Datum: Pr.nr

Maat: px

Weergave met pagina beginnen:

Download "Datum: Pr.nr"

Erik Timmermans
5 jaren geleden
Aantal bezoeken:

1 Afdeling Additieven VERSLAG Datu: Pr.nr Ondererp: De polarografishe bepaling van niotinezuur in vlees. Bijlagen: 4. Verzendlijst: direkteur, direktie VKA, sektorhoofd (3x), afdeling Additieven (4x), afdeling Noralisatie (Hue), Projektbeheer, afdeling Containanten, afdeling Diergeneesiddelen, afdeling Z\-lare Hetalen, afdeling Vlees en Vleesprodukten, afdeling Hollan. 8293

3 Afdeling Additieven. Datu : VERSLAG Pr.nr Projekt: Ondererp: De polaragrafishe bepaling van niotinezuur in vlees. Bijlagen: 4. Doel: Het ontikkelen van een bepaling voor het aantonen en bepalen van niotinezuur inlusief het aide in vlees. Een dergelijke ethode is nodig et ltet oog op onderzoek ten behoeve van Kansurnenten Kontakt in deeber Saenvatting: Er ordt een polaragrafishe ethode beshreven voor de bepaling van niotinezuur na extratie van het niotinezuur en nietinaide uit vlees.b.v. een buffer et een ph van 2.5 Het gehalte niotinezuur ordt d..v. standaardadditie bepaald. Conlusie: De ethode is geshikt voor het bepalen van niotinezuur bij gehalten > a 1 g/kg. Wel dient indien het gehalte toegevoegd niotinezuur bepaald oet orden r ekening gehouden te orden et het van nature aanezige niotinaide. Het verdient dan ook aanbeveling een inventariserend onderzoek te doen naar de aaolezigheid van nietinaide in vlees afkostig van diverse diersoorten. Verantoordelijk: Dr \oj. G. de Ruig ~ Hedelolerkers/Saenstellers: T.D. B. van der S~'js, H. Hooyerink Projektleider: dr W. G. de Ruig ~ 8293.

4 1. nleiding Bij de ijziging van het Vlees en Vleesarenbesluit (l.jarenet) van 16 juni 1981 erd het gebruik van niotinezuur als kleurbehoudend iddel toegevoegd aan toebereid rau gehakt en verse orst niet langer toegelaten. Ten behoeve van Kansurnenten Kontakt zal rond deeber 1982 een aantal onsters gehakt op de aanezigheid van niotinezuur onderzoht oeten orden, daar de verdenking bestaat dat ondanks de intrekking van de toelating tot het gebruik van niotinezuur dit iddel nog ordt toegepast. Uit literatuurgegevens blijkt dat niotinezuur in vlees zoel polaragrafish (1), als et alorietrishe ethoden (2) (auto-analyzer), als et HPLC (3) kan orden bepaald. Gezien het beperkte aantal onsters en de eenvoud van de tehniek lijkt het operationeel aken van een polaragrafishe ethode het eest zinvol. 2. Prinipe Niotinezuur ordt et behulp van een itroenzuurfosfaatbuffer uit het gehakt geextraheerd. Van het extrat ordt na entrifugeren een aliquot overgebraht in een polarografievat aarna een "differential puls polarogra" ordt opgenoen van - 1. Volt tot Volt. Het gehalte aan niotinezuur ordt d.. v. standaardadditie bepaald. 3. nvloed van de ph De redutie van niotinezuur vindt plaats bij vrij sterk negatieve spanning van de erkelektrode, zelfs zeer diht bij die spanning aarbij de ontleding van de basiseletrolyt begint. De redutiepotentiaal van niotinezuur is afhankelijk van de ph van de oplossing (fig. 1, 2). Verhoging van de ph doet de redutiepotentiaal naar negatiever aarden vershuiven. Bij een ph hoger dan a. 5 lrdt niotinezuur pas geredueerd anneer ook de eletralytishe ontleding van het eletrolyt begonnen is. De polaragrafishe bepaling van niotinezuur dient dan ook bij een ph < 4 te geshieden. Een teede effekt l aree rekening gehouden dient te lolorden is het vershuiven van de potentiaal aarbij het eletrolyt ordt ontleed ten gevolge van een veranderde ph

5 - 2 - Deze potentiaal vershuift bij dalende ph naar inder hoge aarden, zodat bij een ph < 1.5 de niotinezuurpiek edero in de ontledingagolf van het eletrolyt verdijnt. De ph van de oplossing zal dus oeten liggen tussen 2.5 en nvloed onentratie kobinatie et de ph van de oplossing kan de onentratie van het te bepalen niotinezuur de oorzaak zijn van het optreden van tee redutiepieken in het "differential puls" polaragra (fig. 3). Het verdient derhalve aanbeveling, ook na standaardadditie te voorkoen, dat de onentratie in de eetoplossing > 2 g/1 bedraagt. Dit ter voorkoing van vershuiving van piekpotentiaal en splitsing in tee pieken. 5. Monstervoorbereiding Op grond van bovenstaande overegingen is gekozen voor het gebruik van een bufferoplossing als grondeletrolyt. Daar vlees zelf ook over enige buffer-apaiteit beshikt oe t de ph van de buffer lager orden gekozen dan de uiteindelijk geenste ph van Er van uit gaande dat indien het gebruik van niotinezuur ordt toegepast en dit zal doen tot gehalten overeenkoende et oudere arey'ettoelatingen (,15%) en de ens dat na standaardadditie in de eetoplossing gehalte < 2 g/1 bevat, zal over het algeeen een verdunning van 1-2 aal op zijn plaats zijn. Proefondervindelijk erd vastgesteld dat voor deze verdunningen een itroenzuur-fosfaarbuffer et ph 2. 5 volstaat o een uiteindelijke ph van 3 tot 3.5 te bereiken. Hoogeniseren van het vleesonster et de buffer.b.v. een Sorvall Oniixer gevolgd door entrifugeren bij 25 rp levert een extrat op, dat geshikt is voor direkte "differential puls" bepaling van niotinezuur. 6. Kantifiering Daar de hoogte en de plaats(en) van de polaragrafishe piek(en) afhankelijk zijn van een groot aantal faktoren (o.a. hoogte kikkolo, teperatuur, ph oplossing, onentratie) verdient het aanbeveling voor k\y'antifieren gebruik te aken van een standaardadditie ethode

6 Resultaten De resultaten zijn opgenoen in tabel 1. Tabel 1. Resultaten polaragrafishe niotinezuurbepalingen in gehakt + kalfsvlees. onster niotinezuur- ge. ge. re ogehalte % % very % gehakt,18 gehakt,18,18 gehakt,19 gehakt +,1%,26 gehakt +,1%,27,27 9 gehakt +,1%,28 gehakt +,2%,37 gehakt +,2%,35,36 9% gehakt +,2%,36 gehakt +,3%,48 gehakt +,3%,47,48 1% gehakt +,3%,49 Conlusies De ethode is geshikt voor de kantitatieve bepaling van niotinezuur in vleesonsters. Bij interpretatie van de verkregen analyseresultaten oet rekening gehouden orden et van nature in vlees aanezig niotinezuur en/of het aide daar dit ordt eegeëxtraheerd. Literatuur: 1. P...H. van Dungen. De l~are(n) Cheius l (1972) H.W. vangend. De Ware(n) Cheius 1 (1973) A. de Bruin. De Ware(n) Cheius 7 (1977) vds/yl

7 Figuur 1 11 r '" :r Ç! n U nt -. rr: ru U1 U1,- r ru :J {;; rr: a: ru ru lu Ob :J J t tn? ~ 11 u. r.j :J Dl r tn 11 u. :J Cl :r U 11 u. Cl :J ~ i:~ A B p T D C1 U1 a: a: lu tn ru ru T " u. a: -. ru :r a: lu g ~- C1 C1 C1 ~ 11 u. Cl td r. T U1 11 'i' tr lu C1 u. 11 u. r T ru T E Cl T F G ~ ou,. H :r '" A ph 1.5 B 2. D 3. E 3.5 F 4. H 5.

9 '. Figuur 3 rr: a: a: a: ru a: er er: a: Ul ru :r Ul :r lil ~Rtfi :r (U :r,; ' (U 'i' ~ "... '" :r :r! ' 'i' "... " u. OU r - ' 'B C'' D a;.. rr rr a: er: a: er :r OU :r :r Ul :r ru l!l :r r r OO ru (U tn ru :r OD Cl '"! C1 C1 Cl :r 'i'! uo ' "... " u. " OL OU " :r OL 1\ _/~ ru :'1 --,. - oü.r T.. T E F ' G H Tloed... de o e tratie ioti ezuur bij ~elijkbli jye de ph no lu " ' A B D E F G H ~ ~Kt;

10 NTERN ANALYSEVOORSCHRFT NR. G 125 1e oplage ( ) DE POLAROGRAFSCHE BEPALNG VAN NCOTNEZUUR N VLEES Verzendlijst: afdeling Noralisatie/haronisatie, bibliotheek (Sx), sektorhoofd, afdeling Additieven (4x). G125.

11 NTERN ANALYSEVOORSCHRFT NR. G 125 1e oplage ( ) De polaragrafishe bepaling van niotinezuur in vlees 1. Doel en toepassingsgebied Dit voorshrift beshrijft een ethode voor het bepalen van niotinezuur in vlees en vleesprodukten.b.v. "differential pulse" polarografie. 2. Prinipe Aan een afgeogen hoeveelheid (gealen) vleesonster ordt een hoeveelheid bufferoplossing (ph 2,5) toegevoegd. Na hoogeniseren (Sorvall Oniixer) ordt de suspensie et buffer aangevuld tot een bekend volue. Na entrifugeren ty"ordt een aliquotdeel van het aldus verkregen vleesextrat gepolarografeerd. Het niotinezuurgehalte ordt bepaald door standaardadditie. 3. Apparatuur 3. 1 BoveY"eger. 3.2 ph eter. 3.3 Hoogenisator (b. v Sorvall Oniixer). 3.4 Centrifuge. 3.5 Polaragraaf + hulpiddelen Pipetten 5 l, 1 ~1, 2 ~ Erleneyers 5 l. 3.8 Maatkolven 1 l. G

12 Cheialiën Citroenzuur,1 M (21 g itroenzuur (4.1)/liter). 4.2 Dinatriufosfaat (atervrij) p.a Dinatriufosfaat, 2 M (35,6 g dinatriufosfaat (4. 2)/liter) Bufferoplossing ph 2,5. Bereiding: Voeg aan een oplossing van,1 M itroenzuur (4.1.1) een zodanige hoeveelheid,2 M dinatriufosfaat (4.2.1) toe dat de ph van het engsel 2,5 bedraagt. Kontroleer de ph et een ph eter (3.2). 4.4 Niotinezuur (p.a.) Standaard niotinezuuroplossing (1 g/l). Breng 1 g niotinezuur (4,4) in een aatkolf van 1 l. Los op in \~ater, vul aan tot de aatstreep en eng Standaard niotinezuuroplossing (,1 g/l). Breng 1 l niotinezuuroplossing (4.4.1) in een aatkolf van 1 l, vul aan tot de aatstreep en eng. 5. Werkijze 5.1 Weeg naukeurig 5 gra vleesonster af (3. 1) in een erleneyer (3. 7). Voeg toe 25 l bufferoplossing (4.3) en hoogeniseer (3. 3) gedurende 1 inuut (stand 5). 5.2 Breng het hoogenisaat over in een aatkolf van 1 l (3.8) en vul aan et buffer (4.3) tot de aatstreep. 5.3 Centrifugeer 1 l van het hoogenisaat gedurende 15 inuten bij een toerental van 1. rp. Breng et behulp van een pipet (3.6) 5 l van de aterige fratie over in een polarografieel. G

13 Stel de volgende paraeters in bij gebruik van de PAR 374 polarografishe analysator. Analyt. Teh. - Diff. Pulse Polarog nitial Potentlal.9 volt Final Potentlal 1. 4 Volt San Rate - Fast Repliations - One Sensitivity - Mediu Peak Potentlal - Pass Purge - Auto Purge Tie - 5. Min Blanks - None. 5.5 Nee het polarogra op Voeg hierna 1 ~1 (3. 6) van de standaard niotinezuuroplossing (4.4.2) toe. Ne e nogaals een polarogra op. 6. Berekening De standaardadditie geeft een onentratiestijging van 2 g/kg in de onsteroplossing. Dit kot overeen e t 4 g/kg berekend op het onster. Ten einde het gehalte toegevoegd niotinezuur te bepalen oet georrigeerd orden voor het natuurlijk niotinaidegehalte, dat eebepaald ordt. De onentratie niotinaide uitgedrukt als niotinezuur bedraagt Varkensvlees 4-87 g/kg Rundvlees Kalfsvlees g/kg 64-8 g/kg. Bereken het gehalte niotinezuur nu et behulp van de volgende forule: p x 4 - N = g/kg p - p s Dl Haarbij P = piekhoogte onsteroplossing Ps piekhoogte na standaardadditie N = natuurlijk gehalte in te onderzoeken vlees(produkt). Verantoordelijk: dr H.G. de Ruig Saensteller/edeerker: T.D.B. van der Struijs ~ G125.3 YL fj-

Vergelijkbare documenten

Projekt: Inventariserend onderzoek naar het voorkomen van natamycine Onderwerp: Onderzoek natamycinegehalte van kazen uit de Wageningse regio

Projekt: Inventariserend onderzoek naar het voorkomen van natamycine Onderwerp: Onderzoek natamycinegehalte van kazen uit de Wageningse regio Afd. Additieven 1982-12- 06 VERSLAG 82.102 Pr.nr. 404.0210 Onderwerp: Onderzoek natamycinegehalte van kazen uit de Wageningse regio. Voorgaande verslagen: 80.53, 81. 57. Verzendlijst : direkteur, sektorhoofd