Nederlandse Ontwerp norm NEN 6252 Detectie van thermotolerante Campylobacter met Preston en mccda in mest en vlees, afkomstig van pluimvee Publicatie uitsluitend voor commentaar Detection of thermotolerant Campylobacter with Preston and mccda in faeces and meat of poultry Commentaar vóór 2009-12-01 september 2009 ICS 07.100.20 Dit document mag slechts op een stand-alone PC worden geinstalleerd. Gebruik op een netwerk is alleen. toestaan als een aanvullende licentieovereenkomst voor netwerkgebruik met NEN is afgesloten. This document may only be used on a stand-alone PC. Use in a network is only permitted when a supplementary license agreement for us in a network with NEN has been concluded. Normcommissie 370 009 "Microbiologie, voedingsmiddelen en diervoeders" Apart from exceptions provided by the law, nothing from this publication may be duplicated and/or published by means of photocopy, microfilm, storage in computer files or otherwise, which also applies to full or partial processing, without the written consent of the Netherlands Standardization Institute. The Netherlands Standardization Institute shall, with the exclusion of any other beneficiary, collect payments owed by third parties for duplication and/or act in and out of law, where this authority is not transferred or falls by right to the Reproduction Rights Foundation. Auteursrecht voorbehouden. Behoudens uitzondering door de wet gesteld mag zonder schriftelijke toestemming van het Nederlands Normalisatie-instituut niets uit deze uitgave worden verveelvoudigd en/of openbaar gemaakt door middel van fotokopie, microfilm, opslag in computerbestanden of anderszins, hetgeen ook van toepassing is op gehele of gedeeltelijke bewerking. Het Nederlands Normalisatie-instituut is met uitsluiting van ieder ander gerechtigd de door derden verschuldigde vergoedingen voor verveelvoudiging te innen en/of daartoe in en buiten rechte op te treden, voor zover deze bevoegdheid niet is overgedragen c.q. rechtens toekomt aan de Stichting Reprorecht. Although the utmost care has been taken with this publication, errors and omissions cannot be entirely excluded. The Netherlands Standardization Institute and/or the members of the committees therefore accept no liability, not even for direct or indirect damage, occurring due to or in relation with the application of publications issued by the Netherlands Standardization Institute. Hoewel bij deze uitgave de uiterste zorg is nagestreefd, kunnen fouten en onvolledigheden niet geheel worden uitgesloten. Het Nederlands Normalisatie-instituut en/of de leden van de commissies aanvaarden derhalve geen enkele aansprakelijkheid, ook niet voor directe of indirecte schade, ontstaan door of verband houdend met toepassing van door het Nederlands Normalisatie-instituut gepubliceerde uitgaven. 2009 Nederlands Normalisatie-instituut Postbus 5059, 2600 GB Delft Telefoon (015) 2 690 390, Fax (015) 2 690 190
Inhoud Voorwoord...3 1 Onderwerp en toepassingsgebied...4 2 Normatieve verwijzingen...4 3 Termen en definities...4 4 Beginsel...4 5 Reagentia en andere materialen...4 6 Toestellen, glaswerk en hulpmiddelen...7 7 Werkwijze...8 8 Bevestiging...9 9 Controle...10 10 Verslag...10 Bibliografie...11 2
Voorwoord Dit normontwerp beschrijft een microbiologische methode voor de detectie van thermotolerante Campylobacter (in deze norm verder als Campylobacter aangeduid) in monsters mest en vlees, afkomstig van pluimvee. Deze norm is onder verantwoordelijkheid van werkgroep 370 009 Microbiologie, voedingsmiddelen en diervoeders opgesteld. Op het ogenblik van publicatie van het normontwerp was de normcommissie als volgt samengesteld: E. de Boer (voorzitter) Voedsel en Waren Autoriteit, Zutphen S. Antonie Friesland Coberco Dairy Foods D.J.C. van den Berg R.R. Beumer A.F. Dijkstra LabQuest, Eck en Wiel Wageningen Universiteit Van Hall Larenstein, Leeuwarden R. van der Doelen Masterfoods Veghel BV, Veghel B. van Driel Opinion Test & Taste, Oosterhout M. van Eck Silliker BV, Ede M. Emonts Nutreco Ned BV, Boxmeer P.M.M. Enthoven CCL BV, Veghel A. Hermans Qlip, Leusden M.J.E. Hoveling W.F. Jacobs-Reitsma LabCo bv, Europoort Rotterdam RIKILT, Wageningen S. Meersseman Eurofins Food B.V., Heerenveen K.A. Mooijman RIVM LZO, Bilthoven J. den Ouden Oxoid B.V., Badhoevedorp H. Schmitt Universiteit Utrecht V&V, Utrecht W.M. Stam Unilever Research, Vlaardingen H. Stegeman Bennekom H. Tolboom Danone Research BV, Wageningen M. Uyttendaele Universiteit Gent, België P.H. in t Veld Voedsel en Waren Autoriteit, Eindhoven N. van Waarde biomérieux Benelux BV, Boxtel P. Kalkman (secretaris) NEN, Delft Gebruikers van dit normontwerp wordt nadrukkelijk verzocht hun ervaringen aan NEN mee te delen. Commentaar op dit ontwerp kan vóór 1 januari 2010 worden ingediend bij het Nederlands Normalisatieinstituut, Postbus 5059, 2600 GB Delft. Fax: 015 2 690 1204 (e-mail: landbouw@nen.nl). Exemplaren van dit normontwerp zijn tegen vergoeding verkrijgbaar bij bovengenoemd instituut. 3
Detectie van thermotolerante Campylobacter met Preston en mccda in mest en vlees, afkomstig van pluimvee 1 Onderwerp en toepassingsgebied Deze norm beschrijft een methode voor de detectie van thermotolerante Campylobacter (in deze norm verder als Campylobacter aangeduid) in monsters mest en vlees, afkomstig van pluimvee. 2 Normatieve verwijzingen Het volgende documenten waarnaar is verwezen is onmisbaar voor de toepassing van dit document. Bij gedateerde verwijzingen is alleen de aangehaalde versie van toepassing. Bij ongedateerde verwijzingen is de laatste versie van het document (met inbegrip van wijzigingsbladen) waarnaar is verwezen van toepassing. NEN-EN-ISO 7218 Microbiology of food and animal feeding stuffs General requirements and guidance for microbiological examinations (ISO 7218:2007,IDT) 3 Termen en definities Voor de toepassing van deze norm geldt de volgende definitie. 3.1 Campylobacter micro-organismen die de voor deze bacteriën karakteristieke groei vertonen en specifieke morfologische, biochemische en serologische reacties vertonen indien wordt gekweekt respectievelijk beproefd volgens de beschreven werkwijze 4 Beginsel Mestmonsters en blindedarmmestmonsters worden rechtstreeks geënt op een selectieve vaste voedingsbodem (mccda). Vlees (bijvoorbeeld vel van de borstkap of filet) wordt in porties van 25 g gedurende 1 min gestomacherd met 100 ml selectief ophopingsmedium (Preston). Hierna wordt het monstermateriaal verwijderd en alleen het ophopingsmedium gedurende 24 h bebroed bij 41,5 C. Vervolgens wordt afgeënt op een selectieve vaste voedingsbodem (mccda). Selectieve vaste voedingsbodems worden microaeroob gedurende 48 h bij 41,5 C bebroed, waarna wordt beoordeeld op aanwezigheid van specifieke kolonies. Specifieke kolonies worden bevestigd met oxidasereactie en microscopie. Als extra controle kan een deel van de isolaten met een latexagglutinatieproef worden bevestigd. 5 Reagentia en andere materialen 5.1 Algemeen Alle gebruikte grondstoffen en het water moeten van analysekwaliteit zijn. Er mag ook gebruik worden gemaakt van media die kant-en-klaar commercieel verkrijgbaar zijn. Voor algemene eisen en richtlijnen voor microbiologische onderzoeken wordt verder verwezen naar NEN-EN-ISO 7218. 4
5.2 Selectief ophopingsmedium: Prestonbouillon (zónder paardenbloed) 5.2.1 Prestonbasismedium 5.2.1.1 Samenstelling Vleesextract 1) 10,0 g Enzymatisch digest van vlees (pepton) 1) 10,0 g Natriumchloride 1) 5,0 g Natriumpyruvaat 2) 0,25 g Natriummetabisulfiet 2) 0,25 g IJzer(II)sulfaatheptahydraat 2) (FeSO 4.7H 2 O) 0,25 g 5.2.1.2 Bereiding Los de ingrediënten op in het water (indien nodig door middel van verhitting). Indien nodig, stel de ph zo in dat deze na sterilisatie 7,5 ± 0,2 bij 25 C bedraagt. Steriliseer gedurende 15 min bij 121 C ± 1 C. 5.2.2 Prestonantibioticaoplossing 5.2.2.1 Samenstelling Polymyxine B-sulfaat Rifampicine Trimethoprimlactaat Amphotericine B 5 000 IU 0,01 g 0,01 g 0,01 g OPMERKING De genoemde antibiotica zijn ook tezamen verkrijgbaar als Prestonsupplement. Let op, ook het vroeger gebruikte Prestonsupplement, met cycloheximide in plaats van amphotericine B, is nog steeds verkrijgbaar. De voorkeur wordt echter gegeven aan gebruik van supplement met amphotericine B. 5.2.2.2 Bereiding Los de antibiotica op in het water en steriliseer door membraanfiltratie (0,22 µm-filter). 5.2.3 Compleet Prestonophopingsmedium 5.2.3.1 Samenstelling compleet Prestonophopingsmedium Basismedium Antibioticaoplossing 5.2.3.2 Bereiding compleet Prestonophopingsmedium Koel het basismedium af tot onder de 47 C. Voeg op aseptische wijze de antibioticaoplossing toe en meng zorgvuldig. 1) Ook tezamen kant-en-klaar verkrijgbaar onder de naam Nutrient Broth No.2. Nutrient Broth No.2 is een product dat in de handel verkrijgbaar is. Deze informatie wordt voor het gemak van de gebruikers van deze norm gegeven en houdt geen erkenning van de genoemde producten door NEN in. Gelijkwaardige producten mogen worden gebruikt indien kan worden aangetoond dat deze dezelfde resultaten opleveren. 2) Ook tezamen verkrijgbaar als supplement (zogenoemd groeisupplement of FBP-supplement). 5
OPMERKING In de originele beschrijving van Prestonophopingsmedium wordt paardenbloed gebruikt. In dit voorschrift wordt echter geen paardenbloed toegepast, omdat uit onderzoek is gebleken dat deze toevoeging voor het onderhavige monstermatrix niet noodzakelijk is (Jacobs-Reitsma et al., 2003). 5.3 Selectieve voedingsbodem: modified Charcoal Cefoperazone Deoxycholate Agar (mccda) 5.3.1 mccda-basismedium 5.3.1.1 Samenstelling Vleesextract 3) 10,0 g Enzymatisch digest van vlees (pepton 3) ) 10,0 g Natriumchloride 3) 5,0 g Actieve kool 4,0 g Enzymatisch digest van caseïne (caseïnepepton) 3,0 g Natriumdesoxycholaat 1,0 g IJzer(II)sulfaatheptahydraat (FeSO 4.7H 2 O) 0,25 g Natriumpyruvaat 0,25 g Agar 12,0 g 5.3.1.2 Bereiding Los de ingrediënten op in het water (indien nodig door verhitting). Indien nodig, stel de ph zo in dat deze na sterilisatie 7,4 C ± 0,2 C bij 25 C bedraagt. Steriliseer gedurende 15 min bij 121 C ± 1 C. 5.3.2 mccda-antibioticasupplement 5.3.2.1 Samenstelling Cefoperazone Amphotericine B 32 mg 10 mg OPMERKING De genoemde antibiotica zijn ook tezamen verkrijgbaar als mccda-supplement. 5.3.2.2 Bereiding Los de antibiotica op in het water en steriliseer door middel van filtratie (0,22 µm-filter). 5.3.3 Complete mccda-voedingsbodem 5.3.3.1 Samenstelling Basismedium Antibioticaoplossing 5.3.3.2 Bereiding Koel het basismedium af tot 47 C tot 50 C. Voeg op aseptische wijze de antibioticaoplossing toe en meng zorgvuldig. Giet de agar uit in petrischalen met nok en laat stollen. 3) Ook tezamen kant-en-klaar verkrijgbaar onder de naam Nutrient Broth No.2. 6
Bestelformulier Stuur naar: NEN Standards Products & Services t.a.v. afdeling Klantenservice Antwoordnummer 10214 2600 WB Delft NEN Standards Products & Services Postbus 5059 2600 GB Delft Vlinderweg 6 2623 AX Delft Ja, ik bestel ex. NEN 6252:2009 Ontw. nl Detectie van thermotolerante Campylobacter in mest en vlees van gevogelte met Preston en mccda 24.00 T (015) 2 690 390 F (015) 2 690 271 www.nen.nl/normshop Wilt u deze norm in PDF-formaat? Deze bestelt u eenvoudig via www.nen.nl/normshop Gratis e-mailnieuwsbrieven Wilt u op de hoogte blijven van de laatste ontwikkelingen op het gebied van normen, normalisatie en regelgeving? Neem dan een gratis abonnement op een van onze e-mailnieuwsbrieven. www.nen.nl/nieuwsbrieven Gegevens Bedrijf / Instelling T.a.v. O M O V E-mail Klantnummer NEN Uw ordernummer BTW nummer Postbus / Adres Postcode Plaats Telefoon Fax Factuuradres (indien dit afwijkt van bovenstaand adres) Postbus / Adres Postcode Plaats Datum Handtekening Retourneren Fax: 015 2 690 271 E-mail: klantenservice@nen.nl Post: NEN Standards Products & Services, t.a.v. afdeling Klantenservice Antwoordnummer 10214, 2600 WB Delft (geen postzegel nodig). Voorwaarden De prijzen zijn geldig tot 31 december 2018, tenzij anders aangegeven. Alle prijzen zijn excl. btw, verzend- en handelingskosten en onder voorbehoud bij o.m. ISO- en IEC-normen. Bestelt u via de normshop een pdf, dan betaalt u geen handeling en verzendkosten. Meer informatie: telefoon 015 2 690 391, dagelijks van 8.30 tot 17.00 uur. Wijzigingen en typefouten in teksten en prijsinformatie voorbehouden. U kunt onze algemene voorwaarden terugvinden op: www.nen.nl/leveringsvoorwaarden. LEREN, WERKEN EN GROEIEN MET NEN preview - 2018