Rode pulp macrofagen in de milt; APK voor rode bloedcellen. Robin van Bruggen Dept. Blood Cell Research Sanquin Research

Maat: px

Weergave met pagina beginnen:

Download "Rode pulp macrofagen in de milt; APK voor rode bloedcellen. Robin van Bruggen Dept. Blood Cell Research Sanquin Research"

Gerda van Wijk
8 jaren geleden
Aantal bezoeken:

1 Rode pulp macrofagen in de milt; APK voor rode bloedcellen. Robin van Bruggen Dept. Blood Cell Research Sanquin Research

2 Introductie Waarom bestuderen we de interactie tussen rode bloedcellen (RBC) en milt macrofagen (Mø)? Tot 25% van de donor RBC wordt binnen 24 uur na transfusie geklaard, waarschijnlijk door milt Mø. Kennis over het mechanisme leidt mogelijk tot nieuwe strategieën om de klaring te voorkomen.

3 Mebius and Kraal, Nature Reviews in Immunology

4 Blue et al. Am. J. Ana. (1981)

5 Levenscyclus van de rode bloedcel

6 Levenscyclus van de rode bloedcel

7 Humane rode pulp Mø

8 Factoren die een rol spelen in RBC klaring Eat me signals Auto-IgG binding aan senescent cell antigeen (Band3) Phosphatidylserine (PS) exposure. Don t eat me signals: CD47 expressie from H.U. Lutz

9 CD47 CD47 SIRPα Inhibits Phagocytosis SIRPα Allows Phagocytosis

10 Fagocytose assay CFSE labelling manipulation incubation RBC lysis

11 Fagocytose van rode bloedcellen door Mø % positive red pulp mø untreated CD47-F(ab')2

12 CD47 signalering in rode bloedcellen Anti-CD47 antibodies induceren: -PS exposure - Vesicle vorming door rode bloedcellen

13 CD47 binding induceert PS exposure PS exposure (% positive cells) 0 - control IgG acd44 acd47 acd235a

14 CD47 binding induceert vesicles

15 Induceert SIRP CD47 signalering op RBC? Rode pulp Mø zijn geen ideaal model om CD47/SIRP interacties te bestuderen. Ons model: Chinese Hamster Ovary (CHO) cellen getransfecteerd met SIRP CHO cellen werden geïncubeerd met RBC, RBC werden geoogst en PS exposure en vesicle shedding werden bekeken. Resultaat: geen effect van SIRP expressie op PS exposure en vesicle shedding.

16 CHO-SIRPα cellen binden RBC

18 Scheiding van rode bloedcellen op leeftijd Slechts een kleine fractie van de RBC werden gebonden door CHO-SIRP cellen; ouderdom? Elutriatie en Percoll fractionering om RBC te scheiden op leeftijd.

19 Binding van oude RBC aan SIRP

20 Kunstmatig verouderde erythrocyten Erythrocyten ondergaan veel oxidatieve schade tijdens het vervoeren van zuurstof. Hoewel er meerdere enzymen actief zijn in erythrocyten om oxidatieve schade tegen te gaan of te repareren, vertonen oude erythrocyten tekenen van oxidatieve schade, zoals methemoglobine (methb). Een manier om erythrocyten kunstmatig te verouderen is het incuberenvan dezecellenin 5 M Cu 2+. Vervolgens is de binding van Cu 2+ behandelde erythrocyten aan SIRP getransfecteerde CHO cellen bepaald.

21 Rol van serum voor RBC binding aan SIRP

22 Thrombospondin-1 Een serum eiwit dat kan binden aan CD47, afhankelijk van de conformatie van CD47. TSP-1 is een eiwit dat gesecreteerd wordt door plaatjes; disulfide-linked homotrimeric glycoprotein. TSP-1 speelt een rol bij cel-cel en cel-matrix interacties. TSP-1 speelt een rol in fagocytose van apoptotische cellen. Bindt aan CD47 op sikkelcellen (vanwege een conformationele verandering in CD47). Kan binden aan phosphatidylserine (PS).

23 Kunstmatige veroudering geeft switch in CD47

24 TSP-1 bindt na kunstmatige veroudering

25 Rol van TSP-1 voor RBC binding aan SIRP

26 Rol van TSP-1 voor fagocytose door rode pulp Mø ** ** phagocytosis (% of positive spleen m ) untreated CD47-F(ab')2 treated aged aged+4ngg aged+4n1k

27 Conclusies Identificatie van een nieuw mechanisme voor RBC klaring gebaseerd op CD47/SIRP signalering. CD47 ondergaat een conformationele switch in oude RBC waarschijnlijk door oxidatieve schade. TSP-1 bindt vervolgens aan CD47; SIRP op de Mø ziet CD47 nu als eat me signaal, resulteert in fagocytose.

28 CD47 SIRPα Inhibits Phagocytosis Changed CD47 SIRPα

29 Belangrijk voor bewaarde/gekweekte RBC? In vitro transfusie assay. 10 1

30 Belangrijk voor bewaarde/gekweekte RBC? 150 * * red cell concentrate whole blood 100 MFI 50 0 Anti-TSP-1 A6.1 Control control

31 Met dank aan Bloed Cel Research Patrick Burger Elena Kostova Petra Hilarius-Stokman Boukje Beuger Dirk de Korte Timo van den Berg HLA-Diagnostiek Paulien Kuin-Valkenhof Claudia Ranzijn Junior Lardy

Vergelijkbare documenten

DC-SIGN + cellen een rol spelen in de opruiming van dode thymocyten uit de cortex van de humane thymus (Hoofdstuk 2). De co-expressie van het

DC-SIGN + cellen een rol spelen in de opruiming van dode thymocyten uit de cortex van de humane thymus (Hoofdstuk 2). De co-expressie van het : Hematopoietische antigeen presenterende cellen in de cortex van de humane thymus: Aanwijzingen voor een rol in selectie en verwijdering van apoptotische thymocyten. Het immune systeem van (gewervelde)