Identificatie van MRSA met behulp van de Real-time PCR en de klassieke PCR methode

Transcriptie

1 T Identificatie van MRSA met behulp van de Real-time PCR en de klassieke PCR methode Linsey Boutmans, Kevin Degenaers, Melissa Matthys, Yao Wu MRSA/Methicilline Resistente Staphylococcus aureus: ziekenhuisbacterie DOEL: MRSA uit 10 stalen identificeren op moleculair niveau door detectie van 2 genen WAT: NUC-gen => Thermonuclease precursor specifiek voor Staphylococcus aureus MecA-gen => PBP2a = eiwit dat werking van β-lactam-antibiotica inhibeert HOE: Klassieke PCR + gelelektroforese voor NUC-gen Real-time PCR voor MecA-gen (methicilline-resistentie) RESULTATEN: NUC-gen : fel bandje = positief = Staphylococcus aureus MecA-gen: vroege stijging van curve = positief = Resistent INTERPRETATIE: NUC + MecA + => MRSA NUC + MecA - => niet-resistente Staphylococcus aureus NUC - MecA + => resistente niet-stapylococcus aureus NUC - MecA - => niet-resistente niet-stapylococcus aureus gen MecAgen PCR time!! NUC-

2 T Identificatie van MRSA Maxime Clement, Soumaya el Fallah Kimberly Rombaut Ons project gaat dit jaar over MRSA, meticiline resistente Staphylococcus aureus, een ziekteverwekkende bacterie die door de jaren heen resistent is geworden voor verschillende antibiotica waaronder meticilline. Wij hebben een DNA extractie uitgevoerd op verschillende bacterieculturen, waarmee een andere groep een PCR reactie moest uitvoeren om te identificeren welke van deze culturen nu eigenlijk MRSA s zijn. Naast deze DNA extractie hebben we ook onderzoek gevoerd in ziekenhuizen en rust- en verzorgingstehuizen om te bekijken wat er nu gebeurt als er iemand besmet is met MRSA. Er is 1 standaardprotocol dat algemeen gevolgd moet worden, maar elk ziekenhuis/rust- en verzorgingstehuis heeft door de jaren heen hier kleine variaties op ontwikkeld, zoals bv: hoe moet men iemand behandelen die allergisch is aan de producten die normaal gebruikt worden.

3 T MRSA microbiologisch onderzoek Avakimyan Amalya, Bouzahzah Chaymae, Benamari Nadia & Vanhove James Als opdracht voor ons project moesten we via microbiologisch onderzoek MRSA identificeren en het genproduct PBP2 aantonen wat verantwoordelijk is voor de resistentie van Staphylococcus aureus voor meticilline. MRSA betekend Meticillineresistente Staphylococcus aureus. Meticilline is een penicillinederivaat en net zoals penicilline een β-lactamantibiotica. Dit antibiotica werd ontwikkeld omdat er kiemen van Staphylococcus aureus resistent waren geworden voor penicilline. Tijdens het labo hebben we eerst een gramkleuring uitgevoerd en daarna gebruikelijke testen ingezet. Onze identificatie is vooral gebaseerd op de Chromagar, PbP2 test en coagulase omdat we hier geen tegenstrijdige resultaten verkregen.

4 ! " #! $%&' (&$ (&! &%$! & rt-pcr verraadt griepvirus

5 TOpzuiveren van plasmides uit een bacteriekweek Seline Daems, Sarah Nagels, Sarah Scheirs, Sarah Verkroost We kregen twee bacteriekolonies met een verschillend plasmide. De ene bacteriekolonie bevat een lege vector pegfp en de andere vector bevat hetzelfde plasmide maar met een insert, vreemd ingebracht DNA. Een vector gebruikt men om vreemd DNA in een cel of organisme te brengen. We moeten beide bacteriekolonies laten opgroeien en opzuiveren, daarna kunnen we het DNA uit de bacterie halen, dit is de plasmide. Dit opzuiveren van het bacterieel DNA gebeurt via een midiprep procedure. Als de plasmide is opgezuiverd gaan we er de zuiverheid en concentratie van nagaan, via spectrofotometrie. We willen ook weten of het DNA dat we hebben ingebracht op de plaats zit waar we het hadden verwacht. Dit kunnen we nagaan door te werken met restrictie-enzymen. Restrictie -enzymen herkennen bepaalde plaatsen in het DNA die ze kunnen knippen, ieder heeft zijn specifieke sequentie die hij herkent. We kennen de volledige sequentie van het plasmide hierdoor kunnen we voorspellen op welke plaats het enzym gaat knippen.

6 T PROLIFERATIEKENMERKEN: VERO-CELLIJN Zeynep Dogru, Jamila Huysmans, Nina Jansoone, Katja Verbeuren, Wendy Verbeuren Tijdens dit project trachten we meer te weten te komen over de proliferatiekenmerken van nierepitheelcellen van de Afrikaanse groene aap, nl. de Vero-cellen. Dit zullen we verwezenlijken door de cellen in verschillende condities te laten groeien. De door ons gekozen condities zijn: * groei in normale omstandigheden * groei in afwezigheid van CO2 * groei in groeimedium met een verlaagd percentage FCS Vervolgens volgen we de groei van de Vero-cellen gedurende 10 dagen op door elke dag de cellen te tellen m.b.v. telkamers. Met deze informatie kunnen we dan besluiten trekken

7 TIdentificatie van Clostridium Difficile toxine Robin Schellekens, Simon Beeckman Tamara Goyvaerts en Sophie Leens Clostridium Difficile is een anaerobe bacterie die de darm koloniseert na intensief antibiotica gebruik, vaak produceert deze kiem een toxine die leidt tot een ontsteking in de dikke darm. Daarom is het zeer belangrijk om dat toxine in vloeibare ontlastingsstalen op te sporen. Dit toxine proberen we op te sporen aan de hand van celkweek en met behulp van een commerciële kit.