet bestemd voor monsters groter of kleiner dan 2,5 ml. De kit is niet bestemd voor gebruik met volbloed uit andere afnamebuizen dan EDTA-buizen. De kit is niet bestemd voor gebruik met monsters die minder dan WBC per milliliter bevatten of monsters die meer dan WBC per milliliter bevatten. De gebruiker is verantwoordelijk voor het vaststellen van de prestatie-eigenschappen die noodzakelijk zijn voor verdere diagnostische toepassingen. Voor verdere diagnostische toepassingen waarbij gebruik wordt gemaakt van RNA dat met de Maxwell CSC RNA Blood Kit is gezuiverd, moeten passende controles worden uitgevoerd. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op 18-5

7 5. Voordat u begint: Oplossingen bereiden 1-thioglycerol/oplossing B Bereid een mengsel van 1-thioglycerol/oplossing B aan de hand van een van de volgende methoden: Voeg 600 µl 1-thioglycerol toe aan een fles oplossing B en meng grondig. 1-thioglycerol is viskeus en voor nauwkeurige metingen is zorgvuldig pipetteren vereist. Koel de 1-thioglycerol/oplossing B voor gebruik op ijs of bij 2 C 10 C. U kunt ook kleinere volumes bereiden door 20 µl 1-thioglycerol per milliliter oplossing B toe te voegen. Bereid 200 µl gekoelde 1-thioglycerol/oplossing B per monster. Opmerking: Sla bereide 1-thioglycerol/oplossing B op bij 2 C 10 C; deze blijft dan maximaal 30 dagen stabiel. DNase I Voeg 275 µl nucleasevrij water toe aan de flacon gevriesdroogde DNase I. Spoel de DNase I van de onderzijde van de dop door de flacon om te keren en meng de inhoud door de flacon voorzichtig horizontaal heen en weer te bewegen zonder een vortex te creëren. Voeg 25 µl blauwe kleurstof toe aan de gereconstitueerde DNase I als visueel hulpmiddel voor het pipetteren en de cartridgevoorbereiding. Voor elke zuivering is 10 µl voorbereide DNase I-oplossing nodig. Sla gereconstitueerde DNase I op bij 30 C tot 10 C. Herhaal de cyclus van bevriezing en ontdooiing maximaal tien keer. Voorzichtig: Open de flacon DNase I voorzichtig; de randen van de flacon kunnen scherp zijn. 6. Zuivering van RNA uit vers volbloed in EDTA-afnamebuizen Handhaaf een RNase-vrije omgeving tijdens verwerking. Gebruik altijd RNase-vrije en aërosolresistente pipet-tips. Verwissel handschoenen regelmatig om de kans op RNase-besmetting te reduceren. Zie voor details hoofdstuk 10, Een ribonucleasevrije omgeving tot stand brengen. Extra benodigde materialen volbloed in EDTA-afnamebuizen (niet ingevroren); bloed kan voorafgaand aan zuivering maximaal 3 dagen worden opgeslagen bij 2 C 10 C microcentrifuge serologische pipetten van 10 ml (steriel) pipetten en RNase-vrije, steriele, aërosolresistente pipet-tips buizen van 15 ml (steriel) centrifuge met swinging-bucket-rotor 6 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op

8 6.A. Voorbewerking van volbloedmonsters 1. Breng 2,5 ml goed gemengd volbloed (niet ingevroren) over van de EDTA-afnamebuizen naar een steriele buis van 15 ml. 2. Voeg 7,5 ml oplossing A toe en meng de inhoud door de buis 5 10 keer om te keren. Dit is een stap met differentiële lysis; de rode bloedcellen worden gelyseerd terwijl de witte bloedcellen intact blijven. 3. Incubeer de lysaten gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Keer de monsters tijdens de incubatie twee keer om zoals in stap 2 om de inhoud te mengen. 4. Centrifugeer de buis of buizen gedurende 10 minuten op 3,000 g in een swinging-bucket rotor. 5. Verwijder het supernatant door middel van decanteren of pipetteren. Centrifugeer de buis kort om het resterende vocht op de bodem van de buis te verzamelen. Verwijder met behulp van een pipet zoveel mogelijk resterend supternatant en voer dit af zonder de zichtbare WBC-pellet te verstoren. 6. Voeg 200 µl gekoelde 1-thioglycerol/oplossing B toe aan de pellet, en vortex om de pellet opnieuw te suspenderen. 7. Voeg 200 µl lysisbuffer en 25 µl proteïnase K toe aan de opnieuw gesuspendeerde pellet. Meng door seconden te vortexen. Opmerking: Wanneer u tijdens de voorbewerking moet stoppen, kunnen de monsters na stap 7 maximaal 5 dagen worden opgeslagen bij 30 C tot 10 C. Bij deze opslagtemperaturen kunnen de monsters al dan niet volledig bevriezen. Wanneer u klaar bent om de zuivering van het monster te hervatten, ontdooit u de buizen gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur voordat u doorgaat naar de volgende stap. 8. Incubeer gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Bereid in de tussentijd cartridges voor zoals beschreven in hoofdstuk 6.B. 9. Voeg lysaten toe aan kamer 1 van de Maxwell CSC RNA Blood Cartridge (de grootste kamer van de cartridge). Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op 18-5

9 6.B. Maxwell CSC Cartridge voorbereiden 1. Verwissel handschoenen voordat u Maxwell CSC RNA Blood Cartridges, CSC/RSC-plunjers en elutiebuizen hanteert. Cartridges worden buiten het instrument opgesteld op de Maxwell CSC Deck Tray en dit rek met de cartridges en monsters wordt vervolgens voor zuivering in het instrument geplaatst. Plaats de cartridges die moeten worden gebruikt in de Maxwell CSC Deck Tray (afbeelding 2). Plaats elke cartridge in het rek met kamer 1 (de grootste kamer van de cartridge) het verst bij de elutiebuizen vandaan. Druk de cartridge naar beneden tot deze in de juiste plaats klikt. Controleer of beide uiteinden van de cartridge volledig op het rek zijn geplaatst. Trek de afdichting er voorzichtig af zodat de volledige afdichting van de bovenzijde van de cartridge wordt verwijderd. Zorg dat alle afdichtingstape en eventuele plakresten van de cartridge worden verwijderd. Voorzichtig: Behandel cartridges voorzichtig; randen van de afdichting kunnen scherp zijn. 2. Plaats een CSC/RSC-plunjer in kamer 8 van elke cartridge. Opmerking: Gebruik uitsluitend de plunjers uit de Maxwell CSC RNA Blood Kit. Plunjers uit de Maxwell 16 LEV en SEV Kits zijn niet compatibel met het Maxwell CSC Instrument. 3. Plaats voor elke cartridge een lege elutiebuis in de elutiebuispositie in de Maxwell CSC Deck Tray. Opmerking: Gebruik uitsluitend de elutiebuizen uit de Maxwell CSC RNA Blood Kit. Andere elutiebuizen zijn mogelijk niet compatibel met het Maxwell CSC Instrument en kunnen van invloed zijn op de RNAzuiveringsprestaties. 4. Voeg 50 µl nucleasevrij water toe op de bodem van elke elutiebuis. De elutiebuizen moeten open blijven gedurende de RNA-zuivering. Opmerking: Gebruik uitsluitend het nucleasevrije water uit de Maxwell CSC RNA Blood Kit. Gebruik van andere elutiebuffers kan van invloed zijn op de RNA-zuiveringsprestaties of verder gebruik. 5. Voeg 10 µl gereconstitueerde DNase I (blauw) toe aan kamer 4 (geel) van elke cartridge. De resulterende groene kleur is een visuele indicatie dat DNase I-oplossing is toegevoegd aan kamer 4. 8 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op

10 6.B. Maxwell CSC Cartridge voorbereiden (vervolg) Opmerkingen over voorbereiding van Maxwell CSC RNA Blood Cartridge 1. Als u minder dan 16 monsters verwerkt, dient u de cartridges in het midden van het rek te plaatsen. 2. Reinig de Maxwell CSC Deck Tray volgens de bedieningshandleiding van het Maxwell CSC Instrument als er monsters of reagentia op zijn gemorst. Gebruik geen bleekmiddel op onderdelen van het instrument Inhoud van kamers 1. Bindingsoplossing 2. Magnetische deeltjes 3. Wasoplossing 4. DNase I-buffer 5. Bindingsoplossing 6. Wasoplossing 7. Wasoplossing 8. Leeg 11339TA Door gebruiker aan kamers toegevoegd 1. Voorbewerkt monsterlysaat µl voorbereide DNase I 8. CSC/RSC-plunjer Afbeelding 1. Maxwell CSC Cartridge. Bij deze afbeelding wordt de inhoud van een cartridge vermeld. Het voorbewerkte lysaat uit het bloedmonster wordt toegevoegd aan kamer 1, 10 µl DNase I wordt toegevoegd aan kamer 4 en een CSC/RSC-plunjer wordt toegevoegd aan kamer 8. Afbeelding 2. Opstelling en configuratie van de Maxwell CSC Deck Tray. Nucleasevrij water (50 µl) wordt op de getoonde wijze toegevoegd aan de elutiebuizen TB Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op 18-5

11 7. Instrumentcyclus De Maxwell CSC RNA Blood Method kan worden gedownload van de Promega-website: resources/tools/maxwellcscmethod. Zie de technische handleiding voor de installatie van Maxwell CSCmethoden (nr. TM401) voor gedetailleerdere informatie. Als u vermoedt dat het instrument is besmet met RNase, reinigt u het instrument voorafgaand aan gebruik met een reinigingsoplossing als Steris LpH. Volg de instructies in het hoofdstuk Reiniging en onderhoud van de bedieningshandleiding van het Maxwell CSC Instrument. 1. Schakel het Maxwell CSC Instrument en de tablet-pc in. De gebruikersinterface van het instrument wordt automatisch ingeschakeld en het instrument gaat door een zelf-check en zet alle bewegende delen terug in de oorspronkelijke positie. 2. Selecteer 'Starten' op het startscherm. 3. Scan of typ de streepjescode van de methode op het label van de Maxwell CSC RNA Blood Kit om de uit te voeren methode automatisch te selecteren (afbeelding 3). Opmerking: De streepjescode van de methode op de Maxwell CSC RNA Blood Kit is vereist voor RNAzuivering met het Maxwell CSC Instrument. Het kitlabel is voorzien van twee streepjescodes. De streepjescode van de methode wordt aangegeven in afbeelding 3. Neem contact op met de technische dienst van Promega als de code niet kan worden gescand. 4. Selecteer de uit te voeren posities van de cartridge (zie de bedieningshandleiding van het Maxwell CSC Instrument) en scan de vereiste informatie voor het volgen van het monster of voer deze handmatig in. Maak de selectie van ongebruikte posities ongedaan. Selecteer 'Doorgaan' wanneer alle informatie over het monster is ingevoerd TA Afbeelding 3. Kitlabel waarop de te scannen streepjescode van de methode wordt aangegeven. Met het rode kader en de pijl boven aan het label wordt de streepjescode van de methode op het label aangegeven. Scan deze streepjescode om een zuiveringscyclus te starten. 10 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op

12 7. Instrumentcyclus (vervolg) 5. Controleer op de tablet-pc of de monsters zijn toegevoegd aan kamer 1 van de cartridges (volgens de instructies in hoofdstuk 6.B), of de cartridges op het instrument zijn geladen, of de elutiebuizen met 50 µl nucleasevrij water aanwezig en open zijn, en of de plunjers zich in kamer 8 bevinden. 6. Verplaats de Maxwell CSC Deck Tray met de voorbereide cartridges naar het platform van het Maxwell CSC Instrument. Zorg dat het rek in het Maxwell CSC Instrument wordt geplaatst met de elutiebuizen het dichtst bij de deur. Het rek past alleen in deze richting het instrument. Als u problemen ondervindt bij het plaatsen van het rek op het platform, controleer dan of het rek zich in de juiste positie bevindt. Zorg dat het rek vlak op het instrumentplatform staat. Opmerking: Houd de Maxwell CSC Deck Tray vast bij de zijkanten om te voorkomen dat cartridges losraken uit het rek. Waarschuwing: Gevaar voor beknelling. 7. Bevestig dat alle aangegeven voorbewerkingen zijn uitgevoerd en raak 'Starten' aan om de instrumentdeur te sluiten en het verwerken te starten. 8. Het Maxwell CSC Instrument begint onmiddellijk met de zuiveringscyclus. Het scherm geeft de uitgevoerde stappen en resterende tijd die nodig is om de cyclus uit te voeren bij benadering weer. Opmerking: Als de cyclus wordt afgebroken voordat deze is voltooid, wast het instrument de deeltjes van de plunjers en werpt dit de plunjers in kamer 8 van de cartridge. De monsters gaan verloren. Probeer monsters uit een afgebroken instrumentcyclus niet opnieuw te zuiveren. 9. Nadat de cyclus is voltooid, wordt op het scherm van de tablet-pc een bericht weergegeven om aan te geven dat de methode is beëindigd. Einde van cyclus 10. Volg de aanwijzingen op het scherm aan het einde van de methode om de deur te openen. Controleer of de plunjers zich aan het einde van de cyclus in kamer 8 van de cartridge bevinden. Verwijder het rek uit het instrument en verwijder de geëlueerde monsters uit het rek. Als niet alle plunjers zijn verwijderd uit de plunjerbalk: a. Na een afgebroken cyclus volgt u de aanwijzingen op het scherm om de reinigingsmethode uit te voeren. b. Na een met succes voltooide cyclus selecteert u de reinigingsmethode in het instellingenscherm. 11. Sluit de elutiebuizen met RNA af en verwijder deze onmiddellijk na de cyclus om verdamping van de eluaten te voorkomen. Verwijder de Maxwell CSC Deck Tray van het instrument. Opmerking: Houd het rek aan de zijkanten vast om het rek van het instrumentplatform te verwijderen. RNAmonsters kunnen gedurende de nacht worden opgeslagen bij 30 C tot 10 C of voor een langere periode bij of onder 60 C. Controleer of de monsters zijn verwijderd uit het instrument voordat het UV-reinigingsprotocol van het instrument wordt uitgevoerd om schade aan het gezuiverde nucleïnezuur te voorkomen. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op 18-5

13 12. Verwijder de cartridges en plunjers uit de Maxwell CSC Deck Tray en voer ze volgens de procedures van uw instelling af als gevaarlijk afval. Cartridges, plunjers en elutiebuizen zijn uitsluitend bestemd voor eenmalig gebruik. Gebruik Maxwell CSC Cartridges, CSC/RSC-plunjers of elutiebuizen niet opnieuw. 8. Na zuivering Bepaal of de opbrengst en zuiverheid van het gezuiverde RNA uit het monster voldoen aan de invoervereisten voor de verdere diagnostische proef voordat u het RNA bij de desbetreffende proef gebruikt. 9. Problemen oplossen Voor vragen die hier niet zijn beantwoord, neemt u contact op met de plaatselijke Promega-vestiging of -distributeur. Contactgegevens zijn beschikbaar op: techserv@promega.com Symptomen Lagere concentratie RNA in eluaat dan verwacht (een normaal monster brengt > 50 ng/µl gezuiverd RNA op). Oorzaken en opmerkingen De WBC in het bloedmonster lag onder of boven het bij het beoogde gebruik van dit product vermelde bereik van tot WBC/ml. De kit is geoptimaliseerd voor het zuiveren van RNA uit bloedmonsters die een WBC bevatten van tot WBC/ml. Er is een onjuist volume volbloed gebruikt. Als u meer of minder dan 2,5 ml volbloed toevoegt, kan dit leiden tot een lagere opbrengst. Het bloedmonster was te oud. De beste opbrengst wordt verkregen met verse bloedmonsters. Monsters die langer dan 3 dagen zijn opgeslagen bij 2 10 C kunnen leiden tot een lagere opbrengst. Het monster was voorafgaand aan zuivering opgeslagen bij temperaturen onder 2 C of boven 10 C. Onjuiste opslagtemperaturen kunnen leiden tot WBC-lysis of RNA-degradatie. Er kunnen RNasen zijn geïntroduceerd tijdens het verwerken en kwantificeren van het monster. Zie hoofdstuk 10 voor informatie over het tot stand brengen van een ribonucleasevrije omgeving. Onvoldoende supernatantverwijdering na differentiële lysis. Zorg ervoor dat het supernatant zo volledig mogelijk wordt verwijderd. WBC-pellet is losgeraakt tijdens de verwijdering van het supernatant. Raak de WBC-pellet niet aan wanneer u het supernatant verwijdert. Onjuist monstertype. De kit is bestemd voor gebruik met humaan volbloed. Andere monstertypen (bijvoorbeeld beenmerg, plasma, buffy-coat enzovoort) zijn niet getest met deze kit. Onjuist type bloedafnamebuis. De kit is bestemd voor gebruik met humaan volbloed in EDTA-afnamebuizen. Andere typen buizen zijn niet getest met deze kit en zijn mogelijk niet compatibel met de chemische werking van het zuiveringsproces. 12 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op

14 9. Problemen oplossen (vervolg) Symptomen Lage RNA-kwaliteit (Eluaten dienen een A 260 /A verhouding hoger dan 1,8 en een A 260 /A 230 -verhouding tussen 1,8 en 2,4 te bevatten) Eluaten bevatten hoog DNA-gehalte (De eluaten zijn besmet met DNA, wat verdere proeven kan beïnvloeden.) Voorbewerkt lysaat is te viskeus om te pipetteren Oorzaken en opmerkingen De WBC in het bloedmonster lag boven het bij het beoogde gebruik van dit product vermelde bereik van tot WBC/ml. De kit is geoptimaliseerd voor het zuiveren van RNA uit bloedmonsters die een WBC bevatten van tot WBC/ml. Er is een onjuist volume volbloed gebruikt. Als u meer dan 2,5 ml volbloed toevoegt, kan dit leiden tot een slechte elutiezuiverheid. Het bloedmonster was te oud. De beste opbrengst wordt verkregen met verse bloedmonsters. Monsters die langer dan 3 dagen zijn opgeslagen bij 2 C 10 C kunnen leiden tot een lagere RNA-kwaliteit. Het monster was voorafgaand aan zuivering opgeslagen bij temperaturen onder 2 C of boven 10 C. Onjuiste opslagtemperaturen kunnen leiden tot WBC-lysis of RNA-degradatie. Onvoldoende supernatantverwijdering na differentiële lysis. Zorg ervoor dat het supernatant zo volledig mogelijk wordt verwijderd. Onjuist monstertype. Het product is bestemd voor gebruik met humaan volbloed. Andere monstertypen (bijvoorbeeld beenmerg, plasma, buffy-coat enzovoort) zijn niet getest met dit product. De WBC in het bloedmonster ligt boven het bij het beoogde gebruik van dit product vermelde bereik van tot WBC/ml. Er is een onjuist volume volbloed gebruikt. Als u meer dan 2,5 ml volbloed toevoegt, kan dit bij eluaten leiden tot DNA-besmetting. DNase I is niet aan cartridge toegevoegd. Onderzoek, indien mogelijk, kamer 4 in de gebruikte cartridges. Kamer 4 dient groen te zijn (niet geel) als DNase I aan de cartridge is toegevoegd bij hoofdstuk 6.B, stap 5. De WBC in het bloedmonster lag boven het bij het beoogde gebruik van dit product vermelde bereik van tot WBC/ml. Er is een onjuist volume volbloed gebruikt. Meer dan 2,5 ml volbloed toevoegen kan leiden tot lysaten die viskeus en moeilijk te pipetteren zijn. Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op 18-5

15 10. Een ribonucleasevrije omgeving tot stand brengen Het is uiterst lastig ribonucleasen inactief te maken. Voorkom tijdens en na isolatie dat RNase-activiteit in de RNAmonsters wordt geïntroduceerd. Dit is in het bijzonder van belang wanneer het startmateriaal moeilijk te verkrijgen of onvervangbaar is. De volgende opmerkingen kunnen helpen voorkomen dat de monsters onbedoeld worden besmet met RNase. 1. Twee van de meest gangbare bronnen van RNase-besmetting zijn de handen van de gebruiker en bacteriën en schimmels die aanwezig kunnen zijn in stofdeeltjes in de lucht. Gebruik steriele technieken wanneer u reagentia hanteert die bij dit systeem worden geleverd, om besmetting uit deze bronnen te voorkomen. Draag te allen tijde handschoenen. Verwissel handschoenen wanneer er contact kan zijn geweest met ribonucleasen. 2. Steriele wegwerpmaterialen van kunststof dienen, waar mogelijk, te worden gebruikt bij het hanteren van RNA. Deze materialen zijn doorgaans RNase-vrij en vereisen geen voorbehandeling om RNase inactief te maken. 3. Behandel niet-steriele materialen van glas of kunststof en elektroforesekamers voorafgaand aan gebruik om te garanderen dat deze RNase-vrij zijn. Bak materialen van glas gedurende de nacht op 200 C en spoel materialen van kunststof grondig met 0,1 N NaOH, 1 mm EDTA, gevolgd door RNase-vrij water. Commercieel verkrijgbare producten voor de verwijdering van RNase kunnen ook worden gebruikt overeenkomstig de aanwijzingen van de fabrikant. Opmerking: Elektroforesekamers kunnen zijn besmet met ribonucleasen, in het bijzonder RNase A, door analyses van DNA-monsters. Reserveer waar mogelijk een nieuw of ontsmet apparaat uitsluitend voor RNAanalyse. 4. Behandel eventuele niet bij het systeem geleverde oplossingen door in een zuurkast diethylpyrocarbonaat (DEPC) verdund tot 0,1% v/v toe te voegen. Voer gedurende de nacht een incubatie met roeren uit bij kamertemperatuur in de zuurkast. Autoclaveer gedurende 30 minuten om alle sporen van DEPC te verwijderen. Voorzichtig: DEPC is een vermoedelijk kankerverwekkende stof en mag uitsluitend worden gebruikt in een chemische zuurkast. DEPC reageert snel met aminen en kan niet worden gebruikt voor de behandeling van trisbuffers. Opmerking: Voor alle verdere toepassingen is het van essentieel belang dat u de RNA-monsters beschermt tegen RNasen. Draag schone handschoenen en gebruik RNase-vrije oplossingen en centrifugebuizen. 11. Literatuurverwijzingen 1. Clinical Laboratory Standards Institute (2007) Handling, transport, and storage of specimens for molecular methods. Dit kunt u online bekijken op: 2. Murray, P.R. et al. (2007) Manual of Clinical Microbiology, 9th Edition, ASM Press. 14 Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op

16 12. Gerelateerde producten Instrumenten en accessoires Product Inhoud Catalogusnr. Maxwell CSC Instrument* 1 stuks AS4000 Maxwell RSC/CSC Deck Tray 1 stuks SP6019 *Voor gebruik bij in-vitrodiagnostiek. Dit product is alleen beschikbaar in bepaalde landen. Maxwell CSC Reagent Kits Bezoek voor een lijst van beschikbare Maxwell CSC zuiveringskits. 13. Samenvatting van wijzigingen De volgende wijziging werd in dit document aangebracht tijdens de revisie van 18-5: 1. De vereisten van EU-IVD-richtlijn (98/79/EG) zijn opgenomen. (a) Amerikaans patentnr en (b) Amerikaans patentnr en andere patenten. 2014, 2015, 2018 Promega Corporation. Alle rechten voorbehouden. Maxwell is een gedeponeerd handelsmerk van Promega Corporation. LpH is een gedeponeerd handelsmerk van Steris Corporation. De producten kunnen zijn beschermd door aangevraagde of uitgegeven patenten of kunnen bepaalde beperkingen hebben. Bezoek onze website voor aanvullende informatie. Alle prijzen en specificaties kunnen worden gewijzigd zonder voorafgaande kennisgeving. Productclaims kunnen worden gewijzigd. Neem contact op met de technische dienst van Promega of bekijk de onlinecatalogus van Promega voor de meest actuele informatie over Promega-producten Promega Corporation 2800 Woods Hollow Road Madison, WI VS Tel. gratis in VS: Tel.: Fax: TM434 Herzien op 18-5