Molecular Pathology for Pathologists. Pr P. Pauwels

Maat: px

Weergave met pagina beginnen:

Download "Molecular Pathology for Pathologists. Pr P. Pauwels"

Pieter-Jan van Dam
8 jaren geleden
Aantal bezoeken:

1 Molecular Pathology for Pathologists Pr P. Pauwels

2 NGS moleculair pathologie rapport ontcijferen Nomenclatuur waarin gerapporteerd wordt: EGFR c.2573t>g, p.(leu858arg) Coderende sequentie Eiwit/proteïne sequentie Genomische DNA sequentie: intron + exon Coderende DNA sequentie: exonen only Eiwit sequentie : aminozuren sequentie bestaande uit een 3 lettercode (Leu ipv L) EGFR c.2235_2249del, p.(glu746_ala750del) Deletie van dit stukje sequentie Maw, de officiële nomenclatuur refereert niet naar exonen, vandaar vele pathologie rapporten aangeven: Er werd door de test een mutatie aangetoond in exon 21 van het EGFR gen, nl c.2573t>g, p.(leu858arg).

: aminozuren sequentie bestaande uit een 3 lettercode (Leu ipv L) EGFR c.2235_2249del, p.

15 NGS moleculair pathologie rapport ontcijferen Soorten mutaties: 1 Silent mutatie 2 Nonsense mutatie 3 Missense mutatie Mutatie van DNA veroorzaakt een verandering in de aminozuur sequentie (eiwit)

16 NGS moleculair pathologie rapport ontcijferen Soorten mutaties: 1 Silent mutatie Mutatie van DNA veroorzaakt geen verandering in de aminozuur sequentie (eiwit) 2 Nonsense mutatie 3 Missense mutatie Mutatie van DNA veroorzaakt een verandering in de aminozuur sequentie (eiwit)

aminozuur sequentie (eiwit) 2 Nonsense mutatie 3 Missense mutatie

17 NGS moleculair pathologie rapport ontcijferen Soorten mutaties: 1 Silent mutatie 2 Nonsense mutatie Mutatie van DNA veroorzaakt geen verandering in de aminozuur sequentie (eiwit) Mutatie van DNA veroorzaakt een STOP van de aminozuur sequentie (= verkort eiwit) 3 Missense mutatie Mutatie van DNA veroorzaakt een verandering in de aminozuur sequentie (eiwit)

(eiwit) Mutatie van DNA veroorzaakt een STOP van de aminozuur sequentie (= verkort eiwit)

18 NGS moleculair pathologie rapport ontcijferen Soorten mutaties: 1 Silent mutatie 2 Nonsense mutatie Mutatie van DNA veroorzaakt geen verandering in de aminozuur sequentie (eiwit) Mutatie van DNA veroorzaakt een STOP van de aminozuur sequentie (= verkort eiwit) 3 Missense mutatie Mutatie van DNA veroorzaakt een verandering in de aminozuur sequentie (eiwit) 4 Frameshift mutatie Insertie of deletie (n 3*x) van nucleotides op DNA niveau veroorzaakt een shift bij vertaling naar de aminozuur sequentie (eiwit)

(= verkort eiwit) 3 Missense mutatie Mutatie van DNA veroorzaakt een verandering in de aminozuur sequentie (eiwit) 4

21 NGS Targeted resequencing van gdna STAP 3: Alle stalen samen op een flow cell brengen bridging amplificatie

23 NGS Targeted resequencing van gdna STAP 4: data analyse : Demultiplexing: via barcode patiënten terug uit elkaar halen Uitlijnen tov een referentie sequentie Waarom is deze strategie niet zo geschikt om amplificatie van volledige genen te detecteren?

25 NGS Targeted resequencing van gdna STAP 3: Alle stalen samen op een flow cell brengen Op de flowcell worden meerdere cluster gemaakt adh bridging amplification Per cluster: sequencing by synthesis Een foto van iedere cluster (tijdens het sequencing by synthesis) generation sequencing/sequencingtechnology.ilmn

32 NGS Targeted sequencing van gdna Betekenis van een variatie Classificatie van somatische varianten bij mlc testing van kankerstalen Sukhai et al, 2015 Wat is het verschil tussen een somatische variant en een genetische variant?

33 NGS Targeted sequencing van gdna Betekenis van een variatie Classificatie van somatische varianten bij mlc testing van kanker stalen Sukhai et al, 2015

34 NGS Targeted sequencing van gdna Betekenis van een variatie Classificatie van somatische varianten bij mlc testing van kankerstalen Sukhai et al, 2015 Belangrijke definities: actionable: variant is geassocieerd met gekende doelgerichte therapie / patiënt prognose / respons op therapie. Of de identificatie van de variant heeft implicaties op de diagnose/classificatie met een impact op de behandeling als gevolg. VUS / variant with unknown significance: de actionablility is (nog) niet gekend of werd aangetoond als zijnde niet actionable SNP / single nucleotide polymorfisme: is een 1veranderde nucleotidencode voor een bepaald gen die bij een dusdanig groot percentage van de populatie voorkomt dat niet meer van een mutatie kan worden gesproken. Volgens de definitie komen polymorfieën bij meer dan 1% van de populatie voor. In geval van meer zeldzame genveranderingen (voorkomen minder dan 1%) wordt van mutaties gesproken.

55 NGS Targeted resequencing van gdna STAP 3: Alle stalen samen op een flow cell brengen bridging amplificatie

56 NGS Targeted resequencing van gdna STAP 2: Verrijking van de targetsequenties uit je panel Toevoeging van adaptoren: binding sequences Nodig voor bridging amplification primer sequences een identificatie barcode (specifiek voor je patiënt)

57 NGS Targeted resequencing van gdna STAP 3: Alle stalen samen op een flow cell brengen Op de flowcell worden meerdere cluster gemaakt adh bridging amplification Per cluster: sequencing by synthesis Een foto van iedere cluster (tijdens het sequencing by synthesis) generation sequencing/sequencingtechnology.ilmn

58 NGS Targeted resequencing van gdna Betekenis van een variatie

59 NGS Targeted sequencing van gdna Betekenis van een variatie classificatie voor genetische varianten voor overdraagbare, genetische condities Plon et al, 2008 Belangrijk bij BRCA want daar verworven/somatisch alsook genetische mutaties

63 NGS Targeted resequencing van gdna STAP 3: Alle stalen samen op een flow cell brengen bridging amplificatie

Vergelijkbare documenten

Detectie van chromosomale imbalances mbv Next Generation Sequencing (NGS)

Detectie van chromosomale imbalances mbv Next Generation Sequencing (NGS) Winand Dinjens, KMBP Afdeling Pathologie Laboratorium voor Moleculaire Diagnostiek w.dinjens@erasmusmc.nl Week van de Pathologie