Inleidingsles automatische celtellingen

Transcriptie

1 Inleidingsles automatische celtellingen GASO-ASO Klinische Biologie dr. apr.-biol. D. Kieffer

2 Algemeen Siemens Sysmex Abbott Beckman-Coulter 2

3 Algemeen celtellingen: grote aantallen te analyseren stalen meetfouten verbonden aan de manuele technieken volautomatische analysetoestellen. volautomatische analyse: vertrekkend van µl volbloed (K 2 EDTA), zelfstandig uitvoeren van een aantal diluties, simultane analyse van verschillende parameters resultaten - al dan niet na elektronische verwerking samengevoegd op rapport doorsturen van deze resultaten naar een externe computer (LIS) 3

4 Algemeen naargelang complexiteit van analysetoestel: 7 (Hb, Hct, RBC, WBC, MCV, MCH, MCHC) tot > 110 meetgegevens al dan niet inclusief volledige (5-diff) of partiële (3-diff) WBC formule staalname: manueel of automatisch, vanaf open of gesloten bloedstaal allemaal uitgerust met barcode-lezer, zodat de meest frequente en gevaarlijke fouten, namelijk staalverwisselingen, theoretisch kunnen voorkomen worden 4

5 Algemeen monster volumina Sysmex XE-5000 Sysmex XN capillair bloed 40 µl / manueel/open 130 µl 88 µl automatisch/gesloten 200 µl 88 µl lichaamsvochten 130 µl 88 µl 5

6 Algemeen dilutorgedeelte meestal twee hoofdsuspensies bereid 1 in functie van analysen i.v.m. WBC en hemoglobine 1 sterker verdunde in functie van analysen i.v.m. RBC en PLT. metingen ivm WBC worden uitgevoerd na voorafgaande lyse van de RBC. hoge precisie bij aanmaak diluties (CV < 0.5 % voor volumes van enkele ml) roterende klep ( shear valve of sample rotor valve ) 3 keramische elementen, 2 vaste en 1 bewegend, met uitsparingen bepaald volume 6

7 Algemeen werking: stap 1 : aanzuiging bloed; de verschillende uitsparingen worden met bloed gevuld stap 2 : rotatie van het bewegend gedeelte, waardoor één of meer welbepaalde delen van de bloedlijn afgesneden worden stap 3 : terugspuiten afgesneden gedeelten van de bloedlijn met welbepaalde volumes diluens, waardoor zeer nauwkeurige diluties worden verkregen van 100 tot 200 µl opgezogen staal: slechts de laatste tientallen µl gebruikt; grootste deel van bloed om toestel te decontamineren van voorgaande staal. 7

8 Algemeen 8

9 Algemeen Sysmex XE-5000 Bron: Sysmex Be/Nl 9

10 Hoofdprincipes colorimetrie impedantie lichtverstrooiing & fluorescentie lichtverstrooiing & conductiviteit Bijkomende principes cytochemie specifieke lyse hoogfrequent wisselstroom depolarizatie verstrooid licht 10

12 Hoofdprincipes: colorimetrie Hb referentie methode manueel RBC lyseren in 1:500 verdunning stap 1: Hb met gebonden Fe 2+ wordt geoxideerd door K 3 (Fe(CN) 6 methb (Fe 3+ ) stap 2: MetHb reageert met KCN stabiel, rood cyaan-hb complex absorptie maximum bij 546 nm extinctie vh absorptie maximum is rechtstreeks evenredig met hoeveelheid Hb nadelen: toxisch KCN trage reactie (stabiel complex pas na 5-6 minuten) geen meting van sulfhb 12

13 Hoofdprincipes: colorimetrie cyanide-vrije (gemodificeerde) Hb-methoden: vb.: Sysmex SLS-methode SLS = Sodium Lauryl Sulphate = niet-toxisch detergens (~ zeep) Bron: Sysmex Be/Nl 13

14 Hoofdprincipes: colorimetrie cyanide-vrije (gemodificeerde) Hb-methoden: vb.: Sysmex SLS-methode SLS = Sodium Lauryl Sulphate, niet toxisch, deel uitmakend van een zeep lysis RBC door absorptie van SLS aan de RBC membraan Bron: CAT A. Vandermeersch 14

15 Hoofdprincipes: colorimetrie hydrofobe groep van SLS reageert met hemoglobine Fe 2+ (hemo) wordt geoxideerd tot Fe 3+ (hemi) hydrofiele groep van SLS bindt Fe 3+ vorming stabiel SLS-Hb fotometrische bepaling van SLS-Hb bij 540 nm Bron: Sysmex Be/Nl 15

16 Hoofdprincipes: colorimetrie interferenties? lipemie SLS = detergens dus weinig interferentie met lipiden hoge WBC telling afzonderlijke meetkamer voor Hb lysis van WBC dus geringe interferentie 16

17 Hoofdprincipes colorimetrie gemeten hemoglobine impedantie lichtverstrooiing & fluorescentie lichtverstrooiing & conductiviteit Bijkomende principes cytochemie specifieke lyse hoogfrequent wisselstroom depolarizatie verstrooid licht 17

18 Hoofdprincipes: impedantie 1949: Wallace Coulter 1953: patent 18

19 Hoofdprincipes: impedantie ~ Coulter principe apparaat waarin glazen buis met een zeer kleine opening(= telbuis of aperture) geplaatst is in een suspensie van bloedcellen door vacuüm wordt die suspensie in telbuis opgezogen tijdens dit proces: elektrische weerstand aangelegd tussen 2 elektroden: één in de celsuspensie, de andere in de telbuis elektrolytenoplossing (met suspensie bloedcellen) zorgt voor geleiding van stroom owv vacuüm, passage van een cel door nauwe opening van telbuis verandering/verhoging elektrische weerstand (= impedantie) hoe groter de cel, hoe hoger de verandering in elektrische weerstand Histogram = 2-dimensionaal 19

20 Hoofdprincipes: impedantie 20

21 Hoofdprincipes: impedantie 21

22 Hoofdprincipes: impedantie impedantie: verandering van elektrische weerstand hoogte van het signaal (grafiek piek) is evenredig met het volume van de cel Bron: Analis Be (Beckman/Coulter 22

23 Hoofdprincipes: impedantie RBC histogram RBC veroorzaken impedantie pieken met volume tussen 35 en 120 femtoliter Bron: Analis Be (Beckman/Coulter 23

24 Hoofdprincipes: impedantie PLT histogram PLT veroorzaken impedantie pieken met volume tussen 2 en 20 femtoliter Bron: Analis Be (Beckman/Coulter 24

25 Hoofdprincipes: impedantie WBC (3-diff) histogram partiële leukocytendifferentiatie (3-diff) obv impedantie is mogelijk WBC suspenderen in hypotoon milieu selectieve opzwelling van de WBC granulocyten > mononucleairen lysis lymfocyten: detectie celkernen < mononucleairen < genulocyten 25

26 Bron: Analis Be (Beckman/Coulter Automatische celtellingen Hoofdprincipes: impedantie WBC (3-diff) histogram partiële leukocytendifferentiatie (3-diff) obv impedantie is mogelijk WBC suspenderen in hypotoon milieu selectieve opzwelling van de WBC LY MO EO NE BA 26

27 Bron: Analis Be (Beckman/Coulter Automatische celtellingen Hoofdprincipes: impedantie 27

28 Hoofdprincipes: impedantie & hydrodynamische focusering 29

29 Hoofdprincipes: impedantie & hydrodynamische focusering 2 concentriche vloeistofstromen via centraal kanaal: injectie vh staal omgeven door een snel stromende elektrolytenoplossing: mantelvloeistof beweging mantelvloeistof: centrale vloeistofstroom vernauwt snelheid midden centrale vloeistofstroom > rand centrale vloeistofstroom partikels (cellen) worden op 1 lijn gedwongen slechts 1 cel tegelijk passeert de opening 30

30 Hoofdprincipes: impedantie & hydrodynamische focusering back sheath-flow front sheath-flow Bron: Sysmex Be/Nl 31

31 Bron: Sysmex Be/Nl Automatische celtellingen Hoofdprincipes: impedantie & hydrodynamische focusering 32

32 Hoofdprincipes: impedantie & hematocriet meting referentie methode eenvoudige volume bepaling van de corpusculaire deeltjes in bloed bloed wordt opgezogen in speciale capillairen (heparine coating) capillairen worden afgesloten met speciale folie en in speciale centrifuge speciale centrifuge: scheiding vaste en vloeibare delen tgv verschillende specifiekgewicht van plasma en bloeddeeltjes 33 Bron: Sysmex Be/Nl

33 Hoofdprincipes: impedantie & hematocriet meting referentie methode waarden aflezen van schaal waarin tube in 10 gelijke fracties verdeeld wordt scheidingslijn doorheen de splitsing van de RBC zone en de WBC zone = Hct 34 Bron: Sysmex Be/Nl

34 Hoofdprincipes: impedantie & hematocriet meting methode Sysmex = cumulatieve pulsehoogte detectie sommatie van alle individuele pulsen in het RBC-kanaal Bron: Sysmex Be/Nl 35

35 Hoofdprincipes: impedantie & hematocriet meting methode Sysmex = cumulatieve pulsehoogte detectie zelfs met maximale sedimentatie van de RBC in de centrifuge kleine hoeveelheid plasma tussen de cellen celtellers houden hiermee rekening dmv een constante Ph = k x V RBC Bron: Sysmex Be/Nl 36

36 Hoofdprincipes: impedantie & hematocriet berekening methode Beckman-Coulter, Siemens, Abbott berekening Hct (GEEN rechtstreekse meting) obv meting MCV (impedantie) MCV (fl) x RBC (10 e 6/µL) factor voor trapped plasma? 37

37 Hoofdprincipes: impedantie & RBC indices berekend Bron: Sysmex Be/Nl 38

38 Hoofdprincipes: impedantie & RBC indices berekend (RDW) RDW (Red Cell Distribution Width) = variatiecoëfficient van erytrocytenvolume parameter afgeleid uit frequentiehistogram van RBC volume RDW is objectieve maat voor grootteverdeling van RBC populatie maat voor anisocytose. eenheid: % referentiewaarden: 11,5-14,5% (toestelafhankelijk) 39

39 Hoofdprincipes: impedantie & RBC indices berekend (RDW) 40

40 Hoofdprincipes: impedantie & PLT indices berekend (MPV) MPV (Mean platelet volume) = gemiddeld bloedplaatjesvolume parameter afgeleid uit het PLT frequentiehistogram term mean is misleidend : naargelang gebruikte apparatuur is MPV gemiddelde waarde van het bloedplaatjesvolume mediaanwaarde van het bloedplaatjesvolume modus van het bloedplaatjesvolume onderliggende oorzaak is dat het bloedplaatjesfrequentiehistogram geen gausskromme is, maar een scheve populatie. eenheid : fl (femtoliter) referentiwaarden: 7 11 tot 9 13 fl (instrumentgebonden) 41

41 Hoofdprincipes: impedantie & PLT indices berekend (MPV) 42

42 Hoofdprincipes colorimetrie gemeten hemoglobine impedantie gemeten RBC, PLT, (WBC + 3-diff), Hct* berekend MCV*, MCH, MCHC, RDW, MPV lichtverstrooiing & fluorescentie lichtverstrooiing & conductiviteit Bijkomende principes cytochemie specifieke lyse hoogfrequent wisselstroom depolarizatie verstrooid licht * Afhankelijk van type toestel 43

44 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing ~ flow cytometrie = meting in een flow verstrooiing/afbuiging van licht/laserstraal cellen in oplossing komen door een flow cell mbv hydrodynamische focussering laserstraal (coherent, monochromatisch) voorwaartse lichtverstrooiing ~ cel volume/grootte zijwaartse lichtverstrooiing ~ interne structuur (granulen, kernvorm) 45

45 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing Voorwaartse lichtverstrooiing Bron: Thesis C. Motmans KH LIM 46

46 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing Meting voorwaartse lichtverstrooiing Bron: Thesis C. Motmans KH LIM 47

47 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing Intensiteit van verstrooid licht wordt omgezet in spanning Bron: Thesis C. Motmans KH LIM 48

48 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing Grootte van de spanning ~ grootte van de cel Bron: Thesis C. Motmans KH LIM 49

49 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing Zijwaartse lichtverstrooiing, hoe meer verstrooiing, hoe meer granulatie Bron: Thesis C. Motmans KH LIM 50

50 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing Bron: Thesis C. Motmans KH LIM 51

51 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie fluorescentie flow cytometrie reagens 1: verlaging oppervlaktespanning, lysis RBC en PLT en perforatie WBC reagens 2: polymethine kleurstof dringt geperforeerde WBC binnen kleuring DNA/RNA supravitale kleuring informatie over: celvolume, intracellulaire componenten celactiviteit (delingsvermogen van de kern, DNA) cytoplasma-activiteit (eiwitsynthese, RNA) 52

52 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie fluorescentie flow cytometrie na kleuring detectie door laser ( flow cell ) hydrodynamische focusering om cellen 1 voor 1 te laten passeren de emissie van licht op de fluorescerende WBC productie licht met langere golflengte dan het originele licht intensiteit van fluorescerende licht stijgt met hogere concentratie van de kleuring 53

53 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie 54

54 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie wat is speciaal aan fluorescentie flow cytometrie? polymetine kleurt DNA/RNA = supravitale kleuring ook RNA wordt gekleurd (cytoplasma informatie) dus niet alleen informatie over celvolume (voorwaartse verstrooiing) intracellulaire componenten, nucleus en granulae... (zijwaartse verstrooiing) maar ook informatie over de celactiviteit duplicatie activiteit van de kern (hoog DNA) cytoplasma-activiteit (proteïne synthese, hoog RNA) 4-delige differentiatie!! 55

55 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie Bron: Sysmex Be/Nl 56

57 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie 4-delige differentiatie (= 4-diff kanaal) reagens 1: verlaging oppervlaktespanning, lysis RBC en PLT en perforatie WBC reagens 2: polymethine kleurstof kleuring RNA/DNA Bron: Sysmex Be/Nl 58

58 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie 4-delige differentiatie (= 4-diff kanaal) reagens 1: verlaging oppervlaktespanning, lysis RBC en PLT en perforatie WBC reagens 2: polymethine kleurstof kleuring RNA/DNA Bron: Sysmex Be/Nl 59

59 Bron: Sysmex Be/Nl Automatische celtellingen Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie 4-delige differentiatie (= 4-diff kanaal) reagens 1: verlaging oppervlaktespanning, lysis RBC en PLT en perforatie WBC reagens 2: polymethine kleurstof kleuring RNA/DNA scattergram 60

60 Bron: Sysmex Be/Nl Automatische celtellingen Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie 4-delige differentiatie (= 4-diff kanaal) reagens 1: verlaging oppervlaktespanning, lysis RBC en PLT en perforatie WBC reagens 2: polymethine kleurstof kleuring RNA/DNA scattergram 61

61 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie 4-delige differentiatie (= 4-diff kanaal) reagens 1: verlaging oppervlaktespanning, lysis RBC en PLT en perforatie WBC reagens 2: polymethine kleurstof kleuring RNA/DNA normaal scattergram abnormaal scattergram Bron: Sysmex Be/Nl 62

62 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & ACAS ACAS = Adaptive Cluster Analysis System Bron: Sysmex Be/Nl 63

63 Bron: Sysmex Be/Nl Automatische celtellingen Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & ACAS ACAS = Adaptive Cluster Analysis System herkenning van de centrale positie van elke WBC populatie berekening van lokatie en waarschijnljkheid van elk dal tussen celpopulaties celpopulaties weergeven als wolken in scattergram voor elk monster berekening van discriminatoren tussen elke individuele populatie 64

64 Bron: Sysmex Be/Nl Automatische celtellingen Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & ACAS ACAS = Adaptive Cluster Analysis System a. centroïden eerste en initiële centroïden beschikbaar start positie van centroïden werd bepaald uit duizenden monsters deze waarden als start positie voor cluster analyse 65

65 Bron: Sysmex Be/Nl Automatische celtellingen Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & ACAS ACAS = Adaptive Cluster Analysis System b. Mahalanobis afstand cel gedetecteerd berekening afstand tussen signaal en aangegeven centroïde deze afstand geeft aan tot welke populatie het signaal behoort 66

66 Bron: Sysmex Be/Nl Automatische celtellingen Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & ACAS ACAS = Adaptive Cluster Analysis System c. vorming van celpopulaties signaal identificatie en nieuwe bepaling van centroïden dit proces wordt uitgevoerd met 500 celsignalen telkens worden centroïden voor lymfocyten, monocyten en granulocyten herberekend 67

67 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & ACAS ACAS = Adaptive Cluster Analysis System - procedure 1. analyse eerste 500 signalen met verplaatsbare centroïden 2. bepaling clusters lymfocyten, monocyten, granulocyten en ghost door analyse van 1000 signalen 3. herhaling stap 1 en 2 tot de waarden stabiel blijven centroïden vaste positie 4. indien geen stabilisatie: geen scheiding van WBC 5. Adaptive Cluster Analysis System wordt uitgevoerd voor alle WBC 6. resultaat: zeer nauwkeurige differentiatie in vgl met manuele microscopie 7. conclusie: goede differentiatie, zelfs voor pathologische en/of oudere monsters (48u) 68

68 Hoofdprincipes colorimetrie impedantie lichtverstrooiing & fluorescentie (vervolg) lichtverstrooiing & conductiviteit Bijkomende principes cytochemie specifieke lyse hoogfrequent wisselstroom depolarizatie verstrooid licht dr. apr. D. Kieffer 69

69 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie NRBC bepaling lyse RBC reagens: WBC doorlaatbaar maken kernen NRBC blijven intact SFL/FSC automatische correctie WBC Bron: Sysmex Be/Nl 70

70 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie RET bepaling perforatie membranen RBC en WBC fluorochroom (polymethine, RNA) hydrodynamische focussering SFL/FSC fluorescentie negatief: RBC (geen RNA) toenemende SFL: RET kleine FSC/SFL: PLT maturiteit (hoeveelheid RNA): LFR (Low Fluorescence Rate) MFR (Medium Fluorescence Rate) HFR (High Fluorescence Rate IRF (Immature Reticulocyte Fraction): (MFR + HFR) / (LFR + MFR + HFR) Bron: Sysmex Be/Nl Fe-therapie/EPO/BM-transplantatie 71

71 Advanced training Sysmex XE-5000 Meet- en detectieprincipes Marc De Schinckel Academy-Senior Product Specialist Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie Reticulocyten kanaal RET bepaling dr. apr. D. Kieffer Bron: Sysmex Be/Nl

72 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie RET bepaling geautomatiseerde erythropoïese Bron: Sysmex Be/Nl dr. apr. D. Kieffer 73

73 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie RET bepaling geautomatiseerde erythropoïese (Ret-He) dr. apr. D. Kieffer Bron: Sysmex Be/Nl 74

74 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie RET bepaling optische meting PLT & immature PLT fractie (IPF) perforatie membranen RBC en WBC fluorochroom (polymethine, RNA) hydrodynamische focussering SFL/FSC fluorescentie negatief: RBC (geen RNA) toenemende SFL: RET kleine FSC/SFL: PLT optische meting PLT IPF : hogere RNA-inhoud DD/ thrombopenie BM transplantatie Bron: Sysmex Be/Nl 75

75 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie RET bepaling optische meting PLT & immature PLT fractie (IPF) perforatie membranen RBC en WBC fluorochroom (polymethine, RNA) hydrodynamische focussering SFL/FSC fluorescentie negatief: RBC (geen RNA) toenemende SFL: RET kleine FSC/SFL: PLT optische meting PLT IPF : hogere RNA-inhoud DD/ thrombopenie BM transplantatie Bron: Sysmex Be/Nl 76

77 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & fluorescentie RET bepaling optische meting PLT & immature PLT fractie (IPF) klinische bruikbaarheid IPF onderscheid oorzaken thrombopenie toegenomen vernietiging/verbruik: hoog IPF afgenomen productie: laaf IPF dr. apr. D. Kieffer 78

78 Hoofdprincipes colorimetrie impedantie lichtverstrooiing & fluorescentie lichtverstrooiing & conductiviteit Bijkomende principes cytochemie specifieke lyse hoogfrequent wisselstroom depolarizatie verstrooid licht dr. apr. D. Kieffer 79

79 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & conductiviteit A differential cell count is obtained through VCS Technology by the interrogation of 8162 cells using the 3 separate and simultaneous probes: - Direct Current, - Radio Frequency Alternating Current - Laser Light Scatter The value of each of these measurements positions it within the three-dimensional array we term the 3D Dataplot. dr. apr. D. Kieffer 80

80 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & conductiviteit dr. apr. D. Kieffer A differential cell count is obtained through VCS Technology by the interrogation of 8162 cells using the 3 separate and simultaneous probes: - Direct Current (impedantie) - cel volume - RF electromagnetic current (conductiviteit) - interne structuur van de cel - opaciteit - Laser Light Scatter (voorwaartse lichtverstrooiing ) - vorm - reflectie - structuur - rotated light scatter 81

81 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & conductiviteit volume vs discriminant functions (2D-plots): dr. apr. D. Kieffer - volume vs light scatter - neutro - eo - mono - lymfo + baso - volume vs conductiviteit - lymfo - mono - granulo - volume vs gating out neutro + eo - baso - lymfo - mono 82

82 volume Automatische celtellingen Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & conductiviteit volume vs discriminant functions (2D-plots): DF1 - volume vs light scatter (DF1) - neutro - eo - mono - lymfo + baso - volume vs conductiviteit (DF2) - lymfo - mono - granulo - volume vs gating out neutro/eo (DF3) - baso - lymfo - mono 83

83 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & conductiviteit 3D-plot: Cell location and color coding: Lymphocytes (normal and many of the abnormals) are colored in Blue Monocytes (normal and many of the abnormals) are colored in Green. Neutrophil population (normal and many of the abnormals) are colored in Violet. Eosinophils (normal and many of the abnormals) are colored in Orange. Basophils (normal and many of the abnormals) are colored in White/Gray. dr. apr. D. Kieffer 84

84 Hoofdprincipes: lichtverstrooiing & conductiviteit dr. apr. D. Kieffer 85

85 Hoofdprincipes colorimetrie impedantie lichtverstrooiing fluorescentie Bijkomende principes cytochemie specifieke lyse hoogfrequent wisselstroom depolarizatie verstrooid licht dr. apr. D. Kieffer 86

86 Bijkomende principes: cytochemie Advia Siemens: - WBC differentiatie gebaseerd op peroxidase kanaal (mono, neutro, eo: peroxidase + 4-chloro-1-naphtol) mono, lymfo + baso, neutro en eo baso/lobulariteit kanaal (na zure lyse) baso dr. apr. D. Kieffer 87

88 Bijkomende principes: specifieke lyse + diff-kanaal = 5-delige (volledige differentiatie)! dr. apr. D. Kieffer Bron: Sysmex Be/Nl 89

89 Bijkomende principes: specifieke lyse Bron: Sysmex Be/Nl dr. apr. D. Kieffer 90

90 Bijkomende principes: specifieke lyse Bron: Sysmex Be/Nl 91

91 Bijkomende principes: specifieke lyse + diff-kanaal = 5-delige (volledige differentiatie)! Bron: Sysmex Be/Nl 92

92 Bijkomende principes: specifieke lyse dr. apr. D. Kieffer Bron: Sysmex Be/Nl 93

93 Hoofdprincipes colorimetrie impedantie lichtverstrooiing fluorescentie Bijkomende principes cytochemie specifieke lyse hoogfrequent wisselstroom eigenlijk ook hoofdprincipe! depolarizatie verstrooid licht dr. apr. D. Kieffer 94

94 Bijkomende principes:hoogfrequent wisselstroom RF/DC-methode ~ VCS Coulter RF ( impedance) dr. apr. D. Kieffer 95

95 Bijkomende principes:hoogfrequent wisselstroom IMI-kanaal dr. apr. D. Kieffer 96

97 Bijkomende principes: depolarizatie verstrooid licht dr. apr. D. Kieffer 98

98 Bijkomende principes: depolarizatie verstrooid licht dr. apr. D. Kieffer 99

99 SYSMEX: samenvatting verschillende kanalen dr. apr. D. Kieffer 100

100 ecificaties Automatische celtellingen Bron: Sysmex Be/Nl SYSMEX: verschillende kanalen samenvatting dr. apr. D. Kieffer 101

101 Advanced training Sysmex XE-5000 Meet- en detectieprincipes Marc De Schinckel Academy-Senior Product Specialist Specificaties SYSMEX: verschillende kanalen samenvatting detector methode, dilutie parameters HGB SLS-methode, fotometrie 1:500 HGB MCH, MCHC RBC/PLTdetector HDF/ DCdetectie methode impulse sommatie 1:500 RBC, HCT, PLT-I, MCV, RDW-SD, RDW-CV, PDW, MPV, P-LCR, PCT Bron: Sysmex Be/Nl

102 Advanced training Sysmex XE-5000 Meet- en detectieprincipes Marc De Schinckel Academy-Senior Product Specialist SYSMEX: verschillende kanalen samenvatting Specificaties A detector methode, dilutie parameters WBC / BASO Flowcytometrie diode laser - 1:50 WBC, B SO # BASO % 4 DIFF Flowcytometrie diode laser - 1:51 LYMPH #, LYMPH %, MONO#, MONO %, EO #, EO%, NEUT+BASO% NEUT+BASO# IG#, IG% Bron: Sysmex Be/Nl dr. apr. D. Kieffer 103

103 Advanced training Sysmex XE-5000 Meet- en detectieprincipes Marc De Schinckel Academy-Senior Product Specialist SYSMEX: verschillende kanalen samenvatting Specificaties detector methode, dilutie parameters NRBC Flowcytometrie diode laser - 1:51 NRBC # NRBC % IMI RF/DC detectie methode - 1:250 IMI #, HPC #, HPC % Bron: Sysmex Be/Nl dr. apr. D. Kieffer 104

104 Advanced training Sysmex XE-5000 Meet- en detectieprincipes Marc De Schinckel Academy-Senior Product Specialist Specificaties SYSMEX: verschillende kanalen samenvatting detector methode, dilutie parameters RET / PLT-O Flowcytometrie diode laser 1:204 RET #, RET %, PLT-O HFR, MFR, LFR, IRF, Ret-He, IPF% Bron: Sysmex Be/Nl dr. apr. D. Kieffer

105 Automatisatie: voor- en nadelen Microscoop pro: kwalitatief: alle cellen geïdentificeerd contra: kwantitatief: statistisch onnauwkeurig contra: trage analyse, één voor één contra: expertise noodzakelijk (duur?) Automaat contra: kwalitatief: alle cellen in 5 populaties pro: kwantitatief: statistisch nauwkeurig pro: snelle analyse pro: verwerking meerdere stalen pro: moduleerbaarheid dr. apr. D. Kieffer 106

106 Automatisatie: voor- en nadelen: statistiek dr. apr. D. Kieffer 107

107 dr. apr. D. Kieffer 108

108 Automatisatie: voor- en nadelen: moduleerbaarheid voorbeeld: BC 2 DXH s (celtellers) en SMS (uitstrijktoestel) dr. apr. D. Kieffer 109

109 Automatisatie: voor- en nadelen: moduleerbaarheid voorbeeld: 2x Sysmex XE-2100 en 2x uitstrijktoestellen dr. apr. D. Kieffer 110

110 Automatisatie: voor- en nadelen: moduleerbaarheid voorbeeld: BC SMS (uitstrijktoestel) dr. apr. D. Kieffer 111

111 Praktisch voorbeeld Automatische celtellingen dr. apr. D. Kieffer 112

119 Automatisatie: efficiëntie CBC (complete blood count) + diffferentiatie + reticulocyten uitstrijktoestel + automatische kleuring moduleerbaarheid (koppeling verschillende toestellen) reflex testing staal opnieuw of met extra analyse link met microscopie dr. apr. D. Kieffer 120

120 Automatisatie: efficiëntie link met microscopie: manuele of automatische microscopie dr. apr. D. Kieffer 121