Identificatie van nieuwe KLF1 mutaties in In(Lu) donoren; de pleiotrope functionaliteit van KLF1 tijdens erythropoiese

Maat: px

Weergave met pagina beginnen:

Download "Identificatie van nieuwe KLF1 mutaties in In(Lu) donoren; de pleiotrope functionaliteit van KLF1 tijdens erythropoiese"

Cornelia Eilander
7 jaren geleden
Aantal bezoeken:

1 Identificatie van nieuwe KLF1 mutaties in In(Lu) donoren; de pleiotrope functionaliteit van KLF1 tijdens erythropoiese Eerste auteur Jesse Eernstman Co-auteurs Steven Heshusius, Barbara Veldhuisen, Aicha Ait Soussan, Ellen van der Schoot, Marieke von Lindern, Emile van den Akker Sanquin Research Amsterdam

2 Conflict of Interest Disclosure Form In accordance with the rules of the Health Care Inspectorate (IGZ) Name: Affiliation: Jesse Eernstman Sanquin Research I have no potential conflict of interest to report I have the following potential conflict(s) of interest to report Type of affiliation / financial interest Name of commercial company Receipt of grants/research supports: Receipt of honoraria or consultation fees: Participation in a company sponsored speaker s bureau: Stock shareholder: Other support (please specify): Scientific advisory board

3 (CD71) Transferinne KLF1 speelt een cruciale rol tijdens erythropoeise WT Klf1 ko/ko KLF1 TER119 Glycophorine A

4 Hemoglobine ketens ondergaan een verandering tijdens de embryonale ontwikkeling Expressie van hemoglobine gedurende ontogenie - tetramer structure - compositional change during Foetale lever Navelstreng bloed Perifeer bloed

5 Mutaties in KLF1 kunnen tot verschillende pathologieën leiden Mutatie Fenotype Eiwit KLF1 E325K S270X; K332Q Mutation Congenitale dyserythropoetische anemie HPFH; ZnPP In(LU) HbA, HbB CD44 HbB; BCAM BCAM ; CD44 anemia porphyria High HbF Blood groups

6 Wat veroozaakt het Lu- fenotype? 1. Mutaties in BCAM leiden tot gen-silencing - Cys237Stop, Arg121Stop 2. Heterozygote mutaties in het KLF1 gen kan dominant Lu(a b-) fenotype als gevolg geven (ook bekend als InLu)

7 Knock-down van KLF1 heeft down-regulatie van Lutheran en CD44 tot gevolg in in-vitro gekweekte erythroblasten Lutheran CD44 Controle erythroblasten (TRC) Erythroblasten met KLF1 KD

8 Lu- laten een verlaagde expressie van CD44 zien CD44 (Fold change) CD44 expressie levels * 0 Controle donoren Lu(a-b-) Lu(a-, b zwak) Lu(a zwak, b-) Phenotype Lu(a,b)zwak

9 Onderzoeksvraag Kunnen we nieuwe KLF1 mutaties identificeren in onze Lutheran negatieve donor populatie? Wat is het effect van deze mutaties op de Hemoglobine-switch Wat kunnen eventuele nieuwe mutaties ons leren over het moleculaire mechanisme van hemoglobine switching

10 6 HbF en HbA2 zijn verhoogd in Ludonoren Verhoogde HbF en HbA2 (Liu et al, 2014, Blood) geven betrokkenheid van KLF1 mutaties aan HbF *** ** ** ** 4 ** HbA2 HbF (%) 4 2 HbA2 (%) Controle donoren Lu(a-b-) Lu(a-, b zwak) Lu(a zwak, b-) Fenotype Lu(a,b)zwak 0 Controle donoren Lu(a-b-) Lu(a-, b zwak) Lu(a zwak, b-) Fenotype Lu(a,b)zwak

11 Band 3 en GPA expressie zijn onveranderd in Ludonoren 600 Band GPA BAND3 (Fold change) GPA (Fold change) Controle donoren Lu(a-b-) Lu(a-, b zwak) Lu(a zwak, b-) Fenotype Lu(a,b)zwak -200 Controle donoren Lu(a-b-) Lu(a-, b zwak) Lu(a zwak, b-) Fenotype Lu(a,b)zwak C run 1

12 De meeste gevonden mutaties liggen in het zinc-finger domein van KLF1 Non coding codi Intron 1 Intron 2 coding ZF1 ZF2 ZF3 ng 911pb 256pb Exon 1 Exon 2 Exon 3 Non coding 20% van alle Lu- donoren hebben een KLF1 mutatie Mutatie WT>Mut Effect op eiwit Mutatie WT>Mut Effect op eiwit c.304c>t* p.pro102ser c.964a>c p.arg322ser* c.703_704inst loss of 3 zinc fingers c.977g>t p.leu326arg* c.813g>a p.trp271stop c.1042t>c p.leu348phe c.917t>a p.gln306val c.1057c>t p.tyr353his c.954g>c p.cys318trp

13 De KLF1 Zinc finger mutatie zorgt voor een hogere HbF expressie in in-vitro gekweekte erythroblasten CD44 HbA T23E R328L GFP HbF

14 Conclusie De Lu negatieve donoren hebben allemaal een lager CD44 en een verhoogde HbF expressie Nieuwe KLF1 mutaties zijn geïdentificeerd in Lutheran negative donoren In-vitro down-regulatie van KLF1 en transductie met mutanten ondersteunen dat de gevonden mutaties betrokken zijn bij verlaagde CD44, verhoogde Hb De meeste mutaties zijn gevonden in het Zinc Finger domein van KLF1 Mutaties gevonden in KLF1 die verlies van Zinc finger functionaliteit tot gevolg hebben resulteerden in een relatief hoger HbF expressie (>4%)

15 Dankwoord Hematopoiesis Steven Heshusius Marieke von Lindern Emile van den Akker FACS facility Erik Mul RCD (HPLC) Martijn Veldthuis IHE Aicha Ait Soussan Barbara Veldhuisen Ellen van der Schoot Erytrocytenserologie Peter Ligthart

Vergelijkbare documenten

Please evaluate the session & the day at

Please evaluate the session & the day at www.hematologiecongres.nl Conflict of Interest Disclosure Form In accordance with the rules of the Health Care Inspectorate (IGZ) Name: Affiliation: S. Oerlemans