Synthese van Glycopeptiden als Mimetica
Inhoudsopgave Titel Pagina INHOUDSOPGAVE...^ SAMENVATTING...3 SUMMARY...5 GEBRUIKTE AFKORTINGEN...? HOOFDSTUK 1...8 INLEIDING EN THEORIE......8 1.1. Algemene Inleiding...8 1.1.1. Collageen: de basis voor dit onderzoek... 8 1.1.2.
Samenvatting Collageen
Door deze bouwstenen
Summary Collagen is a fibril-like protein which has unique mechanical properties. Investigation of the foldingmechanism (which leads to its typical triple-helix) and stractural properties is important and can lead
By using these building blocks
Gebruikte Afkortingen Aminozuren Amp = 4/?-aminoproline Asp = asparaginezuur Flp = 4^-fluoroproline Glu = glutaminezuur Gly = glycine Hyp
Hoofdstuk
Binnen
Zowel
1.2. Glycopeptiden:
In figuur 1.3 staat links de reeds gepubliceerde structuur en rechts de structuur van het te synthetiseren analoog. Het verschil in structuur is gering en vandaar dat wordt gedacht dat deze Af-binding een goed alternatief is voor de moeilijk toegankelijke O-binding. H0 OH O-binding A/-binding Figuur
harsbolletjes glasfilter... Afval Figuur
Omdat veel monomeren
1.4. Literatuurlijst 1. J.F.J. Engbersen en L. De Groot, Inleiding in de bio-organische chemie, 6 e verbeterde druk, Wageningen Pers, Wageningen, 1995. 2. R.T. Morrison and R.N. Boyd, Organic Chemistry, 6 editie, Prentice Hall Intemational, New York, 1992.
27. H.P. Bachinger and D.E. Mechling, The Collagen-like Peptide (GER)i 5 GPCCG Forms ph-dependent Covalently Linked Triple Helical Trimers,
Hoofdstuk
2.2. Synthese
2.3. Synthese Glycopeptiden Zoals in de inleiding van dit hoofdstuk al is gezegd, moeten de amino koolhydraten worden gekoppeld aan aminozuren. Voor het genereren van een amide binding moeten de aminozuren die voor deze koppeling in aanmerking komen een carbonzuur in de zijketen hebben. In de natuur komen twee van zulke aminozuren voor: asparaginezuur en glutaminezuur. Deze twee dienen dusdanig gemodificeerd te worden dat het enige carbonzuur dat kan reageren zich in de zijketen bevindt en niet het a- carbonzuur is. In onderstaand schema (figuur 2.2) wordt de aanpassing van deze twee aminozuren beschreven evenals de koppeling met de voor peptiden geschikt gemaakte koolhydraten. "AcO 10 AcO
Door deze procedure te herhalen voor de vier verschillende voor peptiden geschikt gemaakte koolhydraten met de twee verschillende aminozuren werden in dit geval acht verschillende monomeren verkregen (10 1 a-d
2.5. Experimenteel gedeelte Algemene opmerkingen Tenzij anders vermeld zijn de gebruikte chemicaliën verkregen uit commerciële bron en gebruikt zonder verdere zuivering.
1,2,3,4,6-penta-O-acetyl-D-galactose
2,3,4,6-tetra-O-acetyl-l-p-azide-D-glucose 4a (13 en 46 mmol). 3,01 en 13,74 g witte naaldkristallen; opbrengst 62 en 80 %, Rf (EtOAc:hexaan -1:1) = 0,45. ^- (CDC1 3 ):
Synthese van de verschillende glycopeptide monomeren Algemene procedure voor de l-butylester bescherming van carbonzuren Het aminozuur (10 mmol; 4,46 g voor Asp en 4,59 g voor Glu) werd opgelost in 15 ml pyridine en gekoeld tot -10
Algemene procedure voor
Fmoc-Asp(P-D-mannose)-O(Bu 9*c (2,0 tnmol). 0,34 g wit schuim werd verkregen na kolomchromatografie (loopvloeistof EtOAcrhexaan -1:1), opbrengst 23%, R f (5% MeOH/DCM) = 0,43. 'H-NMR (CDC1 3 ): 8 = 1,41-1,47 (C(CH 3 ) 3, s, 9H), 1,98-2,28 (OC=O-CH 3, m, 12H), 2,75-2,93 (C P H 2>
Fmoc-GluO-D-galactose)-OH U?b (0,2 mmol). 0,11
Hoofdstuk 3 Synthese van het Fragment Gly-Pro 3.1. Inleiding Het doel van dit onderzoek was de synthese van nimetica van Gly-Pro-Thr( 3Gal). De synthese van de bouwsteen voor
3.2. Synthese van het Gly-Pro fragment Als uitgangsstof werd het aminozuur L-Proline 11 genomen, hierin is zowel het amine als het carbonzuur onbeschermd. Allereerst werd
3.4. Experimenteel Algemene opmerkingen Zie voor de algemene opmerkingen horende bij dit hoofdstuk de algemene opmerkingen zoals die weergegeven zijn
H-Pro-O*Bu 14 (60 mmol). 10,33 g witte vaste stof, opbrengst 100%, Rf (5% MeOH/DCM en een spoortje Et 3 N) = 0,19. ^- (CDC1 3 ): 8 = 1,44-1,48 (C(C# 3 ) 3, s, 9H), 1,67-2,15 (C p ff 2 en C?H 2, m en m, 2H en 2H), 2,36 (N#, s, 1H), 2,83-2,91
Hoofdstuk
Tijdens het uitvoeren van deze restreacties zijn ook nog enkele niet voorziene problemen opgelost.
4.3. Resultaat Het uiteindelijk ontwikkelde protocol kan in een eenvoudig schema worden weergegeven aangezien de beoogde glycopeptiden een repeterende tripeptide eenheid bevatten. In onderstaande figuur wordt dit protocol getoond. Fmoc- jrink]- 20% piperidine/nmp (2*8') Elke stap wordt gevolgd door wassen met NMP en DCM (beide voor
Na 45 minuten werden deze reagentia verwijderd en kon de koppeling gecontroleerd worden. Is deze succesvol verlopen
4.4. Voorbeeld
0.25-0.20 0.15 Figuur 15 20 Minules 25 30 35
De afwezigheid
4.6. Experimenteel gedeelte Algemene opmerkingen Voor
Hoofdstuk 5 Conclusies & Suggesties voor verder onderzoek De synthese
Appendix A: Inductief effect vs. water netwerk Hydroxyproline speelt een belangrijke rol in de stabilisering van de triple helix. (Pro-Hyp-Gly)i smelt bij 58 C terwijl (Pro-Pro-Gly)io smelt
Figuur A.2 - Stereo beeld van het waterstofbrug netwerk. Twee door symmetrie gerelateerde triple helices en hun waterstofbrug interacties (gestippelde lijnen) zijn weergegeven.
Appendix