Welkom in de wereld van de Legionella kweek Simon in t Veld Teammanager Microbiologie Vitens Laboratorium
Inhoud Historie Invloed toepassing diverse technieken Legionella in praktijk Ontwikkelingen ISO norm Legionella
Legionella 1976 Philidelphia 1977 Legionella geïsoleerd 1978 Legionella gekweekt 1979 Genus Legionella > 50 Legionella species 21 pathogeen 70% Legionella pneumophila SG1 20%-30% Legionella pneumophila SG 2-16 5%-10% Legionella non pneumophila
Legionella in Nederland 1977 eerste patient Leiden 1981 6 patienten AMC 1991 Bonte Wever Slagharen
Legionella in Nederland 1977 eerste patient Leiden 1981 6 patienten AMC 1991 Bonte Wever Slagharen 1999 Bovenkarspel Westfriese Flora 2006 Koeltoren Amsterdam
Wetgeving 2001 Tijdelijke regeling legionellapreventie 2004 AI-32 Legionellapreventie voor industriële watersystemen 2004 Waterleidingbesluit 2007 Registratie van koeltorens 2011 Regeling Legionella preventie
Meldingen Legionella pneumonie 1998-2013 Bron: RIVM Jaarrapportage Surveillance Respiratoire Infectieziekten 2013
Invloed toepassing diverse technieken
Ontwikkeling diverse media 1978 Mueller Hinton Agar + toevoegingen 1978 FG medium (L-cysteine en ijzerpyrofosfaat) 1979 CYE medium (actieve kool en gistextract) 1979 CYE+antibiotica (Polymixine en Vancomycine) 1980 BCYE (ACES buffer) 1981 WY (CYE+antibiotica + glycine) 1981 BMPα (CYE + mix antibiotica+ α-ketoglutaraat) 1982 MWY (WY+AB+kleurstoffen+α-ketoglutaraat) 1984 GVPC (WY + antibiotica + α-ketoglutaraat) 1984? BCYE+ab
Ontwikkeling diverse media 1978 Mueller Hinton Agar + toevoegingen 1978 FG medium (L-cysteine en ijzerpyrofosfaat) 1979 CYE medium (actieve kool en gistextract) 1979 CYE+antibiotica (Polymixine en Vancomycine) 1980 BCYE (ACES buffer) 1981 WY (CYE+antibiotica + glycine) 1981 BMPα (CYE + mix antibiotica+ α-ketoglutaraat) 1982 MWY (WY+AB+kleurstoffen+α-ketoglutaraat) 1984 GVPC (WY + antibiotica + α-ketoglutaraat) 1984? BCYE+ab
Normen wereldwijd ISO 11731: 1998 ISO 11731-2: 2008 T90-431:2003 (Frankrijk) AZ/NZS 3896: 2008 (Australie/Nieuw Zeeland) Standard Methods (USA) NEN 6265:2007
Score ringonderzoek (1) Koloniegetal 22 C
Score ringonderzoek (2) Koloniegetal 37 C
Score ringonderzoek (3) Coliformen
Score ringonderzoek (4) Enterococcen
Score ringonderzoek (5) Clostridium perfringens
Score ringonderzoek (6) Legionella pneumophila
Recovery Legionella spp diverse media (1) Legionella pneumophila BCYE BCYE BMPα GVPC MWY non-selective +selective (Oxoid SR111) (Oxoid SR152 (Oxoid SR118) (=NEN) kve/l % % % % L. pneumophila 100 ± 6 107 ± 6 75 ± 3 79 ± 11 86 ± 5 serogroup 1 100 ± 17 105 ± 19 69 ± 8 95 ± 4 80 ± 12 L. pneumophila 100 ± 25 90 ± 18 73 ± 10 75 ± 8 86 ± 18 serogroup 3 100 ± 20 103 ± 14 88 ± 13 81 ± 28 71 ± 18 L. pneumophila 100 ± 20 110 ± 4 92 ± 20 66 ± 21 76 ± 3 serogroup 6 100 ± 17 99 ± 12 64 ± 18 74 ± 15 64 ± 23
Recovery Legionella spp diverse media (2) Legionella non-pneumophila L. dumoffii BCYE BCYE BMPα GVPC MWY non-selective +selective (Oxoid SR111) (Oxoid SR152 (Oxoid SR118) (=NEN) kve/l % % % % 100 ± 9 90 ± 6 111 ± 7 52 ± 10 60 ± 9 100 ± 9 92 ± 15 98 ± 9 47 ± 8 45 ± 8 L. longbeachae 100 ± 8 88 ± 6 71 ± 6 52 ± 6 70 ± 5 serogroup 1 100 ± 25 111 ± 5 88 ± 10 77 ± 2 91 ± 11 L. longbeachae 100 ± 16 99 ± 15 54 ± 9 94 ± 7 95 ± 11 serogroup 2 100 ± 20 130 ± 6 122 ± 10 79 ± 17 114 ± 20 L. anisa L. gormanii L. jordanis L. micdadei 100 ± 5 91 ± 10 88 ± 9 78 ± 9 79 ± 4 100 ± 12 91 ± 5 113 ± 6 71 ± 6 90 ± 2 100 ± 9 117 ± 15 125 ± 7 35 ± 9 54 ± 8 100 ± 20 114 ± 12 96 ± 3 40 ± 8 49 ± 3 100 ± 16 7 ± 3 0 77 ± 7 94 ± 12 100 ± 3 66 ± 7 0 101 ± 8 123 ± 1 100 ± 7 0 0 87 ± 13 81 ± 4 100 ± 3 0 2 ± 2 95 ± 14 98 ± 11 L. bozemanii 100 ± 8 99 ± 18 0 87 ± 7 88 ± 14 serogroup 1 100 ± 19 101 ± 15 0 51 ± 16 106 ± 5 L. bozemanii 100 ± 8 122 ± 7 0 119 ± 14 107 ± 10 serogroup 2 100 ± 14 112 ± 28 0 72 ± 26 119 ± 9
Nederland vs Duitsland Vitens Jan2006 Dec 2008 15 % Legionella positief 20% Legionella pneumophila 80% Legionella species NLGA Jan2006-July2009 28 % Legionella positief 89 % Legionella pneumophila 11 % Legionella species
Oorzaak verschillen opbrengst (1) Onbehandeld Hitte (30 min 50 C) Zuur (5 min ph2) MWY MWY MWY 88 100 85 89 78 99 91 101 104 103 121 94 87 123 97 95 109 104 93 88 90
Oorzaak verschillen opbrengst (2) Onbehandeld Hitte (30 min 50 C) Zuur (5 min ph2) Filter zuur (5 min ph2) MWY MWY MWY MWY 88 100 85 1 89 78 99 1 91 101 104 5 103 121 94 3 87 123 97 8 95 109 104 0 93 88 90 2
Oorzaak verschillen opbrengst (3) Onbehandeld Hitte (30 min 50 C) Zuur (5 min ph2) Filter zuur (5 min ph2) Filter onbehandeld MWY MWY MWY MWY MWY 88 100 85 1 1 89 78 99 1 2 91 101 104 5 2 103 121 94 3 8 87 123 97 8 7 95 109 104 0 4 93 88 90 2 11
Cellulose Nitrate membraan filters, 0,45µm L. pneumophila L. anisa L. bozemanii L. longbeachae Lab 1 19 0 29 0 Lab 2 69 7 1 0 Lab 3 53 0 41 2
Tuffryn membraan filters, 0,45µm L. pneumophila L. anisa L. bozemanii L. longbeachae Lab 1 NB 833 59 61 Lab 2 91 100 90 118 Lab 3 125 130 101 204
Legionella in de praktijk
% Positieve monsters Vitens lab Drinkwater 35,0 30,0 25,0 20,0 15,0 10,0 5,0 0,0 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013
% Positieve monsters Vitens lab Proceswater 35,0 30,0 25,0 20,0 15,0 10,0 5,0 0,0 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013
% monsters Niet Te Bepalen 5,0 4,5 4,0 3,5 3,0 2,5 2,0 drinkwater proceswater 1,5 1,0 0,5 0,0 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013
Verdeling Legionella spp drinkwater 5,8 2,1 1,5 0,3 0,1 NON_PN 4,0 SG2_14 SG1 NON_SG_1 NON_SG2_14 86,2 SG1_SG2_14 NONPN_SG1_SG2_14
Verdeling Legionella spp proceswater 7 3 10 39 8 15 NON_PN SG2_14 SG1 NON_SG_1 NON_SG2_14 SG1_SG2_14 NONPN_SG1_SG2_14 18
Soorten Legionella species Legionella anisa Legionella gormanii Legionella feeleii Legionella dumoffi Legionella erythra Legionella micdadei Legionella maceachernii Legionella rubrilucens Legionella faurnensis Legionella jamestowniensis
Ontwikkelingen
Ontwikkeling ISO standaard Integreren beide normen Onderzoek QC voor membraanfilters Centrifugatietechniek; moeilijk filtreerbare monsters Hitte/zuurbehandeling combineren Introductie BCYE+ab en MWY Keuze in werkwijze
Ontwikkeling ISO standaard Schoon water Monster direct opbrengen Directe membraanfiltratie Membraanfiltratie aftrillen concentraat opbrengen Vervuild water Membraanfiltratie aftrillen concentraat opbrengen Verdunnen