BEPALING VAN SULFONAMIDEN,EN DAPSONE EN TRIMETHOPRIM MET LC-MS. Versie 06 Datum van toepassing

Transcriptie

1 Federaal Agentschap voor de Veiligheid van de Voedselketen Bestuur Laboratoria MET-FLVVG-041 BEPALING VAN SULFONAMIDEN,EN DAPSONE EN Versie 06 Datum van toepassing Opgesteld door : Inge Heymans; medewerker R&C Nazicht door : Tanja De Bruyn; medewerker R&C; Bert Vandenborre; medewerker R&C; Goedkeuring vrijgave door : Ingrid Vermeulen; Sectieverantwoordelijke R&C; Beheer & locatie geldende versie : Kwaliteit FLVVG; Lokale server FLVVG Bestemmelingen : Medewerkers R&C: alle Trefwoorden : SUL, LC-MS LAB 22 I-MET 041 v.06 1/31

2 Overzicht herziening van het document Herziening door/datum* Reden van herziening Tekstdeel / draagwijdte van de herziening CVDH 18/09/08 Nieuwe lay-out Volledige tekst IH 2010/08/25 - Aanpassing detectieniveau voor melk, vlees, lever en nier - Up-date TDB/ Wijziging loopmiddel LC-MS en druk LC-kolom - Aanpassing opzuivering honing: extractie in warmwaterbad (zie ringtest RING ) TDB/ Aanpassing interpretatie resultaten naar aanleiding van B non conformiteit audit (vz-t-b07). - Aanpassing criteria analyseserie. TDB/ LC-MS kolom - tpm wijzigen naar xg IH/ Aanpassing nieuwe methode vlees + toevoeging trimethoprim en D Volledige tekst * Het verschil tussen de datum van toepassing en de huidige datum mag niet meer dan 5 jaar bedragen. Wijzigingen ten opzichte van de vorige versie worden gemarkeerd in rood. Indien omwille van de omvang van de wijzigingen, de tekst door gebruik van markeringen niet meer leesbaar wordt, wordt de markering van wijzigingen weggelaten in de nieuwe versie. Dit wordt vermeld in de historiek van het document. LAB 22 I-MET 041 v.06 2/31

3 INHOUDSTABEL 1 DOEL TOEPASSINGSGEBIED WETTELIJKE EN NORMATIEVE DOCUMENTEN DEFINITIES EN AFKORTINGEN PRINCIPE PRESTATIEKENMERKEN VEILIGHEIDSVOORSCHRIFTEN EN BIJZONDERE MAATREGELEN ALGEMENE VEILIGHEIDSVOORSCHRIFTEN ALGEMENE VOORZORGSMAATREGELEN SPECIFIEKE VOORZORGSMAATREGELEN REAGENTIA EN HULPSTOFFEN STANDAARDOPLOSSINGEN (ZIE LAB 22 P 013) REAGENTIA EN SOLVENTEN OPLOSSINGEN GLASWERK KLEIN MATERIAAL TOESTELLEN WERKWIJZE EXTRACTIE EN OPZUIVERING LC-MS ANALYSE KWALITEITSCONTROLE CRITERIA ANALYSESERIE BEREKENING EN RAPPORTERING MONSTERS DIE OPNIEUW MOETEN WORDEN OPGEZET INTERPRETATIE RESULTATEN RAPPORTERING EN INSCHRIJVING VERWIJZING NAAR BIJHORENDE PROCEDURES, INSTRUCTIES, DOCUMENTEN, FORMULIEREN OF LIJSTEN BIJLAGEN PROCEDURES LAB 22 I-MET 041 v.06 3/31

4 13.3 INSTRUCTIES FORMULIEREN, LIJSTEN EN DOCUMENTEN LAB 22 I-MET 041 v.06 4/31

5 1 Doel BEPALING VAN SULFONAMIDEN,EN DAPSONE EN Deze methode beschrijft de extractie-, opzuiverings- en analyseprocedure voor het aantonen en identificeren, conform EU-criteria, van sulfonamiden,en dapsone en trimethoprim in voeder, vlees, lever, nier, honing, eieren, melk en kaas. 2 Toepassingsgebied Met deze LC-MS n methode kunnen sulfonamiden,en dapsone en trimethoprim aangetoond, geïdentificeerd en eventueel gekwantificeerd worden in voeder, vlees, lever, nier, honing, eieren, melk en kaas op de niveaus zoals weergegeven in de scope LAB 22 F TEST. Opmerking: de stoffen die opgenomen zijn in de scope kunnen variëren per matrix. Ook werden sommige stoffen enkel voor screening en niet voor bevestiging opgenomen in de scope. 3 Wettelijke en normatieve documenten. Volgende wetgeving is van toepassing voor geneesmiddelenresiduen in dierlijke producten: - Richtlijn 96/23/EC van 29 april Verordening 37/2010 (over MRL-waarden) De EU bepaalt in deze wetgeving een toegelaten MRL-waarde (maximum residu gehalte), afhankelijk van het soort dier en het soort weefsel. Voor de verboden stoffen wordt geen MRL-waarde vastgelegd. Voor melk, vlees, lever en nier geldt een MRL van 100 µg/kg voor de som van de aanwezige sulfonamiden. Voor vlees, lever en nier van paardachtigen geldt een MRL van 100 µg/kg voor trimethoprim. Voor melk, vlees, lever en nier van alle andere voedselproducerende dieren geldt een MRL van 50 µg/kg voor trimethoprim. Uitzondering: het gebruik van sulfonamiden en trimethoprim is niet toegestaan bij dieren die eieren voor menselijke consumptie produceren. Dapsone wordt in bijlage I van EU Richtlijn 96/23/EG ondergebracht bij de groep A- verbindingen (A6). Het gebruik van deze stoffen is verboden bij voedselproducerende dieren. In het document CRL Guidance Paper van 7/12/2007 worden richtlijnen gegeven voor de detectieniveaus van stoffen waarvoor er geen MRL is vastgelegd in Verordening 37/2010. Voor de bepaling van dapsone in melk en vlees wordt een niveau van 5 ppb aanbevolen. LAB 22 I-MET 041 v.06 5/31

6 4 Definities en afkortingen ACN: DAP / D: EtAc: EtOH: H 2 0: HAc: HCl: LC-MS: MeOH: MRL: MRPL: NaOH: NH 4 OH: Na 2 SO 4 : PFPA: PBM s: SUL / S: TRIM / T: TBME: Acetonitrile Dapsone Ethylacetaat Ethanol Water Azijnzuur Waterstofchloride Liquid Chromatography Mass Spectrometry Methanol Maximum Residue Level Minimum Required Performance Level Natriumhydroxide Ammoniak Natriumsulfaat Pentafluorpropionzuur Persoonlijke beschermingsmiddelen Sulfonamiden Trimethoprim Tertiair-butylmethyl-ether 5 Principe Eerst worden labmonsters bereid door homogeniseren en malen van de monsters. Daarna volgt een extractie- en opzuiveringsstap. Tenslotte worden detectie, identificatie en eventuele kwantificatie uitgevoerd met LC-MS n. 6 Prestatiekenmerken Het validatieschema en de bekomen prestatiekenmerken zijn terug te vinden in Vmap Veiligheidsvoorschriften en bijzondere maatregelen 7.1 Algemene veiligheidsvoorschriften Zie Instructie Instructies voor het dragen van persoonlijke beschermingsmiddelen (PBMs) LAB 22 I 017 LAB 22 I-MET 041 v.06 6/31

7 7.2 Algemene voorzorgsmaatregelen - Om contaminatie tegen te gaan wordt voor elk monster schone hulpmiddelen gebruikt. Onder schone hulpmiddelen wordt verstaan: hulpmiddelen die niet eerder gebruikt zijn of die in een wasmachine of op een andere manier grondig zijn gereinigd. - Het is meestal niet gekend of gebruikte standaarden afbreken onder invloed van daglicht en/of wit kunstlicht. Vermijd daarom onnodig lang in het licht staan van stoffen in oplossingen. Plaats de stoffen en oplossingen zo spoedig mogelijk na gebruik terug op de voorziene plaats. - De extractie met organische solventen dient bij voorkeur te gebeuren in een trekkast. 7.3 Specifieke voorzorgsmaatregelen N.v.t. 8 Reagentia en hulpstoffen Verwijzingen naar een product en/of fabrikant dienen enkel ter informatie en identificatie en houden geen uitsluiting in van andere producten en/of fabrikanten die mogelijk ook voldoen. Deze verwijzingen dienen om vergissingen te vermijden en het uitvoeren van bestellingen te vereenvoudigen. De in de procedure vermelde reagentia en apparatuur kunnen aldus door materiaal vervangen worden van minstens evenwaardige kwaliteit. De houdbaarheid van zelfbereide oplossingen is 1 jaar bij kamertemperatuur, behalve indien anders vermeld. De geschiktheid van gebruikte oplossingen, buffers en standaardoplossingen wordt nagegaan aan de hand van ingebouwde borgingspunten en langetermijnvalidatie. Indien hieraan voldaan wordt, wijst dit op de aanvaardbaarheid van deze reagentia en toont dit eveneens aan dat de kwaliteit van de analyse gewaarborgd blijft. Met ged. water wordt bedoeld: gedemineraliseerd water of water gereinigd over een aquadem-installatie. 8.1 Standaardoplossingen (zie LAB 22 P 013) M108: standaardmengsel SUL + TRIM (5 ng / µl in MeOH) M109: standaardmengsel SUL + TRIM (1 ng / µl in MeOH) M110: standaardoplossing sulfadimidine-d4, sulfadiazine-c13 en trimethoprim-d9 (10-25 ng / µl in MeOH) M111: standaardoplossing sulfadimidine-d4, sulfadiazine-c13 en trimethoprim-d9 (1-2,5 ng / µl in MeOH) M167 : standaardmengsel dapsone (5 ng / µl in MeOH) LAB 22 I-MET 041 v.06 7/31

8 M168 : standaardmengsel dapsone (1 ng / µl in MeOH) 8.2 Reagentia en solventen Aceton ( ) Watervrij Na 2 SO 4 ( ) HCl 0,1 M ( ) Iso-octaan ( ) LC-MS methanol ( ) LC-MS water ( ) Acetonitrile voor LC-MS (ACN) ( ) Pentafluorpropionzuur (PFPA) ( ) Ammoniakoplossing 25% ( ) Ged. H 2 O Tertiair-butylmethyl-ether (TBME) ( ) HCl 37% ( ) NaOH 32% ( ) Natriumacetaat ( ) Glycerol ( ) Ethylacetaat ( ) Azijnzuur HAc ( ) 8.3 Oplossingen % ACN in PFPA-oplossing 10 mm ph 4 3,28 g (+ 0,1g) PFPA ( ) afwegen in een beker van 2000 ml (8.4.4.), aanlengen met LC-MS water (8.2.6.) tot ongeveer 1500 ml en homogeniseren. Op ph 4 (+ 0,2) brengen met NH 4 OH 2M (8.3.2.), 78,1 g (+ 0,1g) ACN (8.2.7.) toevoegen en overbrengen in een maatkolf van 2000 ml (8.4.3.). Aanlengen tot de ijkstreep met LC- MS water (8.2.6.) en homogeniseren NH 4 OH 2M - breng 150 ml ammoniakoplossing 25% (8.2.9.) in een maatkolf van 1000 ml (8.4.3.) - leng aan met LC-MS water (8.2.6.) tot 1000 ml en homogeniseer Glyceroloplossing 10% in methanol ml glycerol ( ) in een maatkolf van 1000 ml (8.4.3.) brengen LAB 22 I-MET 041 v.06 8/31

9 - leng aan tot de ijkstreep met LC-MS MeOH (8.2.5.) HCl 0,01 M - breng 30 ml LC-MS H 2 O (8.2.6.) in een maatkolf van 100 ml (8.4.3.) - voeg 10 ml HCl 0,1 M (8.2.3.) toe - leng aan met LC-MS H 2 O (8.2.6.) tot 100 ml en homogeniseer Natriumacetaatoplossing 5 M - weeg 41,02 g natriumacetaat (8.2.14) af - los geleidelijk de afgewogen hoeveelheid op in een maatbeker van 100 ml (8.4.4.) gevuld met 80 ml LC-MS H 2 O (8.2.6.) - giet over in een maatkolf van 100 ml (8.4.3.) en leng aan met LC-MS H 2 O (8.2.6.) tot 100 ml en homogeniseer HCl 2 M - breng 300 ml H 2 O (8.2.6.) in een maatkolf van 1000 ml (8.4.3.) - voeg 166 ml HCl 37% ( ) toe - leng aan met H 2 O (8.2.6.) tot 1000 ml en homogeniseer 8.4 Glaswerk Glazen autosamplerflesjes (vials) ( ) Glazen flesjes met schroefdop (40 ml) ( ) Maatkolven Maatbekers Glazen kolfjes 100 ml Pyrexbuisjes 12x75 mm ( ) Pyrexbuisjes 13x100 mm ( ) 8.5 Klein materiaal Spatel, scalpel, vleesplank en papieren handdoekrol Micropipetten met eurotips Multipette systeem met combitips Lange pipettips ( ) Stomacherzakken ( ) centrifugeerbuizen 50 ml ( ) centrifugeerbuizen 15 ml ( ) Plooifilters ( ) LAB 22 I-MET 041 v.06 9/31

10 LC-kolom: Waters Acquity UPLC BEH C18 1,7 µm 2,1 x 100 mm ( ) Centrifugeerbuisje 0,5 ml ( ) Chem-Elut 1010 kolom ( ) Centrifugeerbuisje 2 ml ( ) PP microvial voor LC-MS ( ) PP insert en schroefdop met septum ( tot ) 9 Toestellen 9.1. Moulinette-mixer 9.2. Bovenweger 9.3. Vortex 9.4. Stomachertoestel 9.5. Centrifuge 9.6. Ultracentrifuge 9.7. LC-MS 9.8. Schudtoestel 9.9. Diepvriezer Ultra Low Freezer Ultrasoonbad Rotavapors Indampsysteem: turbovap Analytische balans ph-meter Warmwaterbad 10 Werkwijze 10.1 Extractie en opzuivering Voorbereiding monsters en controlemonsters Alle monsters worden ingeschreven op het werkblad Inschrijvingsblad LAB 22 F 022. Malen en afwegen van de monsters: zie instructie Monstervoorbereiding voor de sectie R&C LAB 22 I Monsters Weeg 3 g gemalen vlees af in een centrifugeerbuis van 50 ml (8.5.6.) op de bovenweger (9.2). Weeg 10 g gemalen vlees, lever of nier af in een stomacherzakje (8.5.5.) op de bovenweger (9.2). Weeg 5 g voeder af in een glazen flesje met schroefdop (8.4.2.) op de bovenweger (9.2). LAB 22 I-MET 041 v.06 10/31

11 Weeg 5 g honing af in een centrifugeerbuis van 50 ml (8.5.6.) op de bovenweger (9.2). Pipetteer 1 ml melk af in een centrifugeerbuis van 50 ml (8.5.7.) Voor melkpoeder: weeg 1 g melkpoeder af in een centrifugeerbuis van 50 ml (8.5.6.) op de bovenweger (9.2). Weeg 1 g gehomogeniseerd ei of afgeleide producten van melk af in een centrifugeerbuis van 50 ml (8.5.6.) op de bovenweger (9.2) Controlemonsters Screening Bij het uitvoeren van een screening wordt per reeks minstens 1 belast controlemonster op de MRL of rapporteringslimiet meegenomen meegenomen op niveau van de rapporteringsgrens voor verboden stoffen en voor MRL-verbindingen op een niveau lager dan de MRL. Voor de MRL-verbindingen wordt nog een extra belast monster op 1/5 van de MRL meegenomen, dit omdat men er vanuit gaat dat er maximum 5 verschillende sulfonamiden kunnen voorkomen in één monster. Per controlemonster wordt op een bovenweger (9.2.) de benodigde hoeveelheid blanco monster, zoals weergeven in , afgewogen. Onderstaand schema wordt gevolgd voor de belasting van de controlemonsters. Matrix Belast controlemonster Vlees, lever en nier *20 ppb S + T/ 5 ppb D *100 ppb SUL / 25 ppb DAP + 40 µl M108 (5ng/µl) + 10 µl M167 (5ng/µl) µl M108 (5ng/µl) + 50 µl M167(5ng/µl) Vlees *20 ppb S + T / 5 ppb D + 60 µl M109 (1ng/µl) + 15 µl M168 (1ng/µl) Ei *5 ppb S + T + D + 5 µl M109(1ng/µl) + 5 µl M168 (1 ng/µl) Melk en kaas *20 ppb S + T/ 5 ppb D *100 ppb SUL / 25 ppb DAP + 20 µl M109 (1ng/µl) + 5 µl M168 (1 ng/µl) µl M109 (1ng/µl) + 25 µl M168 (1 ng/µl) Honing *20 ppb S + T + D + 20 µl M108 (5 ng/µl) + 20 µl M167(5 ng/µl) Voeder *50 ppb S + T + D + 50 µl M108 (5 ng/µl) + 50 µl M167 (5 ng/µl) Bevestiging Bij het uitvoeren van een bevestiging kunnen naargelang het ingeschat gehalte meerdere belaste monsters meegenomen worden. LAB 22 I-MET 041 v.06 11/31

12 Bij een kwantitatieve bevestiging dient de ijklijn minstens 5 belaste monsters te bevatten. Hierbij is het aangeraden een belast monster mee te nemen op het niveau van de MRL. Het hoogste punt van de ijklijn moet groter dan of gelijk zijn aan de CCα. Doorgaans wordt voor het hoogste punt een concentratie gekozen die gelijk is aan 2 maal de MRL Blanco monsters Screening Bij het uitvoeren van een screening wordt per matrix en per reeks minimum 1 blanco monster meegenomen. Weeg de benodigde hoeveelheid blanco monster, zoals weergeven in , af op de bovenweger (9.2.). Bevestiging Bij het uitvoeren van een bevestiging kunnen worden per reeks en per matrix minimum 2 meerdere blanco monsters meegenomen worden; verdachte monsters worden in de analyseserie tussen 2 blanco monsters en/of solventen gezet Monsters, controlemonsters en blanco monsters Screening Aan alle analysemonsters (monsters, controlemonsters en blanco monsters) inwendige standaard sulfadimidine-d4 M110 (10-25 ng/µl) (8.1.3.) of sulfadimidine-d4 M111 (1 2,5 ng/µl) (8.1.4.) toevoegen, volgens onderstaand schema. Matrix Voeder Vlees, lever en nier Vlees Honing Melk en kaas Ei Belasting met M110 (10-25 ng/µl) of M111 (1-2,5 ng/µl) 25 µl M µl M µl M µl M µl M µl M111 Bevestiging Om het gehalte van een eventueel aanwezige stof beter te kunnen inschatten, wordt bij een bevestiging de overeenkomstige gedeutereerde stof, indien deze voorhanden is, toegevoegd en gemeten. LAB 22 I-MET 041 v.06 12/31

13 Extractie en opzuivering in voeder (Flow-chart zie LAB 22 I-MET 041 D001) - 5 g watervrij Na 2 SO 4 (8.2.2.) toevoegen - 25 ml aceton (8.2.1.) toevoegen - vortexen (9.3.) - 30 min schudden met schudtoestel (9.8.) - 2 ml uitnemen in centrifugeerbuisje ( ) van 2 ml - 15 min centrifugeren in ultracentrifuge (9.6.) op 12500xg - 1 ml overbrengen in pyrex buisje 12 x 75 mm (8.4.6.) en indampen (9.12.) in turbovap µl HCl 0,01 M (8.3.4.) toevoegen - 1 ml iso-octaan (8.2.4.) toevoegen - vortexen (9.3.) - 15 min centrifugeren (9.5.) op 2700xg µl uit onderste fase overnemen met lange pipettip (8.5.4.) in microvial voor LC-MS ( ) en injecteren in LC-MS Extractie en opzuivering in vlees, lever en nier (Flow-chart LAB 22 I-MET 041 D002) ml ged. H 2 O ( ) - extraheren met behulp van stomacher gedurende 2 min bij 230 tpm (9.4.) - 2 ml extract overnemen in centrifugeerbuis 2 ml ( ) - ultracentrifugeren gedurende 15 min bij 12500xg (9.6.) - 1 ml uitnemen in pyrex buis 13 x 100 mm (8.4.7.) - 4 ml TBME toevoegen ( ) - goed vortexen (9.3.) - krachtig schudden met de hand en onmiddellijk in ultrasoonbad (9.10.) plaatsen voor 10 min, tussendoor 2 maal krachtig schudden. - centrifugeren gedurende 15 min bij 2700xg (9.5.) - bevriezen in Ultra Low Freezer (9.9.) tot bevriezen onderste fase - bovenste, niet bevroren, fase overgieten in andere pyrexbuis 12 x 75 mm (8.4.6.) - indampen (9.12.) in turbovap µl HCl 0,01 M (8.3.4.) toevoegen aan het residu en vortexen (9.3.) - 1 ml iso-octaan (8.2.4.) toevoegen en vortexen (9.3.) - centrifugeren gedurende 15 min bij 2700xg (9.5.) µl uit onderste fase overnemen met lange pipettip (8.5.4.) in microvial voor LC-MS ( ) en injecteren in LC-MS Extractie en opzuivering in honing (Flow-chart zie LAB 22 I-MET 041 D003) ml HCl 2 M (8.3.6.) LAB 22 I-MET 041 v.06 13/31

14 - goed vortexen (9.3.) - 30 min laten staan in een warmwaterbad van ± 50 C (9.15) en vortexen om de 10 minuten - 5 min centrifugeren (9.5.) op 2700xg - supernatans overbrengen in andere centrifugeerbuis van 50 ml (8.5.6.) - op ph 4,5 brengen (9.14.) met - 1 ) enkele druppels NaOH 32% ( ) - 2 ) natriumacetaat 5M (8.3.5.) - let op: het totaal volume vloeistof in de centrifugeerbuis mag niet meer zijn dan 10 ml - extract op Chem Elut kolom van 10 ml ( ) brengen - 10 min laten optrekken - elueren met 3 x 8 ml TBME ( ) en opvangen in glazen kolfje van 100 ml (8.4.5.) µl glycerol 10% (8.3.3.) toevoegen - indampen met rotavapor (9.11.) - kolfje naspoelen met 2 ml TBME ( ), residu losmaken in ultrasoonbad (9.10.) en overnemen in pyrex buis 12 x 75 mm (8.4.6.) - indampen (9.12.) in turbovap - droogrest heroplossen in 500 µl HCl 0,01 M (8.3.4.) en vortexen (9.3.) - 1 ml iso-octaan (8.2.4.) toevoegen en vortexen (9.3.) - 15 min centrifugeren (9.5.) bij 2700xg µl uit onderste fase overnemen met lange pipettip (8.5.4.) in microvial voor LC-MS ( ) en injecteren in LC-MS Extractie en opzuivering in melk en kaas (Flow-chart zie LAB 22 I-MET 041 D004) - 0,7 g watervrij Na 2 SO 4 (8.2.2.) toevoegen - vortexen (9.3.), tot goed gemengd! - 10 ml iso-octaan (8.2.4.) toevoegen - vortexen (9.3.) - 15 min schudden op schudtoestel (9.8.) - 15 min centrifugeren (9.5.) bij 2700xg - bevriezen in Ultra Low Freezer (9.9.) tot bevriezen onderste fase, ± 20 minuten - iso-octaan afgieten, onderste fase laten ontdooien en verder werken met de onderste fase - 3 ml ethylacetaat ( ) toevoegen - 0,17 ml HCl 0,1M (8.2.3.) toevoegen - vortexen (9.3.) - 5 minuten in het ultrasoonbad (9.10.) - vortexen (9.3.) - 15 min centrifugeren (9.5.) bij 2700xg - 1 ml supernatans overnemen in een pyrex buis 12 x 75 mm (8.4.6.) LAB 22 I-MET 041 v.06 14/31

15 - indampen (9.12.) in turbovap - droogrest heroplossen in 500 µl HCl 0,01 M (8.3.4.) - vortexen (9.3.) - 2 ml iso-octaan (8.2.4.) toevoegen - vortexen (9.3.) - 15 min centrifugeren (9.5.) bij 2700xg µl uit onderste fase overnemen met lange pipettip (8.5.4.) in microvial voor LC-MS ( ) en injecteren in LC-MS Extractie en opzuivering in eieren (Flow-chart zie LAB 22 I-MET 041 D005) - 3 g watervrij Na 2 SO 4 (8.2.2.) toevoegen - vortexen (9.3.), tot goed gemengd! - 25 ml acetonitrile (8.2.7.) toevoegen - 1 min vortexen (9.3.) - 10 min schudden op schudtoestel (9.8.) - 5 min centrifugeren (9.5.) bij 15000xg - supernatans afgieten over plooifilter (8.5.8.) in kolfje van 100 ml (8.4.5.) - indampen met rotavapor (9.11.) - heroplossen in 2 x 1 ml aceton (8.2.1.), losmaken in ultrasoonbad (9.10.) en overbrengen in pyrex buis 12 x 75 mm (8.4.6.) - indampen (9.12.) in turbovap - droogrest heroplossen in 500 µl HCl 0,01 M (8.3.4.) en vortexen (9.3.) - 2 ml iso-octaan (8.2.4.) toevoegen en vortexen (9.3.) - 15 min centrifugeren (9.5.) bij 2700xg - als de onderste fase troebel is: overnemen in centrifugeerbuisje 0,5 ml ( ) en 15 min ultracentrifugeren (9.6.) bij 12500xg µl uit onderste fase overnemen met lange pipettip (8.5.4.) in microvial voor LC-MS ( ) en injecteren in LC-MS Extractie en opzuivering in vlees (Flow-chart zie LAB 22 I-MET 041 D 008) - 30 ml ged. H 2 O ( ) toevoegen - 30 min. schudden (9.8.) - centrifugeren gedurende 5 min. bij 2700xg (9.5.) µl van het extract overnemen in een centrifugeerbuisje van 2 ml ( ) µl iso-octaan (8.2.4.) toevoegen - goed vortexen (9.3.) - ultracentrifugeren gedurende 15 min. bij 12000xg (9.6.) µl van de onderste fase overnemen in een pyrexbuis 13 x 100 mm (8.4.7.) - 2 ml TBME ( ) toevoegen LAB 22 I-MET 041 v.06 15/31

16 - goed vortexen (9.3.) en krachtig schudden met de hand, onmiddellijk in ultrasoonbad (9.10.) plaatsen voor 10 min, tussendoor 2 maal krachtig schudden. - centrifugeren gedurende 15 min bij 2700xg (9.5.) - bevriezen in Ultra Low Freezer (9.9.) tot bevriezen onderste fase - bovenste, niet bevroren, fase overgieten in andere pyrexbuis 13 x 100 mm (8.4.7.) µl glycerol 10% (8.3.3.) toevoegen - indampen in turbovap (9.12.) - 20 µl LC-MS MeOH (8.2.5.) toevoegen aan het residu en vortexen (9.3.) µl HCl 0,01 M (8.3.4.) toevoegen en vortexen (9.3) - alles overnemen met lange pipettip (8.5.4.) in microvial voor LC-MS ( ) en injecteren in LC-MS 10.2 LC-MS Analyse Standaardvoorbereiding Een standaardmengsel met een concentratie van 0,01ng/µl wordt in een glazen autosamplerflesje (8.4.1.) bereid als volgt: - 10 µl M109 (8.1.2.) - 10 µl M168 (8.1.8.) - 10 µl M111 (8.1.4.) µl 0,01 M HCl (8.3.4.) vortexen (9.3.) en overbrengen in microvial voor LC-MS ( ) met lange pipettip (8.5.4.) Instellingen LC-parameters Kolom HPLC: Waters Acquity UPLC BEH C18 1,7 µm 2,1 x 100 mm (8.5.9.) Solventen: ACN (8.2.7.) 5% ACN in PFPA 10 mm (ph 4) (8.3.1.) Injectievolume : 10 µl Kolomtemperatuur: 50 C HPLC-setup: zie methode C:\Xcalibur:\methods:\ESI_SUL Instellingen MS-parameters De analyse gebeurt in de ESI-mode. Acquisitie gebeurt in MS 2 in de positieve mode met de methode ESI_SUL. LAB 22 I-MET 041 v.06 16/31

17 De instellingen voor de ESI en de acquisitie zijn vermeld in deze methode. LAB 22 I-MET 041 L007 geeft een overzicht van de kenmerkende ionen van de gezochte componenten. Een voorbeeld van het LC-MS n chromatogram is terug te vinden onder LAB 22 I-MET 041 D Criteria analysesysteem Vóór elke bepaling moet gecontroleerd worden of het systeem in orde is a.d.h.v. de begeleidende controlelijst Kwaliteitsborging MS (LAB 22 F 027) welke dient ingevuld te worden. De druk van het systeem in de beginomstandigheden wordt genoteerd op deze controlelijst Kwaliteitsborging MS (LAB 22 F 027). De druk moet gecontroleerd worden om het risico van stilvallen van het systeem te vermijden. Een richtwaarde voor de maximum begindruk voor deze analyse is 600 bar. Een hogere druk wijst waarschijnlijk op verstopping van de prekolom of kolom, deze kan dan eventueel vervangen worden. Injecteer bovenstaand standaardmengsel (10.2.1) en controleer de geschiktheid van het systeem voor analyse aan de hand van het document criteria voor LC-MS (zie log LC-MS). Het chromatogram van de standaard die vooraf werd geïnjecteerd, wordt aan de checklist bevestigd. Voor de goedkeuring van het systeem voor gebruik worden de initialen genoteerd op de begeleidende controlelijst Kwaliteitsborging MS (LAB 22 F 027) Analysevolgorde De analysevolgorde wordt vermeld op de analyselijst voor elk systeem. Elke run start met injectie van tenminste 1 maal de standaard alvorens de monsters te analyseren. Na injectie van de standaard volgt steeds injectie van solvent om contaminatie vanuit het standaardmengsel te voorkomen en te controleren of er geen overdracht is in het systeem. Blanco monsters en De belaste monsters worden bij voorkeur ofwel voor een standaard ofwel op het einde van de reeks geanalyseerd. Na een analysereeks wordt solvent geïnjecteerd met de methode STOP waarbij alle flows geminimaliseerd worden. 11 Kwaliteitscontrole 11.1 Criteria analyseserie Solvent LAB 22 I-MET 041 v.06 17/31

18 Bij injecties van solvent moeten de analyt(en) afwezig zijn: de intensiteit van de analyt(en) mag niet groter zijn dan 5% van de intensiteit van de analyt(en) in het belaste monster op de actielimiet Blanco monsters De intensiteit van de inwendige standaard moet minstens op de helft aanwezig zijn van de intensiteit van de inwendige standaard in het belast controlemonster. De opgespoorde analyt(en) moeten afwezig zijn: - Screening: de relatieve intensiteit van de analyt(en) moet kleiner zijn dan de relatieve intensiteit van de analyt(en) in het belaste monster op de actielimiet. - Bevestiging: de relatieve intensiteit van de analyt(en) mag niet groter zijn dan 1% van de relatieve intensiteit van de analyt(en) in het belaste monster op de actielimiet Controlemonsters en standaarden In belaste controlemonsters en standaarden moeten de opgespoorde analyt(en) en de inwendige standaard teruggevonden worden met een S/N 6 op zicht. De resultaten worden bijgehouden in controlekaarten, terug te vinden onder M:\R&C\Controlekaarten\LC-MS Monsters In monsters moet de inwendige standaard teruggevonden worden op minstens de helft van het niveau in het belaste controlemonster op de actielimiet Identificatiecriteria Voor de identificatiecriteria wordt verwezen naar de publicatie 2002/657/EG; pagina L221/16 en L221/17 (LAB 22 D 049) Criterium voor goedkeuring calibratiecurve bij bevestiging MRL-verbindingen De correlatiecoëfficiënt R² moet groter dan of gelijk zijn aan 0,98. Indien hieraan niet voldaan is, moet er eerst overlegd worden, alvorens de serie goed te keuren Criteria voor goedkeuring gehele serie Aan de hand van de vastgestelde criteria t.e.m besluit de analist, zo nodig in overleg, of de serie goedgekeurd wordt en parafeert hiervoor op de controlelijst (LAB 22 F 027). LAB 22 I-MET 041 v.06 18/31

19 Indien de borgingspunten van de serie niet voldaan zijn, moet nagegaan worden wat de oorzaak is en welke maatregelen getroffen moeten worden. Deze worden vermeld op de controlelijst (LAB 22 F 027). Afkeuring van de gehele serie houdt automatisch in dat de gehele serie opnieuw moet worden opgewerkt. Daarnaast kan, ondanks dat bv. een monster niet goedgekeurd wordt, de serie als zodanig wel goedgekeurd worden. In dat geval worden enkel de afgekeurde monsters opnieuw opgezet. 12 Berekening en rapportering 12.1 Monsters die opnieuw moeten worden opgezet Monsters waarvan de borgingscriteria niet voldaan zijn en opnieuw moeten worden opgezet, worden vermeld op de controlelijst Kwaliteitsborging MS (LAB 22 F 027) en genoteerd voor heranalyse op het Inschrijvingsblad (LAB 22 F 022) 12.2 Interpretatie resultaten Screening Een monster wordt beoordeeld als conform : - voor verboden stoffen: als het relatief signaal van de analyt (signaal van de analyt / signaal inwendige standaard) kleiner is dan dat van het belaste controlemonster op de actielimiet (= rapporteringslimiet). - voor MRL-verbindingen: als het relatief signaal van de analyt (signaal van de analyt / signaal inwendige standaard) kleiner is dan dat van het belaste controlemonster op de helft van de MRL Een monster wordt beoordeeld als verdacht : - voor verboden stoffen: als het relatief signaal van de analyt (signaal van het analyt / signaal inwendige standaard) groter dan of gelijk is aan dat van het belaste controlemonster op de actielimiet (= rapporteringslimiet). - voor MRL-verbindingen: als het relatief signaal van de analyt (signaal van het analyt / signaal inwendige standaard) groter dan of gelijk is aan dat van het belaste controlemonster op de helft van de MRL. Verdachte monsters moeten opnieuw geanalyseerd worden (bevestiging). Voor MRL-verbindingen moet er voor bevestiging in de analyseserie een ijklijn, bestaande uit minimum 5 punten, meegenomen worden, zie voor verdere instructies. Opmerking: voor verboden stoffen kan ook gerapporteerd worden op basis van een eerste analyse, wanneer voldaan is aan de identificatiecriteria (zie punt ) LAB 22 I-MET 041 v.06 19/31

20 Bevestiging Verboden stoffen Een monster wordt beoordeeld als niet-conform als het relatief signaal van de analyt (signaal van het analyt / signaal inwendige standaard) groter dan of gelijk is aan dat van het belaste controlemonster op de actielimiet (= rapporteringslimiet) en als het voldoet aan de criteria volgens beschikking 2002/657/EG (zie punt ). MRL-verbindingen Indien aan de identificatiecriteria (zie ) en het criterium voor de calibratiecurve (zie ) voldaan is, wordt het monster gerapporteerd voor de gevonden stof indien het gehalte groter dan of gelijk is aan het gehalte van het laagste punt ( laagste belast controlemonster bv. ¼ van de MRL) van de calibratiecurve. De rapportering gebeurt op basis van de waarden bekomen met de calibratiecurve. De gehaltes worden afgerond tot op 2 beduidende cijfers voor gehaltes kleiner dan 100 ppb en tot op 3 beduidende cijfers voor gehaltes vanaf 100 ppb. Indien het gehalte groter is dan het hoogste punt (hoogst belast controlemonster) van de calibratiecurve dan wordt als gehalte gerapporteerd > concentratie hoogste punt bv. indien het hoogste punt van de calibratiecurve een concentratie van 200 ppb heeft wordt > 200ppb als concentratie gerapporteerd. Een monster wordt als conform beoordeeld wanneer de concentratie van de analyt kleiner is dan de CCα. Een monster wordt als niet-conform beoordeeld wanneer de concentratie van de analyt groter dan of gelijk is aan de CCα. De waarde van CCα is terug te vinden in Vmap 041 alsook in de scope 014-TEST. Bij niet-conforme monsters wordt ter informatie de waarde van de CCα en eventueel de MRL meegedeeld op het verslag Rapportering en inschrijving De rapportering gebeurt zoals beschreven onder punt 12.2 De rapportering en inschrijving van resultaten gebeurt zoals beschreven in de procedure Monsterbeheer ( LAB 22 P 007) LAB 22 I-MET 041 v.06 20/31

21 13 Verwijzing naar bijhorende procedures, instructies, documenten, formulieren of lijsten Bijlagen LAB 22 I-MET 041 D001: Flow-chart: Bepaling van sulfonamiden,en dapsone en trimethoprim in voeder met LC-MS LAB 22 I-MET 041 D002: Flow-chart: Bepaling van sulfonamiden,en dapsone en trimethoprim in vlees, lever en nier met LC-MS LAB 22 I-MET 041 D003: Flow-chart: Bepaling van sulfonamiden,en dapsone en trimethoprim in honing met LC-MS LAB 22 I-MET 041 D004: Flow-chart: Bepaling van sulfonamiden,en dapsone en trimethoprim in melk en kaas met LC-MS LAB 22 I-MET 041 D005: Flow-chart: Bepaling van sulfonamiden,en dapsone en trimethoprim in eieren met LC-MS LAB 22 I-MET 041 D006: Voorbeeld LC-MS n chromatogram LAB 22 I-MET 041 D008: Flow-chart: Bepaling van sulfonamiden, dapsone en trimethoprim in vlees met LC-MS 13.2 Procedures LAB 22 P 013: Aanmaak en beheer van standaarden. LAB 22 P 007: Monsterbeheer 13.3 Instructies LAB 22 I 017: Instructies voor het dragen van persoonlijke beschermingsmiddelen (PBMs) LAB 22 I 011: Instructie Monstervoorbereiding voor de sectie R&C 13.4 Formulieren, lijsten en documenten LAB 22 F 009: Scope R&C LAB 22 I-MET 041 v.06 21/31

22 014-TEST: scope FAVV LAB 22 F 027: Controlelijst Kwaliteitsborging MS LAB 22 F 022: Inschrijvingsblad LAB 22 I-MET 041 L007: Sulfonamiden: overzicht van de retentietijden en kenmerkende ionen LAB 22 D 049: Copie L221/16-L221/17 van 2002/657/EG LAB 22 I-MET 041 v.06 22/31

23 BEPALING VAN SULFONAMIDEN EN DAPSONE MET LC-MS Flow-chart: Bepaling van sulfonamiden,en dapsone en trimethoprim in voeder met LC-MS Blanco monster: Belaste monsters: Monster: 5 g blanco matrix afwegen in 5 g blanco matrix afwegen in glazen flesje (40 ml) met schroefdop 5 g matrix afwegen in glazen flesje (40 ml) met * 50 ppb S + T + D: + 50 µl M108 (5 ng/µl) + 50 µl M167 (5 ng/µl) glazen flesje (40 ml) met schroefdop schroefdop + 25 µl M110 (10-25 ng/µl) + 5 g watervrij Na 2SO ml aceton vortexen 30 min schudden 2 ml uitnemen in centrifugeerbuisje van 2 ml 15 min centrifugeren in ultracentrifuge 12500xg 1 ml overbrengen in gemerkt pyrex buisje (12 x 75 mm) Indampen in turbovap µl HCl 0,01 M + 1 ml iso-octaan vortexen 15 min centrifugeren bij 2700xg 130 µl uit onderste fase overnemen met lange pipettip in microvial voor LC-MS en injecteren in LC-MS DATUM VAN TOEPASSING: LAB 22 I-MET 041 D001 v.06 23/31

24 BEPALING VAN SULFONAMIDEN EN DAPSONE MET LC-MS Flow-chart: Bepaling van sulfonamiden,en dapsone en trimethoprim in vlees, lever en nier met LC-MS Blanco monster: Belaste monsters: Monster: 10 g gemalen blanco matrix 10 g gemalen blanco matrix afwegen in stomacherzakje 10 g gemalen matrix afwegen in stomacherzakje * 20 ppb S +T / 5 ppb D: + 40 µl M108 (5 ng/µl)+ 10 µl M167 (5 ng/µl) afwegen in * 100 ppb SUL / 25 ppb DAP: µl M108 (5 ng/µl) 50 µl M167 (5 ng/µl) stomacherzakje + 30 ml ged. H 2O + 20 µl M110 (10-25 ng/µl) extraheren m.b.v. stomacher gedurende 2 min bij ± 230 tpm 2 ml extract overnemen in centrifugeerbuisje van 2 ml 15 min ultracentrifugeren bij 12500xg 1 ml uitnemen in pyrexbuis 13 x 100 mm + 4 ml TBME goed vortexen en krachtig schudden met de hand, onmiddellijk 10 min in het ultrasoonbad en tussendoor 2 x krachtig schudden 15 min centrifugeren bij 2700xg bevriezen in Ultra Low Freezer tot bevriezen onderste fase bovenste, niet bevroren, fase overgieten in andere pyrexbuis 12 x 75 mm indampen in turbovap µl HCl 0,01 M vortexen + 1 ml iso-octaan vortexen 15 min centrifugeren bij 2700xg 130 µl uit onderste fase overnemen met lange pipettip in microvial voor LC-MS en injecteren in LC-MS DATUM VAN TOEPASSING: LAB 22 I-MET 041 D002 v.06 24/31

25 BEPALING VAN SULFONAMIDEN EN DAPSONE MET LC-MS Flow-chart: Bepaling van sulfonamiden,en dapsone en trimethoprim in honing met LC-MS Blanco monster: Belaste monsters: Monster: 5 g blanco matrix afwegen in 5 g blanco matrix afwegen in centrifugeerbuis 50 ml 5 g matrix afwegen in centrifugeerbuis 50 ml * 20 ppb S +T+ D : + 20 µl M108 (5 ng/µl)+ 20 µl M167 (5 ng/µl) centrifugeerbuis 50 ml + 5 ml HCl 2 M + 10 µl M110 (10-25 ng/µl) goed vortexen en daarna 30 min laten staan in warmwaterbad bij ± 50 C en vortexen om de 10 min 5 min centrifugeren bij 2700xg supernatans overbrengen in andere centrifugeerbuis van 50 ml op ph 4,5 brengen met 1 ) enkele druppels NaOH 32% 2 ) natriumacetaat 5M Let op: totaal volume in centrifugeerbuis < 10 ml! extract op Chem Elut kolom van 10 ml brengen 10 min laten optrekken elueren met 3 x 8 ml TBME en opvangen in glazen kolfje van 100 ml µl glycerol 10 % indampen met rotavapor + 2 ml TBME losmaken in ultrasoonbad en overnemen in pyrexbuis 12 x 75 mm indampen µl HCl 0,01 M vortexen + 1 ml iso-octaan DATUM VAN TOEPASSING: LAB 22 I-MET 041 D003 v.06 25/31

26 BEPALING VAN SULFONAMIDEN EN DAPSONE MET LC-MS Flow-chart: Bepaling van sulfonamiden,en dapsone en trimethoprim in honing met LC-MS vortexen 15 min centrifugeren bij 2700xg 130 µl uit onderste fase overnemen met lange pipettip in microvial voor LC-MS en injecteren in LC-MS DATUM VAN TOEPASSING: LAB 22 I-MET 041 D003 v.06 26/31

27 BEPALING VAN SULFONAMIDEN EN DAPSONE MET LC-MS Flow-chart: Bepaling van sulfonamiden,en dapsone en trimethoprim in melk en kaas met LC-MS Blanco monster: Belaste monsters: Monster: 1 ml blanco matrix pipetteren in 1 ml blanco matrix pipetteren in centrifugeerbuis 50 ml of 1 ml matrix pipetteren in centrifugeerbuis 50 ml of 1 g blanco matrix afwegen in een centrifugeerbuis 50 ml centrifugeerbuis 50 ml of 1 g blanco matrix afwegen in een * 20 ppb S +T / 5 ppb D: + 20 µl M109 (1 ng/µl)+ 5 µl M168 (1 ng/µl) 1g matrix afwegen in een centrifugeerbuis 50 ml * 100 ppb SUL /25 ppb DAP: µl M109 (1 ng/µl)+ 25 µl M168 (1 ng/µl) centrifugeerbuis 50 ml + 10 µl M110 (10-25 ng/µl) + 0,7 g watervrij Na 2SO 4 vortexen + 10 ml iso- octaan vortexen 15 min schudden 15 min centrifugeren bij 2700xg bevriezen in Ultra Low Freezer tot bevriezen onderste fase, ± 20 min iso-octaan afgieten, onderste fase laten ontdooien en verder werken met onderste fase + 3 ml ethylacetaat + 0,17 ml HCl 0,1 M vortexen 5 min in ultrasoonbad vortexen 15 min centrifugeren bij 2700xg 1 ml supernatans overnemen in pyrex buisje 12 x 75 mm indampen in turbovap µl HCl 0,01 M vortexen + 2 ml iso-octaan Vortexen DATUM VAN TOEPASSING: LAB 22 I-MET 041 D004 v.06 27/31

28 BEPALING VAN SULFONAMIDEN EN DAPSONE MET LC-MS Flow-chart: Bepaling van sulfonamiden,en dapsone en trimethoprim in melk en kaas met LC-MS 15 min centrifugeren bij 2700xg 130 µl uit onderste fase overnemen met lange pipettip in microvial voor LC-MS en injecteren in LC-MS DATUM VAN TOEPASSING: LAB 22 I-MET 041 D004 v.06 28/31

29 BEPALING VAN SULFONAMIDEN EN DAPSONE MET LC-MS Flow-chart: Bepaling van sulfonamiden,en dapsone en trimethoprim in eieren met LC-MS Blanco monster: Belaste monsters: Monster: 1 g blanco matrix afwegen in 1 g blanco matrix afwegen in centrifugeerbuis 50 ml 1 g matrix afwegen in centrifugeerbuis 50 ml * 5 ppb S + T+ D: + 5 µl M109 (1 ng/µl)+ 5 µl M168 (1 ng/µl) centrifugeerbuis 50 ml + 3 g watervrij Na 2SO µl M111 (1-2,5 ng/µl) vortexen, tot goed gemengd! + 25 ml acetonitrile 1 min vortexen 10 min schudden 5 min centrifugeren bij 15000xg supernatans afgieten over plooifilter in kolfje van 100 ml indampen met rotavapor + 2 x 1 ml aceton losmaken in ultrasoonbad en overnemen in pyrexbuis 12 x 75 mm indampen in indampcentrifuge µl HCl 0,01 M vortexen + 2 ml iso-octaan vortexen 15 min centrifugeren bij 2700xg Als onderste fase troebel is: overnemen in centrifugeerbuisje 0,5 ml en 15 min ultracentrifugeren bij 12500xg 130 µl uit onderste fase overnemen met lange pipettip in microvial voor LC-MS en injecteren in LC-MS DATUM VAN TOEPASSING: LAB 22 I-MET 041 D005 v.06 29/31

30 BEPALING VAN SULFONAMIDEN EN DAPSONE MET LC-MS Flow-chart: Bepaling van sulfonamiden, dapsone en trimethoprim in vlees met LC-MS Blanco monster: Belaste monsters: Monster: 3 g gemalen blanco matrix 3 g gemalen blanco matrix afwegen in een centrifugeerbuis van 50 ml 3 g gemalen matrix afwegen afwegen in * 20 ppb S +T / 5 ppb D: + 60 µl M109 (1 ng/µl) + 15 µl M168 (1 ng/µl) in centrifugeerbuis van 50 ml centrifugeerbuis van 50 ml + 30 ml ged. H 2O + 60 µl M111 (1-2,5 ng/µl) 30 min schudden 5 min. centrifugeren bij 2700xg 500 µl extract overnemen in centrifugeerbuisje van 2 ml µl iso-octaan goed vortexen 15 min ultracentrifugeren bij 12000xg 200 µl van de onderste fase overnemen in pyrexbuis 13 x 100 mm + 2 ml TBME goed vortexen en krachtig schudden met de hand, onmiddellijk 10 min in het ultrasoonbad en tussendoor 2 x krachtig schudden 15 min centrifugeren bij 2700xg bevriezen in Ultra Low Freezer tot bevriezen onderste fase bovenste, niet bevroren, fase overgieten in andere pyrexbuis 13 x 100 mm µl glycerol 10% indampen in turbovap + 20 µl LC-MS MeOH vortexen µl HCl 0,01 M vortexen Alles overnemen in een microvial voor LC-MS en injecteren in LC-MS DATUM VAN TOEPASSING: LAB 22 I-MET 041 D008 v.06 30/31

31 BEPALING VAN SULFONAMIDEN EN DAPSONE MET LC-MS Voorbeeld van LC-MS chromatogram DATUM VAN TOEPASSING: LAB 22 I-MET 041 D006 v.06 31/31

32 LAB 22 I-MET 041 L007_Sulfonamiden: overzicht kenmerkende ionen en retentietijden Versie: 5 Datum van toepassing: 20/11/2014 Analyt Parent ion Indicatieve RT (min.) Indicatieve RRT t.o.v. Sulfadimidine-d4 Indicatieve RRT t.o.v. Sulfadiazine-C13 Indicatieve RRT t.o.v. Trimethoprim-d9 Diagnostische ionen in MS 2 Sulfadiazine-C13 (IS) 257 1,16 0, Sulfadiazine 251 1,16 0,68 1,00 0, Sulfathiazole 256 1,26 0,74 1,09 0, Sulfapyridine 250 1,4 0,82 1,21 0, Sulfamerazine 265 1,49 0,88 1,28 0, Sulfamethizole 271 1,59 0,94 1,37 0, Sulfamethazine 279 1,7 1,00 1,47 0, Sulfadimidine-d4 (IS) 283 1,7 1, Sulfamoxole 268 1,59 0,94 1,37 0, Sulfamethoxypyridazine 281 1,67 0,98 1,44 0, Sulfamonomethoxine 281 1,79 1,05 1,54 0, Sulfachloorpyridazine 285 1,84 1,08 1,59 1, Sulfamethoxazole 254 1,92 1,13 1,66 1, Sulfadoxine 311 1,96 1,15 1,69 1, Sulfadimethoxine 311 2,17 1,28 1,87 1, Sulfisoxazole 268 1,98 1,16 1,71 1, Sulfaquinoxaline 301 2,17 1,28 1,87 1, Dapsone 249 1,77 1,04 1,53 0, Trimethoprim 291 1,83 1,08 1,58 1, Trimethoprim-d9 (IS) 300 1,82 1, LAB 22 I-MET 041 L007_Overzicht van de retentietijden en de kenmerkende ionen v.05.xls