RAPPORT RINGONDERZOEK ANTIBIOTICA

Transcriptie

1 Instituut voor Landbouw en Visserijonderzoek Wetenschappelijke instelling Landbouw en Visserij Technologie & Voeding Brusselsesteenweg 370, 9090 Melle, België tel fax T&VBU@ilvo.vlaanderen.be RAPPORT RINGONDERZOEK ANTIBIOTICA MICROBIOLOGISCHE TESTEN Delvotest SPNT, Delvotest T & CMT Milk Test SNELTESTEN Charm MRL(BL3) Test, SNAP BetaLactam (ST) & ßetas.t.a.r. Charm MRLBL1 Test (in validatie) Quinosensor (in validatie) Charm MRLBLRFTET2 Test (in validatie) 25 APRIL 2013 S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Melle

2 2 Inleiding In het kader van de autocontrole door de zuivelbedrijven van de gecollecteerde melk op antibiotica werd op 25 april 2013 een ringonderzoek georganiseerd door het ILVOT&V betreffende de microbiologische testen Delvotest SPNT, Delvotest T en CMT Milk Test en de sneltesten Charm MRL Test, Charm MRLBL3 Test, SNAP ßlactam, SNAP ßlactam ST en βetas.t.a.r. (25/100). In het kader van een validatiestudie werd door het ILVOT&V ook deelgenomen met de ßlactam sneltest Charm MRLBL1 Test (Charm Sciences Inc, USA) en de combo sneltest Charm MRLBLRFTET2 Test (Charm Sciences Inc., USA), alsook met de sneltest Quinosensor (Unisensor s.a., Wandre). De zuivelbedrijven werden schriftelijk uitgenodigd om deel te nemen aan dit ringonderzoek. Volgende labo s, gerangschikt in alfabetische volgorde, hebben deelgenomen aan dit ringonderzoek. Arla Foods Deutschland GmbH Belgomilk CVBA, site Kallo Belgomilk, site Langemark Belgomilk, site Moorslede Danone Danone Hombourg Récolte Fabrelac bvba FrieslandCampina Belgium NV, buitendienst FrieslandCampina Belgium NV, site Aalter FrieslandCampina Belgium NV, site Sleidinge Fromunion Kaasmakerij Passendale Inex NV Inza Laboratorium Douane & Accijnzen Laiterie de Walhorn LDACoop Limelco NV MIK NV Olympia Solarec SA S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

3 3 1 Verloop ringonderzoek en identificatie monsters Op het ILVOT&V werden twee sets van 8 blind gecodeerde ringmonsters aangemaakt: een eerste set voor de microbiologische testen (codes M1 t.e.m. t.e.m. M160, overeenkomstig de universele codes A t.e.m. H) en een tweede set voor de sneltesten (codes S1 t.e.m. S192), overeenkomstig de universele codes I t.e.m. P). Voor de codering van de individuele M en Smonsters wordt verwezen naar Bijlage 1. Bij de keuze van de verbindingen werd rekening gehouden met de actieve stoffen van diergeneesmiddelen die in België geregistreerd zijn [1]; bij de keuze van de concentratie werd, in de mate van het mogelijke, rekening gehouden met de MRLwetgeving [2]. De identificatie van de ringmonsters wordt hieronder in detail weergegeven. Identificatie ringmonsters microbiologische testen Ringmonster Gedopeerd antibioticum of chemotherapeuticum Concentratie (µg/kg of ppb) MRL (µg/kg of ppb) A Ceftiofur desfuroylceftiofur resp * B Enrofloxacine C Cloxacilline D Nafcilline E Benzylpenicilline 3 4 F Sulfadoxine G Oxytetracycline H Cefquinome * som van ceftiofur en metaboliet desfuroylceftiofur Identificatie ringmonsters sneltesten Ringmonster Gedopeerd antibioticum of chemotherapeuticum Concentratie (µg/kg of ppb) MRL (µg/kg of ppb) I Oxytetracycline J Cefquinome K Ceftiofur desfuroylceftiofur resp * L Nafcilline M Benzylpenicilline 4 4 N Benzylpenicilline 3 4 O Enrofloxacine P Cloxacilline * som van ceftiofur en metaboliet desfuroylceftiofur S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

4 4 De ringmonsters werden op 23 april bereid en getest op het ILVOT&V en op droogijs verzonden via DHL. De aankomst van de stalen was voorzien op 24 april (dag 1 service, levering vóór 12u). Aan de bedrijven werd gevraagd om de ringmonsters bij ontvangst te bewaren in de koelkast en om de analyses uit te voeren op 25 april. Vermits een aantal zuivelbedrijven niet langer registreren wanneer de analyses precies werden uitgevoerd, kon niet nagegaan worden of de analyses wel degelijk op de afgesproken datum werden uitgevoerd. Niet alle bedrijven voerden de analyses uit op de afgesproken dag. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

5 5 2 Delvotest SPNT & Delvotest T 2.1 Inleiding Vier zuivelbedrijven namen deel met de Delvotest SPNT en meer bepaald met de Delvotest SP (MINI)NT (versie in ampullen). Tien zuivelbedrijven namen deel met de Delvotest T, waarvan negen bedrijven met de Delvotest T (MINI) (versie in ampullen) en één met de Delvotest T 5 Pack (versie in microtiterplaten). De validatie van de Delvotest T 5 Pack is nog lopende. Momenteel is enkel door het ILVOT&V bevestigd dat de Delvotest T voldoet aan de voorwaarden voor de erkenning van de remstoffentest voor de screening van antibiotica en chemotherapeutica in rauwe melk gebruikt door de Interprofessionele Organismen, zoals vooropgesteld door het FAVV [3] en werden nog geen echte testgevoeligheden bepaald. Aan de deelnemers werd gevraagd om het type test en het type incubator (blockheater (BH), waterbad (WB) of oven (O)) aan te duiden en het lotnummer, de vervaldatum, de incubatieduur en temperatuur te noteren. De temperatuur aanbevolen door het ILVOT&V voor incubatie van de ampullen en de microtiterplaten van de Delvotest bedraagt 64±0,5 C; door DSM Food Specialties wordt een incubatietemperatuur van 64±2 C toegelaten. Door DSM Food Specialties wordt aanbevolen om de ampullen en de platen af te lezen op 3u of op controletijd [4 & 5]. Door het ILVOT&V wordt een incubatieduur van 3u aanbevolen voor de ampullen van de Delvotest SPNT en de Delvotest T, alsook voor de Delvotest T microtiterplaten. De platen van de Delvotest SP NT worden op het ILVOT&V afgelezen op controletijd. Nr. labo 2.2 Resultaten Visuele aflezing Instrumentele aflezing: Zwaarde interpretatie Lotnummer A B C D E F G H A B C D E F G H S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax vervaldatum (type incubator: BH, WB of O) Delvotest SP (MINI)NT ILVO 10,67 16,07 13,07 14,21 13,31 9,22 15,22 17,83 12L17/1117/12/13 (BH) T&V () () () () () () () () 4 12J18/1118/10/13 (O) 12 12J03/1003/10/13 (BH) 16 13D12/8512/02/14 (WB, 2u50min) 19 12G04/1004/07/13 (BH) Delvotest SP 5 PACKNT ILVO T&V * 11,52 5,72 14,94 16,39 16,45 0,76 2,62 6,51 12K27B2127/11/13 (WB, 2u30min)

6 6 Nr. labo Visuele aflezing Instrumentele aflezing: Zwaarde interpretatie Lotnummer A B C D E F G H A B C D E F G H vervaldatum (type incubator: BH, WB of O) Delvotest T (MINI) ILVO 11,58 14,35 12,66 13,00 12,81 3,31 2,93 12,03 13B26/3126/02/14 (BH) T&V () () () () () () () () 2 12I04/3104/12/13 (BH) 5 12L04/3104/12/13 (BH) 10 12F18A3118/06/13 (BH, 65 C) 13 12J08/3108/10/13 (WB, 2u45min) 15? (?, 3u15min) 16 * * 13B26/3126/02/14 (WB, 2u50min) 17 verschillende lotnummers (BH) 17 verschillende lotnummers (BH) 20 12K12/3112/11/13 (BH) Delvotest T 5 Pack ILVO 8,70 6,26 10,46 11,71 9,75 2,03 1,36 8,62 13B26B3026/02/14 (WB) T&V 7 13B26A3026/02/14 (WB) De door het ILVOT&V vooropgestelde cutoff Zwaarde voor de interpretatie van de Delvotest SP 5 PACK NT en de Delvotest T 5 Pack bedraagt 3,00. Melkmonsters die bij instrumentele aflezing een numerieke waarde geven 3,00 worden als positief beschouwd. *: randgeval Labo 17 analyseerde stalen M121 t.e.m. M128; stalen M129 t.e.m. M136 werden geanalyseerd door labo Bespreking Ringmonster A was rauwe melk gedopeerd met 50 ppb ceftiofur (testgevoeligheid Delvotest SP 5 PACKNT: 50 ppb resp. Delvotest T 5 Pack: 100 ppb validatiestudies ILVOT&V) én 50 ppb desfuroylceftiofur (testgevoeligheid Delvotest SP 5 PACKNT: 60 ppb; testgevoeligheid S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

7 7 Delvotest T 5 Pack: 100 ppb validatiestudies ILVOT&V), een combinatie waarvan verwacht wordt dat deze positief zal tekenen met de Delvotest. Dit staal werd door alle laboratoria unaniem als positief geanalyseerd met beide Delvotesten. Ringmonster B was gedopeerd met 100 ppb enrofloxacine, een verbinding die niet of weinig gevoelig gedetecteerd wordt met de Delvotest. Dit staal werd unaniem door alle laboratoria als negatief geanalyseerd met beide Delvotesten. M.a.w. er zijn geen valspositieve resultaten voor dit ringmonster. Ringmonster C was gedopeerd met 30 ppb cloxacilline (testgevoeligheid Delvotest SP 5 PACKNT: 15 ppb resp. Delvotest T 5 Pack: 30 ppb validatiestudies ILVOT&V). Dit staal werd unaniem door alle laboratoria positief bevonden met beide Delvotesten. Ringmonster D was rauwe melk gedopeerd met 30 ppb nafcilline (testgevoeligheid Delvotest SP 5 PACKNT: 15 ppb resp. Delvotest T 5 Pack: 30 ppb validatiestudies ILVOT&V). Dit staal werd unaniem door alle laboratoria als positief gerapporteerd met beide Delvotesten. Ringmonster E was gedopeerd met 3 ppb benzylpenicilline (testgevoeligheid Delvotest SP 5 PACKNT: 2 ppb resp. Delvotest T 5 Pack: 2 ppb validatiestudies ILVOT&V). Dit staal werd unaniem door alle laboratoria als positief gerapporteerd met beide Delvotesten. Ringmonster F was gedopeerd met 100 ppb sulfadoxine (testgevoeligheid Delvotest SP 5 PACKNT: 80 ppb resp. Delvotest T 5 Pack: 100 ppb validatiestudies ILVOT&V). Met de Delvotest SP(MINI)NT werd dit staal door de meeste laboratoria als negatief geanalyseerd; enkel labo 19 analyseerde het staal als positief. Uit de Zwaarde bekomen door het ILVOT&V met de Delvotest SPNT (9,22) blijkt dat dit staal geen randgeval betreft. Vermits door de kitfabrikant voor sulfadoxine slechts een testgevoeligheid van 300 ppb geclaimd wordt met de Delvotest SPNT bij een vaste incubatieduur van 3 uur [6], wordt het negatieve resultaat van labo 19 niet beschouwd als een valsnegatief resultaat. Met de Delvotest SP 5 PACKNT, waarbij een kortere incubatieduur gehanteerd wordt, werd dit staal als positief geanalyseerd door het ILVOT&V (Zwaarde: 0,76). Met de Delvotest T (MINI) werd dit staal door het ILVOT&V, labo s 2, 10, 13, 16, 17 en 17 als (randgeval) positief geanalyseerd. Labo s 5, 15 en 20 rapporteerden dit staal als negatief. Uit de Zwaarde bekomen door het ILVOT&V met de Delvotest T (3,31) blijkt niet onmiddellijk dat dit staal een randgeval betreft. Vermits de testgevoeligheid van de Delvotest T voor sulfadoxine bij een vaste incubatieduur van 3 uur (nog) niet exact gekend is door de kitfabrikant, kan nog geen uitspraak gedaan worden of de resultaten bekomen door labo s 5, 15 en 20 voor ringmonster F al dan niet echte valsnegatieve resultaten zijn. In elk geval wordt door deze labo s sulfadoxine niet aangetoond op MRL. De te lange incubatie van de ampullen door labo 15 zal zeker bijgedragen hebben tot dit (vals)negatieve resultaat en dus het niet detecteren van sulfadoxine op MRL. Met de Delvotest T 5 Pack werd dit staal als positief gerapporteerd door labo 7 en het ILVOT&V (Zwaarde: 2,03). Ringmonster G was gedopeerd met 100 ppb oxytetracycline (testgevoeligheid Delvotest SP 5 PACKNT: 250 ppb resp. Delvotest T 5 Pack: 100 ppb validatiestudies ILVOT&V). Met de Delvotest SP(MINI)NT werd dit staal door alle laboratoria als negatief gerapporteerd (Zwaarde: 15,22). Met de Delvotest SP 5 PACKNT, waarbij een kortere incubatieduur gehanteerd wordt, werd dit staal als randgeval positief geanalyseerd door het ILVOT&V (Zwaarde: 2,62). Met de Delvotest T (MINI), de verbeterde versie van de Delvotest voor de opsporing van tetracyclines, werd dit staal, met uitzondering van labo s 15, 16 en 20, door alle overige laboratoria als positief gerapporteerd. Uit de Zwaarde bekomen door het ILVOT&V met de Delvotest T (MINI) (2,93) S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

8 8 blijkt niet onmiddellijk dat dit staal een randgeval betreft. Vermits ook door de kitfabrikant voor oxytetracycline een testgevoeligheid van 100 ppb geclaimd wordt met de Delvotest T (MINI) bij een vaste incubatieduur van 3 uur [7], worden de negatieve resultaten van labo s 15, 16 en 20 beschouwd als valsnegatieve resultaten. De te lange incubatie van de ampullen door labo 15 heeft zeker bijgedragen tot dit valsnegatieve resultaat. Met de Delvotest T 5 Pack werd dit staal als positief gerapporteerd door labo 7 en het ILVOT&V (Zwaarde: 1,36). Ringmonster H was een rauw melkmonster gedopeerd met 20 ppb cefquinome, een cefalosporine die niet gevoelig wordt opgespoord met de Delvotest. Dit staal werd door alle laboratoria unaniem als negatief geanalyseerd met beide Delvotesten. M.a.w. er zijn geen valspositieve resultaten voor dit ringmonster. 2.4 Besluit De resultaten van de Delvotest SPNT zijn goed en in overeenstemming met wat men theoretisch (gebaseerd op de testgevoeligheid zoals destijds bekomen met de Delvotest SP 5PACK NT) zou verwachten. Merk op dat 100 ppb oxytetracycline (ringmonster G) en, op één uitzondering na, 100 ppb sulfadoxine (ringmonster F) wel worden opgespoord met de Delvotest SP 5PACKNT (2u30min incubatie) en niet met de Delvotest SPNT (3u incubatie). Er zijn geen valspositieve resultaten met de Delvotest SPNT. Met uitzondering van de valsnegatieve resultaten bekomen door labo s 15, 16 en 20 met de Delvotest T voor ringmonster G (100 ppb oxytetracycline) zijn de overige resultaten goed en in overeenstemming met wat men theoretisch (gebaseerd op het detectievermogen van de Delvotest T op MRL) zou verwachten. Vermits de testgevoeligheid van de Delvotest T voor sulfadoxine bij een vaste incubatieduur van 3 uur (nog) niet exact gekend is door de kitfabrikant, kan nog geen uitspraak gedaan worden of de resultaten bekomen door labo s 5, 15 en 20 voor ringmonster F (100 ppb sulfadoxine) al dan niet als valsnegatieve resultaten mogen beschouwd worden. De te lange incubatie van de ampullen door labo 15 zal zeker bijgedragen hebben tot deze (vals)negatieve resultaten. Er zijn geen valspositieve resultaten met de Delvotest T. Met de Delvotest T worden meer positieve resultaten bekomen dan met de Delvotest SPNT en dit niet alleen voor het monster gedopeerd met 100 ppb oxytetracycline maar ook voor het monster belast met 100 ppb sulfadoxine. Zowel met de Delvotest SPNT als met de Delvotest T worden cefquinome en enrofloxacine niet op MRL opgespoord. De incubatietemperatuur van 64±0,5 C, zoals vooropgesteld door het ILVOT&V, werd niet gerespecteerd door labo 10 (65 C). Vermits door DSM een incubatietemperatuur van 64±2 C wordt vooropgesteld, zal hier niet verder op in gegaan worden. De incubatieduur van 3u±5minuten, zoals vooropgesteld door het ILVOT&V, werd niet gerespecteerd door labo s 13 (2u45min), 15 (3u15min) en 16 (2u50min). Vermits door DSM een incubatieduur van 3 uur of aflezing op controletijd wordt vooropgesteld, kan enkel de incubatieduur van labo 15 (3u15minuten) als afwijkend beschouwd worden. Deze afwijking heeft zeker bijgedragen tot de (vals)negatieve resultaten bekomen door labo 15 voor ringmonsters G en F. Ditzelfde labo 15 nam opnieuw niet de moeite om het lotnummer van de gebruikte reagentia en de incubatietemperatuur te vermelden. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

9 9 3 CMT Milk Test 3.1 Inleiding Van de zes CMTgebruikers namen alle zuivelbedrijven deel met de CMT Milk Test Single Test (versie in ampullen); geen enkel bedrijf nam deel met de CMT Milk Test Microplate (versie in microtiterplaten). Aan de deelnemers met de CMT Milk Test werd gevraagd om de cupjes visueel alsook, indien mogelijk, met behulp van een vlakbedscanner af te lezen. Er werd hen eveneens gevraagd om het type test en het type incubator (blockheater (BH) of waterbad (WB)) aan te duiden en het lotnummer, de vervaldatum, de incubatieduur en temperatuur en, indien van toepassing, de softwareversie van de CScan te noteren. 3.2 Resultaten Nr. Visuele aflezing Instrumentele aflezing: CIFwaarde interpretatie Lotnr. vervaldatum (type incubator: BH of labo A B C D E F G H A B C D E F G H WB) CMT Milk Test Single Test (aanbevolen incubatieduur ILVOT&V: 3u) ILVO 5,3 0,4 7,3 9,2 7,4 0,8 0,3 0,5 3C01AU6A01/03/14 T&V () () () () () () () () (BH) 3 4,2 0,2 6,0 6,7 5,1 0,4 0,3 0,2 3C01A1601/03/14 (BH, 64,7 C) 6 5,6 0,2 7,2 8,4 7,0 0,9 0,2 0,3 3C01A26C01/03/14 (BH) 8 6,9 2,4 9,4 8,9 8,4 3,9 1,4 2,7 2W16A46C16/11/13 (BH) 9 2xo7a167/12/13 (BH) 14 4,9 0,4 6,1 6,3 5,3 0,8 0,7 0,5 2W30AW6C30/11/13 (BH) 18 5,3 0,9 6,1 6,4 5,3 1,1 1,0 1,0 2X07AU6C7/12/13 (BH) CMT Milk Test Microplate (aanbevolen incubatieduur ILVOT&V: 2u55min) ILVO 7,2 2,0 9,4 10,0 9,5 5,2 1,9 1,1 2K05A1705/05/13 (WB) T&V S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

10 10 De bedrijven die de resultaten van de instrumentele aflezing van de CMT Milk Test interpreteerden, hanteerden hierbij de cutoff CIFwaarde van 4,5, vastgelegd door het ILVOT&V voor microtiterplaten. Melkmonsters die bij instrumentele aflezing een numerieke waarde geven 4,5 worden als positief beschouwd. 3.3 Bespreking Ringmonster A was gedopeerd met 50 ppb ceftiofur (testgevoeligheid Copan Milk Test Microplate: 60 ppb validatiestudie ILVOT&V) en 50 ppb desfuroylceftiofur (testgevoeligheid Copan Milk Test Microplate: 100 ppb validatiestudie ILVOT&V), een combinatie waarvan verwacht wordt dat deze positief zal tekenen met de CMT Milk test. Met uitzondering van labo 3 die dit staal als negatief analyseerde, werd dit staal door de overige laboratoria als positief gerapporteerd met de CMT Milk Test. Uit de CIFwaarden blijkt duidelijk dat dit staal een randgeval betreft. Door de kitfabrikant wordt voor ceftiofur een testgevoeligheid van 50 à 100 ppb geclaimd bij een vaste incubatieduur van 3 uur [9]. Vermits de testgevoeligheid van de CMT Milk Test voor desfuroylceftiofur bij een vaste incubatieduur van 3 uur niet exact gekend is door de kitfabrikant, kan geen uitspraak gedaan worden of het resultaat bekomen door labo 3 voor ringmonster A al dan niet een valsnegatief resultaat is. De afwijkende incubatietemperatuur (64,7 C) gehanteerd door labo 3 kan zeker niet bijgedragen hebben tot dit (vals)negatieve resultaat, integendeel. Ringmonster B was rauwe melk gedopeerd met 100 ppb enrofloxacine, een verbinding die niet of weinig gevoelig wordt opgespoord met de CMT Milk Test. Dit staal werd unaniem door alle laboratoria als negatief geanalyseerd. M.a.w. er zijn geen valspositieve resultaten voor dit ringmonster. Door labo 8 wordt voor dit ringmonster een te hoge CIFwaarde (2,4) bekomen met de CMT Milk Test Single Test. Ringmonster C was gedopeerde rauwe melk met 30 ppb cloxacilline (testgevoeligheid Copan Milk Test Microplate: 25 ppb validatiestudie ILVO T&V) en werd door alle laboratoria unaniem als positief bevonden. Ringmonster D was gedopeerd met 30 ppb nafcilline (testgevoeligheid Copan Milk Test Microplate: 6 ppb validatiestudie ILVOT&V) en werd unaniem door alle laboratoria als positief geanalyseerd. Ringmonster E was gedopeerd met 3 ppb benzylpenicilline (testgevoeligheid Copan Milk Test Microplate: 2,5 ppb validatiestudie ILVOT&V) en werd door alle laboratoria unaniem als positief geanalyseerd. Ringmonster F was gedopeerd met 100 ppb sulfadoxine, een verbinding die net niet op MRL wordt opgespoord met de CMT Milk Test (testgevoeligheid Copan Milk Test Microplate: 150 ppb validatiestudie ILVOT&V). Met de CMT Milk Test Single Test (versie in ampullen) analyseerden alle labo s dit staal als negatief. Door labo 8 wordt voor dit ringmonster een te hoge CIFwaarde (3,9) bekomen met de CMT Milk Test Single Test. Met de CMT Milk Test Microplate (versie in microtiterplaten) werd dit staal door het ILVOT&V als positief geanalyseerd. Uit de CIFwaarde (5,2) blijkt dat dit staal een randgeval betreft. Ook door de kitfabrikant wordt voor sulfadoxine slechts een testgevoeligheid van 100 à 200 ppb geclaimd bij een vaste incubatieduur van 3 uur [9]. Ringmonster G was gedopeerd met 100 ppb oxytetracycline (testgevoeligheid Copan Milk Test Microplate: 300 ppb validatiestudie ILVOT&V) en werd unaniem door alle labo s als negatief geanalyseerd. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

11 11 Ringmonster H was een rauw melkmonster gedopeerd met 20 ppb cefquinome, een cefalosporine die niet gevoelig wordt opgespoord met de CMT Milk Test. Dit staal werd door alle laboratoria unaniem als negatief geanalyseerd met de CMT Milk Test. M.a.w. er zijn geen valspositieve resultaten voor dit ringmonster. Door labo 8 wordt voor dit ringmonster een te hoge CIFwaarde (2,7) bekomen met de CMT Milk Test Single Test. 3.4 Besluit De resultaten van de CMT Milk Test Single Test zijn goed en in overeenstemming met wat men theoretisch (gebaseerd op de testgevoeligheid zoals destijds behaald in de validatiestudie van het ILVOT&V) zou verwachten. Vermits de testgevoeligheid van de CMT Milk Test Single Test voor desfuroylceftiofur bij een vaste incubatieduur van 3 uur niet exact gekend is door de kitfabrikant, kan geen uitspraak gedaan worden of het resultaat bekomen door labo 3 voor ringmonster A (50 ppb ceftiofur 50 ppb desfuroylceftiofur) al dan niet een valsnegatief resultaat is. Er zijn geen valspositieve resultaten met de CMT Milk Test. Met de CMT Milk Test Single Test worden door labo 8 te hoge CIFwaarden bekomen voor de melk gedopeerd met 100 ppb enrofloxacine (ringmonster B), 100 ppb sulfadoxine (ringmonster F) en 20 ppb cefquinome (ringmonster H). Zoals verwacht worden enrofloxacine, oxytetracyline en cefquinome niet op MRL gedetecteerd met de CMT Milk Test. Sulfadoxine wordt niet op MRL opgespoord met de CMT Milk Test Single Test doch wel met lot 2K05A17 van de CMT Milk Test Microplate. De incubatietemperatuur van 64±0,5 C, zowel vooropgesteld door het ILVOT&V als door DSM [8]; werd opnieuw niet gerespecteerd door labo 3 (64,7 C). Merk op dat deze afwijkende temperatuur niet het (vals)negatieve resultaat van labo 3 voor ringmonster A (50 ppb ceftiofur 50 ppb desfuroylceftiofur) kan verklaren. Integendeel, door de wat afwijkende incubatietemperatuur wordt er trager zuur gevormd. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

12 12 4 Charm MRL Test en Charm MRLBL3 Test 4.1 Inleiding Drie zuivelbedrijven namen deel met de Charm MRL Test. Eén bedrijf nam deel met de Charm MRLBL3 Test (= Charm 3MRLBL3 Test), de verbeterde versie van de Charm MRL3 Test. De Charm MRLBL3 Test heeft niet langer een afzonderlijke testlijn voor cloxacilline doch heeft nu één enkele testlijn voor ßlactam antibiotica, hetgeen de visuele aflezing vereenvoudigt. Tevens is de gevoeligheid voor de cloxacillines en een aantal cefalosporines verbeterd in die zien dat deze nu dichter bij MRL worden opgespoord. Tenslotte werd bij de validatie van de Charm MRLBL3 Test een lager percentage valspositieve resultaten bekomen. Aan de deelnemers werd gevraagd om de waarde van de reader op de bijhorende fiche te noteren, alsmede het lotnummer en de vervaldatum van de kit. Tevens werd aan de deelnemers gevraagd om de dipsticks visueel af te lezen. Labo 1 las de resultaten enkel visueel af. Nr. labo 4.2 Resultaten Visuele aflezing Instrumentele aflezing: numerieke waarde resultaat Lotnummer vervaldatum I J K L M N O P I J K L M N O P (Type reader) Charm MRL Test ILVOT&V /2013 (Rosa Reader) / /2013 (Rosa Pearl Reader) /2013 (Rosa Pearl Reader) Charm MRLBL3 Test ILVOT&V /2014 (Rosa Pearl Reader) /2013 (Rosa Pearl Reader RPR 4074) De door de fabrikant ingestelde cutoff waarde bedraagt 0000 bij de Rosa (Pearl) Reader. Melkmonsters die bij instrumentele aflezing een numerieke waarde geven gelegen boven deze cutoff waarde (> 0000) worden als positief beschouwd. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

13 Bespreking Ringmonster I was gedopeerd met 10 ppb oxytetracycline, een antibioticum dat niet met de Charm MRL(BL3) Test wordt opgespoord. Dit staal werd door alle laboratoria unaniem als negatief geanalyseerd met de Charm MRL(BL3) Test, m.a.w. er zijn geen valspositieve resultaten voor dit ringmonster. Ringmonster J bevatte 20 ppb cefquinome (testgevoeligheid Charm MRL Test: 14 ppb resp. Charm MRLBL3 Test: 20 ppb validatiestudies ILVO T&V). Dit ringmonster werd door alle laboratoria (beide testen) unaniem als positief geanalyseerd. Ringmonster K was gedopeerd met 50 ppb ceftiofur (testgevoeligheid Charm MRL Test: 6 ppb resp. Charm MRLBL3 Test: 14 ppb validatiestudies ILVOT&V) en 50 ppb desfuroylceftiofur (testgevoeligheid Charm MRL Test: 10 ppb resp. Charm MRLBL3 Test: 125 ppb validatiestudies ILVOT&V), een combinatie die positief zou moeten tekenen met de Charm MRL(BL3) Test. Dit ringmonster werd door alle laboratoria (beide testen) unaniem als positief geanalyseerd. Ringmonster L was gedopeerd met 30 ppb nafcilline, een ßlactamverbinding die slechts op 45 ppb wordt opgespoord met de Charm MRL Test en slechts op 175 ppb met de Charm MRLBL3 Test (validatiestudies ILVOT&V). Dit ringmonster werd door alle laboratoria (beide testen) unaniem als negatief geanalyseerd. Ringmonster M was gedopeerd met 4 ppb benzylpenicilline en werd door alle laboratoria (beide testen) unaniem als positief geanalyseerd. Benzylpenicilline wordt gedetecteerd vanaf 2 ppb met de Charm MRL Test en vanaf 3 ppb met de Charm MRLBL3 Test (validatiestudies ILVO T&V). Ringmonster N was een rauw melkmonster met een concentratie van 3 ppb benzylpenicilline (testgevoeligheid Charm MRL Test: 2 ppb resp. Charm MRLBL3 Test: 3 ppb validatiestudies ILVOT&V). Dit ringmonster werd door alle laboratoria (beide testen) unaniem als positief geanalyseerd. Ringmonster O was gedopeerd met 25 ppb enrofloxacine, een antibioticum dat niet met de Charm MRL(BL3) Test wordt opgespoord. Dit staal werd door alle laboratoria unaniem als negatief geanalyseerd met de Charm MRL(BL3) Test, m.a.w. er zijn geen valspositieve resultaten voor dit ringmonster. Ringmonster P bevatte 30 ppb cloxacilline (testgevoeligheid Charm MRL(BL3) Test: 25 ppb validatiestudies ILVOT&V). Met uitzondering van labo 1 die het ringmonster als negatief analyseerde, werd dit ringmonster door de overige labo s als positief geanalyseerd met de Charm MRL Test. Vermits door Charm Sciences slechts een testgevoeligheid van 25 à 35 ppb geclaimd wordt met de Charm MRL Test voor cloxacilline, wordt het negatieve resultaat bekomen door labo 1 niet als een valsnegatief resultaat beschouwd. Met de Charm MRLBL3 Test werd dit staal door beide laboratoria als positief geanalyseerd. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

14 Besluit Algemeen werden goede resultaten bekomen met de Charm MRL Test en de Charm MRLBL3 Test. Bovendien zijn deze resultaten in overeenstemming met wat men theoretisch (gebaseerd op de testgevoeligheden zoals destijds behaald in de validatiestudies van het ILVOT&V) zou verwachten. Merk op dat nafcilline (ringmonster L) niet op MRL wordt opgespoord met de Charm MRL Test en de Charm MRLBL3 Test. Er waren geen valspositieve resultaten met de Charm MRL Test of de Charm MRLBL3 Test. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

15 15 5 SNAP ßLactam en SNAP ßLactam ST 5.1 Inleiding Zeven zuivelbedrijven namen deel met de SNAP (ßlactam); drie bedrijven namen deel met de SNAP (ßlactam) ST. De SNAP ST (Simplified Technology) is een eenvoudigere en verbeterde versie van de SNAP. Eenvoudiger omdat de incubatie gewoon bij kamertemperatuur plaatsvindt (geen incubator meer vereist) en verbeterd omdat er meer penicillines op MRL en meerdere cefalosporines dichter bij MRL gedetecteerd worden. Aan de deelnemers werd gevraagd om de cartouches zowel visueel als met de reader af te lezen en, waar van toepassing, de waarde van de reader op de bijhorende fiche te noteren, alsmede het lotnummer en de vervaldatum van de kit. 5.2 Resultaten Alle bedrijven maakten gebruik van een Snapshot Reader. Door problemen met de migratie van de SNAPreagentia kon labo 14 geen resultaten rapporteren voor ringmonsters I en K. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

16 16 Nr. labo Visuele aflezing Instrumentele aflezing: ratio resultaat I J K L M N O P I J K L M N O P Lotnummer vervaldatum SNAP ßLactam ILVOT&V 0,63 1,10 >10,0 0,78 2,20 1,35 0,60 1,12 FH528 08/05/ ,53 0,92 3,81 0,71 1,69 1,45 0,61 0,82 FH528 08/05/ ,56 0,98 >5 0,75 1,98 1,38 0,56 0,99 KH346 04/10/ ,69 1,21 5,0 0,79 3,53 1,56 0,62 1,17 FM528 08/05/ ,62 1,05 >5,0 0,69 2,58 2,40 0,60 1,11 FH409 27/04/ ,77 1,05 5,14 0,84 2,16 1,15 0,72 0,79 KH346B 21/11/ ,95 0,62 3,05 3,65 0,63 1,67 FH528 08/05/ ,73 0,97 5,00 0,79 1,98 2,05 0,62 0,92 FH528 08/05/2013 SNAP ßLactam ST ILVOT&V 0,55 1,52 >5,0 >5,0 2,06 1,55 0,6 >5,0 KH330 07/11/ ,52 1,09 >5 >5 2,04 1,27 0,58 >5 MH473 09/01/ ,51 1,24 >5,0 >5,0 2,21 1,14 0,49 >5,0 MH498 05/02/ ,46 1,35 >5,0 >5,0 1,78 1,31 0,62 >5,0 MH498B 05/02/2014 De door de fabrikant ingestelde cutoff waarde bedraagt 1,05 bij de Snapshot Reader. Melkmonsters die bij instrumentele aflezing een ratio geven gelegen boven deze cutoff waarde (> 1,05) worden als positief beschouwd. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

17 Bespreking Ringmonster I bevatte 10 ppb oxytetracycline, een antibioticum dat niet met de SNAP (ST) wordt opgespoord. Dit staal werd door alle laboratoria (beide testen) unaniem als negatief geanalyseerd, m.a.w. er zijn geen valspositieve resultaten voor dit ringmonster. Ringmonster J was gedopeerd met 20 ppb cefquinome, een cefalosporine dat in 95 % van de gevallen op 20 ppb gedetecteerd wordt met de SNAP en op 16 ppb met de SNAP ST (validatiestudies ILVOT&V). Dit ringmonster werd door labo s 3, 6, 14 en 18 als negatief geanalyseerd. Labo s 10 en 13 rapporteerden dit staal instrumenteel als negatief doch visueel als positief (eindbeoordeling: positief). ILVOT&V en labo 8 rapporteerden dit staal zowel instrumenteel als visueel als positief. Uit de readerwaarden blijkt duidelijk dat dit staal een randgeval betreft. Door de kitfabrikant wordt voor cefquinome een testgevoeligheid van 7 à 36 ppb geclaimd met de SNAP [9]. Met de SNAP ST werd door alle labo s unaniem een positief resultaat bekomen. Ringmonster K was gedopeerd met 50 ppb ceftiofur (testgevoeligheid SNAP: 3 ppb resp. SNAP ST: 12 ppb validatiestudies ILVOT&V) en 50 ppb desfuroylceftiofur (testgevoeligheid SNAP: 4 ppb resp. SNAP ST: 70 ppb validatiestudies ILVOT&V), een combinatie die positief zou moeten tekenen met de SNAP (ST). Dit ringmonster werd door alle laboratoria (beide testen) unaniem als positief geanalyseerd. Ringmonster L bevatte 30 ppb nafcilline, een ßlactamverbinding die op 4 ppb gedetecteerd wordt met de SNAP ST doch pas op 80 ppb met de SNAP (validatiestudies ILVOT&V). Met de SNAP werd door alle labo s unaniem een negatief resultaat bekomen. Met de SNAP ST werd door alle labo s unaniem een positief resultaat bekomen. Ringmonster M was een rauw melkmonster gedopeerd met 4 ppb benzylpenicilline (testgevoeligheid SNAP (ST): 3 ppb validatiestudies ILVO T&V). Alle laboratoria gaven dit staal unaniem als positief door met de SNAP (ST). Ringmonster N was gedopeerd met 3 ppb benzylpenicilline (testgevoeligheid SNAP (ST): 3 ppb validatiestudies ILVOT&V). Alle laboratoria gaven dit staal unaniem als positief door met de SNAP (ST). Ringmonster O was gedopeerd met 25 ppb enrofloxacine, een antibioticum dat niet met de SNAP (ST) wordt opgespoord. Dit staal werd door alle laboratoria (beide testen) unaniem als negatief geanalyseerd, m.a.w. er zijn geen valspositieve resultaten voor dit ringmonster. Ringmonster P bevatte 30 ppb cloxacilline. Cloxacilline wordt pas op 35 ppb gedetecteerd met de SNAP doch reeds op 5 ppb met de SNAP ST (validatiestudies ILVOT&V). Met de SNAP kan dit staal dus zowel negatief als positief tekenen. ILVOT&V alsook labo s 8, 10 en 14 analyseerden dit staal als positief; de overige laboratoria analyseerden dit staal als negatief. Uit de readerwaarden blijkt duidelijk dat dit staal een randgeval betreft. Ook door Idexx Laboratories wordt voor cloxacilline slechts een testgevoeligheid van 30 à 40 ppb geclaimd met de SNAP [9]. Met de SNAP ST werd door alle labo s unaniem een positief resultaat bekomen. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

18 Besluit Algemeen werden goede resultaten bekomen met de SNAP en de SNAP ST. Bovendien zijn deze resultaten in overeenstemming met wat men theoretisch (gebaseerd op de testgevoeligheden zoals destijds behaald in de validatiestudies van het ILVOT&V) zou verwachten. Merk op dat nafcilline (ringmonster L) niet op MRL wordt opgespoord met de SNAP. Ook cefquinome (ringmonster J) en cloxacilline (ringmonster P) worden niet steeds op MRL gedetecteerd met de SNAP. Er waren geen valspositieve resultaten met de SNAP of de SNAP ST. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

19 19 6 βetas.t.a.r. 6.1 Inleiding Vijf zuivelbedrijven namen deel met de ßetas.t.a.r. 25; drie bedrijven namen deel met de ßetas.t.a.r Het enige verschil tussen de ßetas.t.a.r. 25 en de ßetas.t.a.r. 100 is dat bij de ßetas.t.a.r. 100 de receptor nog gereconstitueerd en uitverdeeld dient te worden. Aan de deelnemers werd gevraagd om de dipsticks visueel af te lezen en, waar van toepassing, de waarde van de reader op de bijhorende fiche te noteren, alsmede het lotnummer en de vervaldatum van de kit. 6.2 Resultaten Enkel de resultaten bekomen door het ILVOT&V en bedrijf 12 werden ook m.b.v. een reader afgelezen; bij de overige zuivelbedrijven werden de dipsticks uitsluitend visueel afgelezen. Nr. labo Visuele aflezing Instrumentele aflezing: ratio resultaat Lotnr. vervaldatum I J K L M N O P I J K L M N O P (Type reader) ßetas.t.a.r. 25 ILVOT&V 5,539 0,003 1,644 0,030 0,001 0,002 5,424 0, A21/06/2013 (Reveal AccuScan III) B05/09/ A22/10/ * 8,351 0,003 2,809 0,239 0,005 0,005 8,451 0, A11/02/2014 Accuscanreader 17 diverse /08/2013 ßetas.t.a.r. 100 ILVOT&V 16,535 0,040 7,067 0,014 0,007 0,821 16,039 0, D12/12/2013 (Reveal AccuScan III) 15??? 16 * 30206E06/02/ * * * 21212C12/12/2013 De door de fabrikant ingestelde cutoff waarde bedraagt 1,000 bij de AccuScan III Reader. Melkmonsters die bij instrumentele aflezing een ratio kleiner of gelijk aan deze cutoff waarde ( 1,000) geven, worden als positief beschouwd. *: randgeval S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

20 Bespreking Ringmonster I bevatte 10 ppb oxytetracycline, een antibioticum dat niet met de ßetas.t.a.r. wordt opgespoord. Met uitzondering van labo 12 die dit staal als positief rapporteerde, werd dit staal door alle laboratoria als negatief geanalyseerd met de ßetas.t.a.r.. Ondanks de positieve ratiowaarde (8,351) en de negatieve visuele aflezing rapporteerde labo 12 een positief resultaat voor de instrumentele aflezing en luidde kun eindbeoordeling voor dit ringmonster positief, m.a.w. labo 12 bekwam een valspositief resultaat voor dit ringmonster. Ringmonster J bevatte 20 ppb cefquinome (testgevoeligheid ßetas.t.a.r. 25(0): 10 ppb validatiestudie ILVOT&V). Met uitzondering van labo 15 die dit ringmonster als negatief analyseerde, werd dit staal door alle laboratoria als (randgeval) positief gerapporteerd. Vermits ook door Neogen Corporation voor cefquinome een testgevoeligheid lager dan 20 ppb geclaimd wordt [9], wordt het resultaat van labo 15 beschouwd als een valsnegatief resultaat. Labo 20 rapporteerde dit staal als randgeval positief. Gezien de ratio (0,040) bekomen door het ILVOT&V voor dit ringmonster met de ßetas.t.a.r. 100, is het niet correct om dit ringmonster als een randgeval te rapporteren. Ringmonster K bevatte 50 ppb ceftiofur (testgevoeligheid ßetas.t.a.r. 25(0): 110 ppb validatiestudie ILVOT&V) en 50 ppb desfuroylceftiofur (testgevoeligheid ßetas.t.a.r. 25(0): 2500 ppb validatiestudie ILVOT&V), een combinatie waarvan verwacht wordt dat die negatief tekent met de ßetas.t.a.r.. Dit ringmonster werd door alle labo s als (randgeval) negatief geanalyseerd. Ringmonster L bevatte 30 ppb nafcilline (testgevoeligheid ßetas.t.a.r. 25(0): 14 ppb validatiestudie ILVOT&V) en werd unaniem door alle laboratoria als (randgeval) positief gerapporteerd. Labo 20 rapporteerde dit staal als randgeval positief. Vermits ook door Neogen Corporation voor nafcilline een testgevoeligheid van 8 à 20 ppb geclaimd wordt [9] en gezien de ratio (0,014) bekomen door het ILVOT&V voor dit ringmonster met de ßetas.t.a.r. 100, is het niet correct om dit ringmonster als een randgeval te beschouwen. Ringmonster M was een rauw melkmonster gedopeerd met 4 ppb benzylpenicilline (testgevoeligheid ßetas.t.a.r. 25(0): 3 ppb validatiestudie ILVOT&V). Dit staal werd door alle labo s unaniem als positief gerapporteerd. Voor het monster belast met 4 ppb benzylpenicilline wordt door het ILVO resp. door labo 12 een ratio van 0,001 resp. 0,005 bekomen met de ßetas.t.a.r. 25. Bijgevolg zouden deze loten voldoen aan de voorwaarde vooropgesteld voor dit controlemonster in het kader van de uitbetaling van de rauwe melk aan kopers door de Interprofessionele Organismen, nl. een ratio 0,040. Ringmonster N was gedopeerd met 3 ppb benzylpenicilline (testgevoeligheid ßetas.t.a.r. 25(0): 3 ppb validatiestudie ILVOT&V), een monster dat dus in 95% van de gevallen positief zou moeten tekenen met de ßetas.t.a.r.. Met uitzondering van labo 15 analyseerden alle laboratoria dit ringmonster als (randgeval) positief. Voor het monster belast met 3 ppb benzylpenicilline wordt door ILVOT&V resp. labo 12 een ratio van 0,002 resp. 0,005 bekomen met de ßetas.t.a.r. 25 waardoor deze loten niet zouden voldoen aan de voorwaarde vooropgesteld voor dit controlemonster in het kader van de uitbetaling van de rauwe melk aan kopers door de Interprofessionele Organismen, nl. een ratio > 0,040. Meer nog, met deze loten zou geen onderscheid kunnen gemaakt worden tussen het monster belast met 3 ppb benzylpenicilline (ringmonster N) en het monster belast met 4 ppb benzylpenicilline (ringmonster M). Ringmonster O was gedopeerd met 25 ppb enrofloxacine, een antibioticum dat niet met de ßetas.t.a.r. wordt opgespoord. Met uitzondering van labo 19 die voor dit staal een positief resultaat rapporteerde, werd dit staal door alle overige laboratoria als negatief geanalyseerd met de ßetas.t.a.r., m.a.w. door labo 19 werd een valspositief resultaat gegenereerd voor dit ringmonster. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

21 21 Ringmonster P was gedopeerd met 30 ppb cloxacilline (testgevoeligheid ßetas.t.a.r. 25(0): 6 ppb validatiestudie ILVOT&V). Met uitzondering van labo 19, rapporteerden alle laboratoria dit monster als positief. Vermits ook door Neogen Corporation voor cloxacilline een testgevoeligheid van 5 à 10 ppb geclaimd wordt [9], wordt het resultaat van labo 19 beschouwd als een valsnegatief resultaat. Mogelijks is er een monsterverwisseling opgetreden tussen ringmonster O en ringmonster P. 6.4 Besluit Met uitzondering van de valsnegatieve resultaten bekomen door labo 15 voor ringmonster J (20 ppb cefquinome) en door labo 19 voor ringmonster P (30 ppb cloxacilline) en de valspositieve resultaten bekomen door labo 12 voor ringmonster I (10 ppb oxytetracycline) en door labo 19 voor ringmonster O (25 ppb enrofloxacine) zijn de overige resultaten goed en in overeenstemming met wat men theoretisch (gebaseerd op de testgevoeligheid zoals destijds behaald in de validatiestudie van het ILVOT&V) zou verwachten. Mogelijks is er in labo 19 een monsterverwisseling opgetreden tussen ringmonsters O en P. Er zijn duidelijk indicaties dat labo 20 de dipsticks visueel onvoldoende streng afleest. Ringmonster L (30 ppb nafcilline) en in mindere mate ringmonster J (20 ppb cefquinome) zouden in principe geen randgeval resultaten mogen opleveren. Merk op dat de combinatie ceftiofur en zijn metaboliet desfuroylceftiofur (ringmonster K) niet op MRL wordt opgespoord met de ßetas.t.a.r.. Labo 15 nam opnieuw niet de moeite om het lotnummer en de vervaldatum van de gebruikte reagentia te vermelden. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

22 22 7 Sneltesten in validatie op het ILVOT&V 7.1 ßlactam sneltest Charm MRLBL1 Test Inleiding In het kader van een validatiestudie werd door het ILVOT&V deelgenomen aan dit ringonderzoek met de Charm MRLBL1 Test (= Charm MRLBL One Minute Test, Charm Sciences Inc., USA). De Charm MRLBL1 Test is een nieuwe ROSA (Rapid One Step Assay) die qua uitvoering enkel verschilt van de klassieke Charm MRL Test in de verkorte incubatieduur (nl. 1 minuut i.p.v. 8 minuten), hetgeen resulteert in andere testgevoeligheden Resultaten Visuele aflezing Instrumentele aflezing Lotnummer vervaldatum Nr. labo I J K L M N O P I J K L M N O P Type reader Charm MRLBL1 Test ILVOT&V /2013 EZ Reader De door de fabrikant ingestelde cutoff waarde bedraagt 0000 voor de Charm MRLBL1 Test. Melkmonsters die bij instrumentele aflezing een numerieke waarde geven gelegen boven deze cutoff waarde (> 0000) worden als positief beschouwd Bespreking Volgende verbindingen met volgende testgevoeligheden worden onder meer met de Charm MRLBL1 Test opgespoord: 30 ppb voor cefquinome, 16 ppb voor ceftiofur, 90 ppb voor desfuroylceftiofur, 150 ppb voor nafcilline, 2 ppb voor benzylpenicilline en 16 ppb voor cloxacilline (validatiestudie ILVO T&V). Ringmonsters I & O, die geen ßlactamantibiotica bevatten, werden als negatief geanalyseerd. Er zijn dus geen valspositieve resultaten voor deze ringmonsters. Ringmonster J, belast met 20 ppb cefquinome, werd als negatief geanalyseerd. Ringmonster K, belast met een combinatie van 50 ppb ceftiofur en 50 ppb desfurolyceftiofur werd als positief geanalyseerd. Ringmonster L gedopeerd met 30 ppb nafcilline, werd als negatief geanalyseerd. Ringmonster M, belast met 4 ppb benzylpenicilline, werd als positief geanalyseerd. Ringmonster N, belast met 3 ppb benzylpenicilline, werd als positief geanalyseerd. Ringmonster P, belast met 30 ppb cloxacilline werd als positief geanalyseerd. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

23 Besluit Algemeen werden met de Charm MRLBL1 Test goede resultaten bekomen en waren deze resultaten in overeenstemming met wat men theoretisch (gebaseerd op de testgevoeligheid zoals destijds behaald in de validatiestudie van het ILVOT&V) zou verwachten. Merk op dat cefquinome (ringmonster J) en nafcilline (ringmonster L) niet op MRL worden opgespoord met de Charm MRLBL1 Test. Ter vergelijking: met de Charm MRL Test en Charm MRLBL3 Test wordt enkel nafcilline (ringmonster L) niet op MRL opgespoord. Er waren geen valspositieve resultaten met de Charm MRLBL1 Test. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

24 Quinolone sneltest Quinosensor Inleiding In het kader van een validatiestudie werd door het ILVOT&V ook deelgenomen aan dit ringonderzoek met de Quinosensor (Unisensor s.a., Wandre). De Quinosensor is een sneltest voor de screening van quinolones in melk Resultaten Visuele aflezing Instrumentele aflezing Lotnummer vervaldatum Nr. labo I J K L M N O P I J K L M N O P Type reader Quinosensor ILVOT&V 2,47 2,14 3,01 2,70 1,57 2,34 0,66 1, D 12/04/2014 ReadSensor De door de fabrikant ingestelde cutoff waarde bedraagt 1,10 bij de ReadSensor. Melkmonsters die bij instrumentele aflezing een ratio geven gelegen kleiner dan of gelijk aan deze cutoff waarde ( 1,10) worden als positief beschouwd Bespreking Met de Quinosensor wordt onder meer enrofloxacine opgespoord op 20 ppb (validatiestudie ILVOT&V). Ringmonsters I, J, K, L, M, N en P die geen quinolones bevatten, werden als negatief geanalyseerd. Er zijn dus geen valspositieve resultaten voor deze ringmonsters. Ringmonster O, belast met 25 ppb enrofloxacine, werd als positief geanalyseerd Besluit Algemeen werden met de Quinosensor goede resultaten bekomen en is het resultaat van ringmonster O (25 ppb enrofloxacine) in overeenstemming met wat men theoretisch (gebaseerd op de testgevoeligheid zoals destijds behaald in de validatiestudie van het ILVOT&V) zou verwachten. Er waren geen valspositieve resultaten met de Quinosensor. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

25 Combo sneltest Charm MLRBLRFTET2 Test Inleiding In het kader van een validatiestudie werd door het ILVOT&V deelgenomen aan dit ringonderzoek met de Charm MRLBLRFTET2 Test (Charm Sciences Inc., USA). Bij deze test worden ßlactam antibiotica en tetracyclines gelijktijdig opgespoord. De Charm MRLBLRFTET2 is een nieuwe Charm MRLBLTET2 Test die speciaal ontwikkeld werd voor de Russische Federatie (RF) en waarbij vnl. de groep van de tetracyclines gevoeliger wordt opgespoord Resultaten Instrumentele aflezing Lotnummer Nr. ßlactam kanaal Tetracycline kanaal vervaldatum labo I J K L M N O P I J K L M N O P Type reader Charm MRLBLRFTET2 ILVO T&V 600 BL 2115 BL BL 1911 BL BL 1509 TET F04/2013 Rosa Pearl 1063 BL 1992 BL BL TET 1913 BL 1542 TET 1812 BL 1513 TET S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax BL TET BL TET Reader 003F04/2013 EZ Reader De door de fabrikant ingestelde cutoff waarde bedraagt 0000 voor de Charm MRLBLRFTET2 Test. Melkmonsters die bij instrumentele aflezing een numerieke waarde geven gelegen boven deze cutoff waarde (> 0000) worden als positief beschouwd. BL: ßetalactam TET: tetracyclines Bespreking Volgende verbindingen met volgende testgevoeligheden worden onder meer op het ßlactamkanaal van de Charm MRLBLRFTET2 Test opgespoord: 25 ppb voor cefquinome, 14 ppb voor ceftiofur, 150 ppb voor desfuroylceftiofur, 125 ppb voor nafcilline, 2 ppb voor benzylpenicilline en 18 ppb voor cloxacilline (validatiestudie ILVOT&V). Ringmonsters I & O, die geen ßlactamantibiotica bevatten, werden met beide readers als negatief geanalyseerd. Er zijn dus geen valspositieve resultaten voor deze ringmonsters op het ßlactamkanaal. Ringmonster J, gedopeerd met 20 ppb cefquinome, werd met beide readers als positief geanalyseerd voor ßlactam.

26 26 Ringmonster K, belast met 50 ppb ceftiofur en 50 ppb desfurolyceftiofur, werd met beide readers als positief geanalyseerd voor ßlactam. Ringmonster L, belast met 30 ppb nafcilline, werd met beide readers als negatief geanalyseerd voor ßlactam. Ringmonster M, belast met 4 ppb benzylpenicilline, werd met beide readers als positief geanalyseerd voor ßlactam. Ringmonster N, belast met 3 ppb benzylpenicilline, werd met beide readers als positief geanalyseerd voor ßlactam. Ringmonster P, belast met 30 ppb cloxacilline werd met beide readers als positief geanalyseerd voor ßlactam. Het tetrakanaal bij deze test is verantwoordelijk voor de detectie van de tetracyclines. Voor oxytetracycline bedraagt de testgevoeligheid van de Charm MRLBLRFTET2 Test 9 ppb (validatiestudie ILVOT&V). Ringmonster I, belast met 10 ppb oxytetracycline, werd met beide readers als positief geanalyseerd voor tetracyclines. Ringmonsters J, K, L, N en O, die geen tetracyclines bevatten, werden met beide readers als negatief geanalyseerd voor tetracyclines. Er zijn dus geen valspositieve resultaten voor deze ringmonsters. Ringmonster M, dat eveneens geen tetracyclines bevatte, werd met de EZreader als positief gerapporteerd voor tetracyclines (en ßlactam antibiotica), m.a.w. voor ringmonster M wordt een valspositief resultaat bekomen met de EZreader op het tetrakanaal. Ringmonster P, dat eveneens geen tetracyclines bevatte, werd met de Rosa Pearl Reader als positief gerapporteerd voor tetracyclines (en ßlactam antibiotica), m.a.w. voor ringmonster P wordt een valspositief resultaat bekomen met de Rosa Pearl Reader op het tetrakanaal Besluit Algemeen werden met de Charm MRLBLRFTET2 Test goede resultaten bekomen en zijn deze resultaten in overeenstemming met wat men theoretisch (gebaseerd op de testgevoeligheid zoals destijds behaald in de validatiestudie van het ILVOT&V) zou verwachten. Cefquinome werd in dit ringonderzoek iets gevoeliger opgespoord met de EZreader dan in de validatiestudie. Er waren geen valspositieve resultaten met de Charm MRLBLRFTET2 Test op het ßlactamkanaal. Op het tetrakanaal daarentegen werden wel valspositieve resultaten gerapporteerd: voor ringmonster M (4 ppb benzylpenicilline) met de EZreader en voor ringmonster P (30 ppb cloxacilline) met de Rosa Pearl Reader. In geval een positief resultaat wordt bekomen, adviseert Charm Sciences Inc. een heranalyse van het staal. En eigenlijk indien bij de heranalyse tegenstrijdige resultaten bekomen worden zou het staal voor een derde maal moeten geanalyseerd worden om definitief te besluiten of het staal al dan niet negatief of positief dient beschouwd te worden. Merk op dat nafcilline (ringmonster L) niet op MRL wordt opgespoord met de Charm MRLBLRFTET2 Test. S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax

27 27 8 Algemeen besluit Volgende afwijkingen werden in het kader van dit ringonderzoek vastgesteld en vereisen opvolging en/of correctie door het betreffende labo: de valsnegatieve resultaten bekomen door labo s 15, 16 en 20 met de Delvotest T voor het monster belast met 100 ppb oxytetracycline (ringmonster G) het niet respecteren van de incubatieduur door labo 15 (3u15minuten) bij de Delvotest T en het opnieuw niet doorgeven van het lotnummer en de incubatietemperatuur het opnieuw niet respecteren van de incubatietemperatuur van 64±0,5 C door labo 3 (64,7 C) bij de CMT Milk Test Single Test de te hoge CIFwaarden bekomen door labo 8 met de CMT Milk Test Single Test voor de melk gedopeerd met 100 ppb enrofloxacine (ringmonster B), 100 ppb sulfadoxine (ringmonster F) en 20 ppb cefquinome (ringmonster H) het valsnegatief resultaat bekomen door labo 15 met de ßetas.t.a.r. 100 voor het monster belast met 20 ppb cefquinome (ringmonster J) en het opnieuw niet doorgeven van het lotnummer en de vervaldatum het valsnegatief resultaat bekomen door labo 19 met de ßetas.t.a.r. 25 voor het monster belast met 30 ppb cloxacilline (ringmonster P) én het valspositief resultaat bekomen door labo 19 met de ßetas.t.a.r. 25 voor het monster belast met 25 ppb enrofloxacine (ringmonster O) het valspositief resultaat bekomen door labo 12 met de ßetas.t.a.r. 25 voor het monster belast met 10 ppb oxytetracycline (ringmonster I) Vaststellingen die door het ILVOT&V verder worden opgevolgd: de negatieve resultaten bekomen door labo s 5, 15 en 20 met de Delvotest T voor het monster belast met 100 ppb sulfadoxine (ringmonster F). Vermits de testgevoeligheid voor sulfadoxine nog niet exact bepaald werd door de kitfabrikant bij een vaste incubatieduur van 3 uur, kan nog geen uitspraak gedaan worden of de resultaten bekomen door labo s 5, 15 en 20 voor ringmonster F al dan niet valsnegatieve resultaten zijn. De kitfabrikant heeft beloofd om hier verder onderzoek op uit te voeren. het negatieve resultaat bekomen door labo 3 met de CMT Milk Test Single Test voor het monster belast met 50 ppb ceftiofur en 50 ppb desfuroylceftiofur (ringmonster A). Vermits de testgevoeligheid voor desfuroylcefiofur niet exact bepaald werd door de kitfabrikant bij een vaste incubatieduur van 3 uur, kan geen uitspraak gedaan worden of het resultaat bekomen door labo 3 voor ringmonster A al dan niet een valsnegatief resultaat is. Vraag van het ILVOT&V aan de labo s: correcte aanduiding van de gebruikte test(en) op het inschrijvings en resultatenformulier volledige registratie van de gevraagde gegevens (lotnummer, vervaldatum, datum analyse, ) op het resultatenformulier S. Ooghe & W. Reybroeck ILVOT&V Brusselsesteenweg Melle Tel Fax