GC of HPLC, that s the question?!

Transcriptie

1 GC of HPLC, that s the question?! door Ir. Nico Vonk Avans+ Breda.

2 Toepassingsgebied van de chromatografische technieken WP HT- GC

3 Monster matrix Mengbaarheid met de mobiele fase (HPLC) Vluchtig (GC, < 400 C) Complexiteit van de samenstelling Concentratie range & detecteerbaarheid Vervuiling van injector & kolom Ongewenste residuen: niet vluchtige bestanddelen, polymeren, zouten, vetten, eiwitten, water (bij GC)

4 Sample derivatisering HPLC: vooral gericht op detectie Verbetering van de selectiviteit Verbetering van de gevoeligheid Afschermen actieve groepen aan het molecuul GC: component stabiliteit & vluchtigheid Verlaging van de polariteit Eliminatie piek tailing en adsorptie Geen ontleding bij injectie

5 Draaggassen Belangrijke facetten: Gasvoorziening (cilinders, generatoren) Viscositeit Analysetijd Zuiverheid Reactiviteit Detectiemethode Veiligheid Prijs Verkrijgbaarheid helium?

6 Gasfilters

7 Criteria voor HPLC solvents geschikt voor de kolom bruikbaar in de detector UV golflengte cut-off Refraction index zuiverheid viscositeit ontgassing prijs veiligheid

8 Blanco water-modifier gradient

9 4-solvent gradiënt pomp met lage druk menging

10 Electronic Flow Control Ref: J.V. Hinshaw, LCGC 19(4), (2001).

11 Invloed van type draaggas op de analysetijd

12 Type modifier & selectiviteit MeOH-H 2 O THF-H 2 O MeOH-THF-H 2 O

13 ph controle, buffers, reagentia Zouten zijn slecht oplosbaar in organische modifiers De opgegeven ph van een mobiele fase geldt alleen voor het waterige deel Systeem na gebruik schoonspoelen met water/ modifier (zelfde %) zonder zouten Bufferoplossingen vers aanmaken

14 Met buffer, ph = 7.0 Zonder buffer

15 Rheodyne HPLC injectiekraan

16 Direct Split Splitless On-column PTV Algemene & selectieve injectietechnieken voor CGC Gasinjectie (kranen) Headspace Dynamische headspace / purge-and-trap Thermodesorptie Pyrolyse Groot volume injectie (LVI)

17 PTV Injector

18 Guard kolom koppeling

19 Positie van een retention gap Connector

20 Structuur van GC fasen

21 Elutievolgorde van verschillende oplosmiddelen

22 GC Bleed generators Kolom stationaire fase Glas wol in de liner Uitstekend voor betere verdamping en reproduceerbaarheid Probleem => Ghost peaks en bleeding door: Septa bleed produkten Septa deeltjes Onvoldoende deactivering van glaswol

23 Hoge temperatuur applicatie van Cholestanyl derivaten met GC-MS Column : 30 m x 0.25 mm VF-Xms, df = 0.25 µm Oven : 60 C--> 300 C, 5 C/min Detection: Automass Quadrupole Symmetrical Peaks Virtually No Bleeding Ref: Mme Canaff,

24 Verschillende typen HPLC fasen

25 Selectiviteit van RPLC kolommen 1. Dirithromycin (antibiotic) 2,3. Degr. products ACN/MeOH/buffer(pH =7.5) = 44/19/37 40 C, UV 205 nm Ref: V.R. Meyer Hüthig Verlag

26 Deeltjesgrootte vs efficiëntie (H-u curve) Kleinere deeltjes: efficiënter & sneller

27 U-HPLC met 1.5 µm deeltjes Kolom: 30 x 4.6 mm, 1.5 µm dp ΔP = 550 bar! 72 sec

28 Invloed CGC kolom diameter op efficiëntie & snelheid

29 Invloed ID kolom op scheiding en analysetijd N th =

30 Snelle scheiding van oplosmiddelen 1 methanol 2 methyl formate 3 ethanol 4 acetonitrile 5 acetone 6 methylacetate 7 chloromethane m x 0.15 mm ID, CP-Sil 5 CB df = 2 µm 65 C, 4 min -->200 C, 50 C/min On-column inj. met 0.32 mm precolumn MEK 9 THF 10 toluene min Ref: Weesp, I.Dijkstra

31 UV-DAD Detector

32 Opbouw vlam ionisatie detector (FID)

33 GC-MS Injector Transferline Ion Trap Turbomolecular pump Roughing pump GC MS

34 Ionisatie technieken voor LC-MS ESI of APCI hyphen MassSpec

35 hyphen MassSpec Applicatie gebieden van de verschillende ionisatie technieken

36 GC of HPLC? Volwassen techniek Zeer stabiel Betrouwbare mobiele fase Goede kolomkeuze Hoge kolom efficiency Complexe injectie Uitontwikkeld? Zeer veel applicatiegebieden Complex eluens Onderhoudsgevoelige apparatuur Lastige kolomkeuze Hoge selectiviteit Veel innovaties

37 Hartelijk dank voor uw aandacht! Samen verder voor uw kwaliteit! Stand nr. 1A120